“反转实习课”教学模式在组织胚胎学实习教学中的应用及评价

目的为了对组织胚胎学实习教学进行改进,开展"反转实习课"教学模式研究并对其进行评估。方法对2015级临床及基础医学专业五个班级共140位学生进行教学改革,其中临床5班和基础2班采取"反转实习课"教学模式,另三个班级为对照组,采取传统教学方式。应用学生主讲、教师补充、师生互动的教学模式进行组织胚胎学实习教学;应用考试成绩统计对比及问卷调查方法对教学效果进行评价。结果 "反转实习课"组的理论及实习成绩均显著高于传统教学组,总成绩高分比例大于传统教学组。问卷调查显示,93%参加"反转实习课"的同学表示喜爱这种教学模式,68%未参加"反转实习课"的同学表示接受并希望组胚实习课实行该改革。结论"反转实习课"教学模式有助于激发学生的学习兴趣,提高学习能力和学习成绩。

小檗碱对局部脑缺血组织中HIF-1α表达的影响

目的研究大鼠局部性脑缺血再灌注损伤时,小檗碱(BE)对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及脑神经元凋亡的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞再灌注组(MCAO/R组)、假性治疗组(DMSO组)、小檗碱10mg/kg治疗组(BE10组)、小檗碱20mg/kg治疗组(BE20组)、小檗碱40mg/kg治疗组(BE40组)。治疗组在术前48h、24h及术后6h腹腔注射相应剂量药物,观察各组大鼠神经行为学缺陷;再灌注7d,TTC染色观察脑梗死体积变化;再灌注24h,制备脑组织切片分别作Nissl染色、免疫组织化学染色、TUNEL标记及免疫荧光双标记。结果BE20、BE40组神经功能较MCAO/R组有明显改善(P<0.05),但BE10组神经学评分与MCAO/R组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同剂量BE治疗均可以减小梗死灶体积(P<0.05),且呈现剂量依赖性。Nissl染色可见BE治疗组皮质神经元结构较清晰,胞体肿胀、核固缩、核溶解程度较模型组及假性治疗组明显减轻,淡染区域减小;免疫组织化学法观察到,BE组HIF-1α、Caspase-3、BNIP3、VEGF及TUNEL标记的阳性细胞数减少;免疫荧光双标记显示HIF-1α与BNIP3、Caspase-3及TUNEL阳性颗粒共表达于细胞中。结论BE可能通过降低HIF-1α水平并下调其下游的BNIP3和VEGF的表达,从而减少凋亡因子Caspase-3的作用而发挥神经元保护作用。

四氯化碳诱导性肝纤维化大鼠肝组织骨形态发生蛋白-7的表达

目的探讨四氯化碳(CCl4)诱导性肝纤维化大鼠的肝组织纤维化与骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达的相互关系。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和肝纤维化组。对照组大鼠每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),肝纤维化组每周一、四背部皮下注射60%CCl4橄榄油(0.3ml/100g),连续注射6、10、16和21周。实验结束时处死大鼠,取肝中叶,石蜡包埋、切片。行天狼猩红染色,观察肝组织胶原纤维的增生情况;行BMP-7免疫组织化学染色和Western blotting检测,观察肝组织BMP-7的表达。结果天狼猩红染色显示对照组大鼠仅在肝门静脉及门管区看到少量的胶原纤维,各肝纤维化组大鼠均可见肝组织呈明显的胶原纤维增生,且随着时间的延长,肝纤维化程度逐渐加重;免疫组织化学染色显示,对照组大鼠肝组织中可见极少量的BMP-7表达阳性的细胞,6周肝纤维化组大鼠可见较多的BMP-7阳性表达细胞,但随着实验时间的延长,BMP-7阳性细胞呈递减的趋势,至21周肝纤维化组大鼠肝组织中基本呈阴性表达;Western blotting法检测大鼠肝组织BMP-7的表达结果与免疫组织化学的结果基本一致。结论CCl4诱导性肝纤维化大鼠肝组织BMP-7的表达与肝纤维化的程度呈负相关的趋势,推测BMP-7可能对肝纤维化具有一定的保护作用。

