MS-MLPA方法在Prader-Willi综合征及Angelman综合征基因诊断中的应用

目的检测甲基化特异性的多重连接依赖的探针扩增（MS-MLPA）方法的敏感性和可靠性，以寻求一种简单、重复性好、精确度高的用于Prader-Willi综合征（PWS）和Angelman综合征（AS）的基因诊断方法。方法DNA提取试剂盒提取基因组DNA，然后，用DNA纯化试剂盒进行纯化。用MS-MLPA试剂盒Me028对临床诊断的2例PWS和4例AS患儿进行基因检测分析。扩增的PCR产物用测序仪ABI310进行基因型分析，最终所得数据用GeneMarkeT软件进行分析。MS-MLPA的检测结果用甲基化特异性聚合酶链反应进行验证。结果4例As中3例源于母源染色体15q11-q13缺失，1例源于父源染色体15q11-q13单亲二倍体或印记中心缺陷；2例PWS中1例源于父源染色体15q11～q13缺失，1例尚不能明确原因。结论MS-MLPA是一种简单、高效、准确、可靠的基因检测方法。

多重连接依赖的探针扩增方法对原发性智力低下患儿进行亚端粒重排分析

目的了解原发性智力低下伴单发或多发畸形患儿中染色体亚端粒重排的发生率，寻找智力低下的致病原因。方法180例符合本组入选标准的原发性智力低下患儿，抽取外周血，乙二胺四乙酸钠（EDTA）抗凝。提取基因组DNA并进行纯化。用多重连接依赖的探针扩增（MLPA）方法的试剂盒P036B／C和P070进行检测，对使用2个试剂盒均存在相同异常的样本，再选用针对异常区域特异性的试剂盒P096、P064和P023鉴定或判断发生异常片段的大小。MLPA主要实验步骤包括：DNA变性、分子杂交、连接反应和特异PCR扩增，扩增的PCR产物用ABI3100测序仪进行基因型分析，最终所得数据用GeneMarker软件进行分析。结果在180例原发性智力低下患儿中发现13例存在染色体亚端粒重排（7％）：其中12例为致病性，均为新生突变；1例2号染色体长臂末端缺失（2qdel）来源于表型正常的父亲。结论亚端粒重排是原发性智力低下伴单发或多发畸形的致病原因。