乙酰唑胺对水孔蛋白-1表达的抑制与细胞内pH及Ca^(2+)的关系

为明确乙酰唑胺对水孔蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)基因表达的抑制是否与其对细胞内pH和Ca2 + 浓度的影响有关 ,采用激光共聚焦扫描显微镜的技术观察不同培养条件下 (培养液中含或不含NaHCO3) ,10 - 5mol·L- 1 乙酰唑胺对原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞内pH和Ca2 + 浓度的影响 ,同时用免疫荧光法观察给药 1d、3d、7d后AQP1表达的变化。结果显示在含NaHCO3组 ,乙酰唑胺处理 7d后 ,使细胞内的H+ 探针的荧光强度由 91 81± 5 4 4降至 39 5 8± 3 10 ,Ca2 + 探针荧光强度由 18 2 3± 1 0 2降至 11 5± 1 0 3,AQP1蛋白荧光强度由 4 4 4± 1 86减少到2 5 91± 1 97;在不含NaHCO3组 ,细胞内pH和Ca2 + 浓度均无明显变化 ;但AQP1蛋白的荧光强度由 4 3 15± 2 97明显减少到 2 3 85± 1 92。结果表明乙酰唑胺对细胞内pH和Ca2 + 浓度的调节依赖于细胞外液HCO3- 的存在 ,而它对AQP1表达的抑制与细胞内pH和Ca2 +

灵芝孢子油及添加维生素E灵芝孢子油对NRK-52E细胞氧化损伤的作用比较

灵芝孢子油是从灵芝孢子粉中提取的油状脂质物,其中的不饱和脂肪酸和三萜类灵芝酸是其主要活性成分。是由于其中的不饱和脂肪酸易氧化挥发,研究人员通过添加维生素E以求解决难题,但目前对添加维生素E的灵芝孢子油抗氧化应激活性的系统研究未见报道。因此选用灵芝孢子油(GLSO)及添加5%维生素E的灵芝孢子油(GLSO+VE)2种样品,作用于H2O2处理的大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞,以评价、比较对氧化应激损伤的保护作用。结果表明,GLSO和GLSO+VE均能显著性增加NRK-52E细胞存活率,提高抗氧化酶的活性,降低氧化产物水平。比较可知添加维生素E可显著降低灵芝孢子油的细胞毒作用,并在一定程度上增加其抗氧化活性。此次试验初步证实了灵芝孢子油中添加维生素E对抗细胞氧化损伤的增强作用,为添加维生素E以增加灵芝孢子油稳定性的研究提供更多理论依据和支撑数据。

灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的研究灵芝多糖(GlPS)抗肿瘤作用及其机制。方法通过相差显微镜和间接免疫荧光的方法鉴定了人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。采用MTT法检测GlPS对人前列腺癌细胞(PC-3M)和HUVECs增殖的影响。检测GlPS对PC-3M细胞与HUVECs粘附的影响。采用transwell双层小室观察GlPS对PC-3M迁移穿过单层HUVECs的影响。结果GlPS对PC-3M无直接细胞毒作用,对HUVECs增殖无显著性作用。GlPS能够减少粘附和迁移穿过单层内皮细胞的肿瘤细胞数目。结论灵芝多糖通过抑制肿瘤细胞粘附并迁移穿过内皮细胞发挥其抗肿瘤作用。