人肿瘤坏死因子-α基因转导绒癌耐药细胞系体外耐药逆转的研究

目的 将人肿瘤坏死因子 alpha(hTNF α)基因导入已建立的绒癌耐药细胞系 ,观察hTNF α基因转导后对绒癌细胞耐药性逆转的体外作用。方法 通过阳离子脂质体将hTNF α基因转导绒癌耐药细胞系 ,用新霉素筛选含hTNF α片段的单细胞克隆 ,用RT PCR方法和细胞免疫组织化学方法 ,检测转导hTNF α基因的耐药细胞中MDR1mRNA和MDR1蛋白 (P gp)表达水平的改变。采用四甲基偶氮唑蓝比色法 ,检测转导hTNF α基因的耐药细胞对足叶乙甙 (VP 16 )的耐药指数。结果 转导hTNF α基因后 ,绒癌耐药细胞中检测出hTNF αmRNA表达 ,转导hTNF α基因在mRNA水平能一定程度的逆转绒癌耐药细胞的MDR1,而在P gp蛋白水平几乎能完全逆转绒癌耐药细胞的MDR1。转导hTNF α基因的细胞的耐药指数明显降低。结论 hTNF α基因转导后 ,可通过调节MDR1的表达 。

JAK-STAT信号转导途径与中枢神经系统

作为一条新型信号转导通路 ,JAK STAT广泛参与细胞的生长、分化等过程。但目前对该通路的研究主要集中在造血及免疫系统 ,对其在中枢神经系统 (CNS)内的功能及作用机制尚没有完全阐明。本文对JAK STAT途径各成员在CNS内的表达、分布情况 。

硒对大鼠胃癌形成的作用及其与5-HT的关系

目的 探讨硒对MNNG(N甲基 N 硝基 N亚硝胍)诱导Wistar大鼠胃癌形成的作用及其与5 羟 色胺(5 HT)的关系。方法 用MNNG(20mg·kg-1)给大鼠灌胃,以诱导大鼠胃癌模型形成。用HE染色、显 微镜观察和AB PAS反应方法比较硒在MNNG诱导Wistar大鼠胃癌形成过程中的作用,用免疫组织化学SP 法和显微图像分析胃粘膜5 HT细胞的变化。结果 饮水中补充2mg·L-1和4mg·L-1的亚硒酸钠可以加 重胃粘膜的糜烂、出血,促进胃粘膜的肠上皮化生;在MNNG诱癌过程中发生了浆膜下平滑肌瘤,且亚硒酸钠 可以增加平滑肌瘤的发生率(P<0.05)。5 HT内分泌细胞的面数密度(NA)实验各组之间无显著差异,但是 低硒组平均光密度(MOD)明显高于正常对照组(P<0.01)。结论 在MNNG所致胃癌形成过程中亚硒酸钠 并不能降低大鼠胃癌的发生,其机制可能与胃粘膜5 HT的分泌成正相关。

三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸组织雄激素受体和c-kit表达的影响

目的通过检测三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸生精小管的形态学变化和睾丸组织雄激素受体(AR)和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达,验证三七复方合剂对慢性甲醛熏染的疗效。方法将18只SD雄性大鼠随机均分为对照组、甲醛组和治疗组,其中甲醛组和治疗组在甲醛熏染箱内熏染8周(8h/d),治疗组自第5周起每天给予三七复方合剂灌胃治疗,持续4周。实验结束时,所有大鼠称量体重和睾丸重量,组织切片行HE染色和免疫组织化学检测,观察睾丸生精小管的形态学变化及睾丸组织AR和c-kit的表达。结果甲醛组鼠重和睾丸重量明显下降;经三七复方合剂治疗后,鼠重和睾丸重量较甲醛组明显增加(P<0.05)。甲醛组大鼠的睾丸生精小管萎缩,小管上皮层细胞排列紊乱,精子明显减少;三七复方治疗4周后基本恢复正常,管腔内可见大量精子。甲醛组睾丸组织AR和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显减弱,治疗组生精上皮细胞的雄激素受体和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显增强(P<0.05),达到正常水平。结论较长时间甲醛熏染可使大鼠的体重和睾丸重量下降,生精小管损伤,睾丸组织中多种细胞AR和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达下降,三七复方合剂的应用有较明显治疗效果。

骨形态发生蛋白在人类肿瘤组织中的表达

骨形态发生蛋白（Bone morphogenetic proteins，BMPs）是转录生长因子8（transforming growthfactors-β，TGFβ）家族成员之一。研究显示，BMPs在心、。肾、肺、骨骼、神经组织等胚胎发育中起着非常重要的作用，它可调控细胞的增殖、分化、凋亡及决定细胞的命运，并对不同组织其作用不同。有资料显示BMPs在某些消化系统肿瘤中的表达发生改变，提示BMPs可能在肿瘤发生中发挥作用，但它对呼吸系统的肿瘤和疾病是否也有作用，目前尚不清楚，故本实验拟研究BMPs在呼吸系统肿瘤及某些疾病中的表达情况，为进一步探讨它在肿瘤及某些疾病中的作用提供证据。

三种改良的阮森吡啶-硝酸银法显示大鼠脊髓组织的比较

目的对3种改良的阮森吡啶-硝酸银法（Ranson）在显示大鼠脊髓组织中的应用进行比较。方法对照组采用传统的阮森吡啶-硝酸银法,即取大鼠的新鲜脊髓组织,在酒精中加纯氨水固定,经纯吡啶、硝酸银、还原液染色,常规石蜡切片并观察。实验组采用改良的阮森吡啶-硝酸银法,即分别采用NaOH溶液、Na2CO3溶液和95%酒精替换在对照组中使用的纯氨水,其他染色步骤同对照组。结果实验组的脊髓组织切片分别经3种改良的阮森吡啶-硝酸银法染色,神经元的胞体和突起均呈黄棕色,神经纤维呈棕褐色,切片染色结果与对照组比较无明显差异,尤以酒精替换组的染色效果为最佳。结论以改良的阮森吡啶-硝酸银法显示大鼠脊髓组织中神经元及神经纤维染色效果良好,方法更加简便易行,且避免了氨水的刺激气味,有利于改善教学和科研的局部工作环境。

医疗专业学生的局部解剖学教学实践与思考

随着医学教育改革的不断深入与发展,为我国医疗教育事业培养出高水平、高素质的各级医务人员将是我们医学院校义不容辞的责任.为临床本科生、硕士生、博士生开设相关等级的医疗基础课程是十分必要的,其中包括对于临床手术科室、医学影像学科室开设的具有实用性和针对性强的人体局部解剖学.

正丁醇脱水制作肝组织石蜡切片

肝、脾组织的细胞成分较多,细胞间隙较大,纤维结缔组织较少,其质地较脆,在采用乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋组织块时,常因脱水和透明的时间略长,而造成肝脾组织的石蜡切片易碎或在光镜下出现大量的裂纹而影响形态学的观察.因此,我们采用不同浓度的正丁醇替代乙醇和二甲苯的脱水和透明作用,所制作的肝组织石蜡切片有效地避免了上述的缺陷.

蒙古沙鼠的脑底动脉解剖及其在全脑缺血模型中的应用

目的研究蒙古沙鼠脑底动脉的形态,为制作全脑缺血再灌注模型提供解剖学依据.方法成年蒙古蒙古沙鼠30只,分别用铅丹混合液和乳胶混合液两种方法灌注,甲醛固定,铅丹组用X线机拍片观察.乳胶组用去骨暴露血管直接观察.分别观察蒙古沙鼠脑底动脉的构成及分支、分布情况.结果蒙古沙鼠的脑底动脉来自颈内动脉系和椎-基底动脉系,颈内动脉的主要分支有:大脑前动脉、大脑中动脉、大脑后动脉,基底动脉的主要分支是小脑上动脉.颈内动脉及其分支与基底动脉及其分支之间未见任何交通支.结论蒙古沙鼠的脑底动脉无后交通动脉,没有完整的大脑动脉环.颈内动脉系和椎-基底动脉系为两个独立的供血系统.为制作全脑缺血的两血管阻塞模型提供了天然的条件,本文对此进行了进一步的验证.

人胚胎生殖细胞（hEG）的体外培养、鉴定及其自发分化

人胚胎干细胞(hESC)、人胚胎原始生殖细胞(hEGC)以及人胚胎瘤细胞(hEC)统称为人胚胎干细胞。人胚胎干细胞属于多潜能干细胞，多潜能干细胞系的获得不仅可在体外研究早期人胚的发育，而更重要的是为移植和治疗退行性疾病提供细胞和组织来源，所以分离和获得足够量的多潜能干细胞一直是人们感兴趣的课题。

养血清脑颗粒对蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后的神经保护作用

目的探讨养血清脑颗粒对蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后的神经保护作用。方法用两血管阻塞法(2-VO)结扎30 min再灌注损伤模型,将蒙古沙鼠随机分为假手术组、模型组和手术前90min灌胃法给药预防组。用Nissl染色法观察蒙古沙鼠海马CA1区细胞的变化;用免疫组织化学方法观察海马CA1区表达谷氨酸盐合成酶(GlSyn)和Caspase-3阳性细胞数量的变化;TUNEL法检测细胞凋亡。结果蒙古沙鼠全脑缺血再灌注1d及2d预防给药组Nissl染色结果显示,海马CA1区存活细胞数量比模型组明显增多(分别为P<0.01,P<0.05);再灌注5d预防给药组海马CA1区存活细胞数量与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。再灌注1d及2d预防给药组海马CA1区表达谷氨酸盐合成酶(G1 Syn)的阳性细胞量较模型组明显减少(分别为P<0.01,P<0.05);再灌注5d预防给药组海马CA1区免疫阳性细胞数量与模型组相比无显著性差异(P>0.05);Caspase-3的表达在再灌注1d时预防给药组免疫阳性细胞数量与模型组比较有显著性升高(P<0.05),但是再灌注2d及5d时预防给药组免疫阳性细胞数较模型组无显著降低(P>0.05)。TUNEL结果显示预防给药组凋亡细胞相应减少。结论养血清脑颗粒能通过谷氨酸盐合成酶选择性抑制兴奋性氨基酸谷氨酸的神经毒性作用,减少神经细胞的凋亡,从而发挥神经保护作用。

氧化损伤与内质网应激在四氯化碳致大鼠肝脂肪变性中的作用机制

肝脂肪变性是长期饮酒、肥胖、药物中毒等致脂肪肝形成过程中重要的中间阶段,严重的脂肪堆积会导致肝细胞坏死或肝硬化,但是有关肝脂肪变性的分子机理目前仍不十分清楚.本实验利用四氯化碳建立大鼠肝脂肪变性模型,四氯化碳处理组较对照组肝脏丙二醛含量增加68%,内质网应激标志蛋白GRP78mRNA水平和蛋白质水平表达均明显增加;人肝癌细胞株HepG2体外培养中,加入四氯化碳处理后内质网发生应激,并导致SREBP1表达增加且活化.结果表明,四氯化碳导致的肝脂肪变性与肝细胞的氧化损伤和内质网应激有关,其分子机理可能为内质网应激发生后促进SREBP1转录因子的表达与活化,SREBP1在细胞核内参与生脂相关酶如HMGCoA还原酶等基因的诱导表达,生脂相关酶含量的增加进一步使肝细胞甘油三酯、胆固醇合成增加,脂质的异常堆积导致了肝脂肪变性的发生.

莉芙敏对去卵巢大鼠下丘脑视前区5-HT1AR和5-HT2AR表达的影响

目的:观察去卵巢大鼠应用黑升麻异丙醇提取物——莉芙敏(ICR)治疗1～4周后,免疫组化方法检测5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)和5-HT2AR在大鼠下丘脑视前区表达的变化情况,为莉芙敏缓解围绝经期潮热症状的机制研究提供形态学依据。方法:雌性大鼠分为假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)、OVX后戊酸雌二醇治疗(OVX+E2)组和OVX后ICR治疗(OVX+ICR)组,每组40只。所有大鼠术后恢复2周后,再用相应的药物分别治疗1,2,3,4周,麻醉,心脏灌注,取脑,制作冰冻切片。免疫组化法观察各组大鼠下丘脑视前区5-HT1AR和5-HT2AR的表达。结果:①OVX组1～4周时大鼠下丘脑视前区5-HT1AR阳性细胞数量和吸光度均较同期Sham组增加;ICR和戊酸E2治疗1～4周后,OVX+E2组和OVX+ICR组大鼠下丘脑视前区室周带表达5-HT1AR的阳性细胞数量和吸光度均较同期OVX组减少。②下丘脑视前区中间带和外侧区5-HT2AR阳性细胞数量和吸光度的变化:OVX组大鼠,1～4周均较同期Sham组增加;ICR和戊酸E2治疗1周和2周后,OVX+E组和OVX+ICR组较同期OVX组增加;治疗3周和4周后,OVX+E2组和OVX+ICR组均较同期OVX组减少。结论:5-HT1AR和5-HT2AR在去卵巢大鼠下丘脑视前区的表达量均增加;ICR和戊酸E2治疗后,5-HT1AR在大鼠下丘脑视前区的表达量减少,而5-HT2AR在下丘脑视前区的表达先增多后减少。ICR可能通过调节下丘脑视前区体温调节中枢的5-HT1AR和5-HT2AR的表达,以缓解围绝经期的潮热症状。

四氯化碳诱导大鼠肾细胞凋亡的研究

目的观察四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肾形态结构和肾细胞凋亡的变化。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、2周CCl4组和6周CCl4组,每组5只。对照组背部皮下注射橄榄油(0.12 ml/100 g鼠重),CCl4组以0.3 ml/100 g鼠重背部皮下注射60%CCl4橄榄油。2周CCl4组和6周CCl4组大鼠分别于实验的第3周和7周的第1 d处死。肾石蜡切片苏木精-伊红染色,光镜观察肾组织形态学,免疫组织化学显示Caspase-3、Bax、TUNEL观察肾细胞凋亡。结果对照组肾小球和肾小管结构均正常。2周和6周CCl4组的肾小球结构正常,2周CCl4组病变较、6周CCl4组肾皮质近端小管管腔狭小,上皮细胞浊肿,空泡变性,微绒毛脱失。对照组和2周CCl4组Caspase-3、Bax免疫组织化学显色未见阳性细胞表达;而6周CCl4组则在近髓质处的皮质内,近端小管上皮细胞的胞质呈现棕黄色阳性反应。TUNEL显色2周CCl4组可见肾皮质内近端小管上皮细胞核和少量的肾小球细胞核呈阳性表达,而6周CCl4组在大量的远曲小管及少量近端小管的上皮细胞核呈阳性表达。结论CCl4诱导性肾损伤大鼠,2周时肾组织的近端小管上皮及少量肾小球毛细血管内皮细胞发生凋亡,而损伤6周时,肾皮质近端小管受损,上皮细胞变性;远曲小管上皮细胞发生凋亡。

缺氧诱导因子-1α抑制剂对大鼠局部脑缺血再灌注损伤的影响

目的研究大鼠局部脑缺血再灌注损伤时,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂2-甲氧雌二醇(2ME2)对损伤脑组织的影响。方法雄性SD大鼠60只随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞再灌注组(MCAO组)、假性治疗组(DMSO组)、2ME2治疗组(2ME2组)。治疗组在术后1h腹腔注射相应剂量药物。观察各组大鼠神经行为学缺陷;再灌注7d,TTC染色观察脑梗死体积变化;再灌注24h,Western blotting检测HIF-1α及其下游基因的表达变化;制备脑组织切片分别作Nissl染色、免疫组织化学染色及原位缺口末端标记(TUNEL)。结果2ME2组神经功能较MCAO及DMSO组有明显改善(P<0.05),同时,2ME2组梗死面积明显减小(P<0.05)。Western blotting结果显示,HIF-1α的表达经2ME2治疗后降低,其下游基因VEGF、BNIP3及Caspase-3的表达有同样的变化。Nissl染色可见2ME2治疗组皮质神经元结构较清晰,胞体肿胀、核固缩、核溶解程度较模型组及假性治疗组明显减轻,淡染区域减小;免疫组织化学法观察到2ME2组HIF-1α、Caspase-3、BNIP3、VEGF及TUNEL标记的阳性细胞数明显减少(P<0.05)。结论2ME2可能通过降低HIF-1α水平并下调其下游的BNIP3和VEGF的表达,降低血脑屏障的通透性并减少凋亡因子Caspase-3的作用,发挥神经元的保护作用。