河豚毒素对钠通道的影响及其可能的镇痛机制

河豚毒素为强效钠通道阻滞剂 ,它可通过阻断钠通道而影响细胞膜动作电位的产生。其中河豚毒素耐受性钠通道在损伤组织中的高表达为寻找新一代有效镇痛药提供了新靶标。

河豚毒素单用及与indoxacarb联合应用的镇痛抗炎作用

目的:观察河豚毒素单用及河豚毒素与indoxacarb联合应用的镇痛抗炎作用。方法:实验于2004-09/2005-01在北京大学医学部神经精神药理实验室完成。选择ICR小鼠240只,按随机数字表法分为24组,每组10只。①醋酸扭体实验:110只小鼠分为阴性对照组、阳性对照组(吗啡,5mg/kg)、单用河豚毒素组(0.79,0.39,0.19μg/kg)、联合给药组犤河豚毒素(0.19μg/kg)+indoxacarb(1.4,2.8,28mg/kg),河豚毒素(0.19,0.39,0.79μg/kg)+indoxacarb(5.6mg/kg)犦。给药40min后,腹腔注射致痛剂6g/L冰醋酸溶液(0.01mL/g)。观察并记录15min内小鼠扭体反应次数。扭体抑制率(%)=(阴性对照组平均扭体次数-给药组平均扭体次数)/阴性对照组平均扭体次数×100%。②甲醛实验:50只小鼠分为阴性对照组、阳性对照组(吗啡,5mg/kg)、单用河豚毒素组(0.19μg/kg)、联合给药组犤河豚毒素(0.19μg/kg)+indoxacarb(1.4,2.8mg/kg)犦。给药40min后,小鼠右后足背皮下注射致痛剂9.2g/L甲醛(生理盐水配制)20μL/只。将小鼠舔、咬右爪的时间长度作为疼痛反应的指标。观察并记录0～5min,15～30min反应时间。抑制率(%)=(阴性对照组平均反应时间-给药组平均反应时间)/阴性对照组平均反应时间×100%。注射甲醛4h后,将小鼠断头处死,之后自膝关节切脚,称重,比较左右足差异,以此代表炎症程度。③坐骨神经慢性轻度结扎损伤实验:80只小鼠分为阴性对照组、阳性对照组(吗啡,5mg/kg)、单用河豚毒素组(0.19,0.39,0.79μg/kg)、联合给药组犤河豚毒素(0.19μg/kg)+indoxacarb(1.4,2.8,5.6mg/kg)犦。75mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠。用细铜丝在坐骨神经上结扎2次。在术前及术后第1,3,5,7,9,11,13天测定热板潜伏期。第15天给药后15,30,45,60min测定小鼠热板潜伏期。结果:纳入动物240只,均进入结果分析。①单独使用河豚毒素(0.19,0.39,0.79μg/kg),扭体抑制率分别为22.2%,31.3%,39.2%,其抑制率与浓度存在剂量依赖关系。将河豚毒素(0.19μg/kg)与不同浓度的indoxacarb联合给药发现,扭体抑制率均显示升高趋势,达到38.6%,46.1%,50.6%,65.3%。②在早期(0～5min),单独使用河豚毒素(0.19μg/kg)能够减少小鼠舔脚时间,河豚毒素与indoxcarb(1.4,2.8mg/kg)两者联合给药显著减少小鼠舔脚时间,抑制率达到49.3%,50.2%,与吗啡的镇痛强度相差不多(抑制率为57.5%)。在晚期(15～30min),单独使用河豚毒素(0.19μg/kg)能够显著减少小鼠舔脚时间,将河豚毒素与indoxacarb(1.4,2.8mg/kg)两者联合给药,其作用极其显著,抑制率高达97.2%,92.4%,远远超过吗啡的镇痛强度(抑制率为79.7%)。③单独使用河豚毒素(0.19μg/kg)能够显著增强抗炎活性,抑制率为66.3%;将河豚毒素(0.19μg/kg)+indoxacarb(1.4,2.8mg/kg)两者联合用药,其作用极其显著,抑制率高达75.2%,124.2%,远远超过吗啡的抗炎活性(抑制率仅为28.7%),而吗啡与阴性对照组相比差异无显著性意义。④单独使用河豚毒素(0.19μg/kg)能够显著增强热板潜伏期的变化率(P<0.05),能显著缓解结扎坐骨神经引起的小鼠痛觉过敏现象。将河豚毒素(0.19μg/kg)+indoxacarb(1.4,2.8,5.6mg/kg)两者联合用药,未看到显著的热板潜伏期的变化。结论:河豚毒素具有一定镇痛作用,能够抑制甲醛引起炎症性疼痛和水肿;河豚毒素联合小剂量indoxacarb具有协同镇痛抗炎作用。

中国汉族人群细胞色素P_(450)2E1基因多态性与肺癌的相关性

目的：研究中国汉族人群中细胞色素P4502E1基因多态性与肺癌的相关性。方法：应用PCR-RFLP方法研究了260例正常对照者和54例肺癌患者细胞色素P4502E1 RsaI基因多态性。结果：对照组A型（c1c1）152例，B型（c1/c2）101例，C型(c2/c2)7例，分别占58.5%, 38.8%和2.7%，c2等位基因频率为0.22；肺癌组A型（c1c1）25例，B型（c1/c2）26例，C型(c2/c2) 3例，分别占46.3%, 48.1%和5.6%, c2等位基因频率为0.30。结论：中国汉族人群中细胞色素P4502E1基因多态性与肺癌无明显相关性。

河豚毒素单用及与吗啡合用对大鼠福尔马林致痛的影响

目的:探讨河豚毒素(tetrodoxin,TTX)单用及与吗啡合用的镇痛效应。方法:采用大鼠福尔马林致痛实验,分别单独肌注河豚毒素及将微量河豚毒素(0.39μg·kg^(-1),0.19μg·kg^(-1))与吗啡联合给药,比较合用是否具有镇痛增强或协同效应。采用概率单位法计算镇痛的半数抑制量(ID_(50))。结果:TTX的镇痛半数抑制量(ID_(50))为0.8μg·kg^(-1);单用吗啡的ID_(50)为2.6mg·kg^(-1);TTX0.39μg·kg^(-1)(1/50 LD_(50))和0.19μs·kg^(-1)(1/100 LD_(50))与吗啡合用,吗啡的镇痛ID_(50)分别下降为0.5mg·kg^(-1),1.1mg·kg^(-1),联合用药的性质经检验具有协同作用。结论:河豚毒素对福尔马林所致疼痛具有镇痛作用,与吗啡联合应用具有协同镇痛效应。

Indoxacarb的镇痛抗炎效应

目的:观察Indoxacarb的镇痛抗炎作用。方法:实验于2004-09/2005-01在北京大学医学部神经精神药理实验室完成。选择ICR小鼠150只,分别进行小鼠醋酸扭体实验、甲醛实验和坐骨神经慢性轻度结扎损伤实验。①小鼠醋酸扭体实验:60只小鼠随机分为阴性对照组、吗啡对照组、Indoxacarb1.4,2.8,5.6,28mg/kg组,每组10只。肌肉注射给药后40min,腹腔注射致痛剂6g/L冰醋酸溶液(0.01mL/g)。观察并记录15min内小鼠扭体反应次数。②小鼠甲醛实验:40只小鼠随机分为阴性对照组、吗啡对照组、Indoxacarb1.4,2.8mg/kg组,每组10只。肌肉注射给药后40min,小鼠右后足背皮下注射致痛剂9.2g/L甲醛(生理盐水配制)20μL/只。将小鼠舔、咬右爪的时间长度作为疼痛反应的指标。观察并记录0～5min,15～30min反应时间。注射甲醛4h后,将小鼠断头处死,之后自膝关节切足,称重,比较左右足差异,以此代表炎症程度。③小鼠坐骨神经慢性轻度结扎损伤实验:50只小鼠随机分为阴性对照组、吗啡对照组、Indoxacarb1.4,2.8,5.6mg/kg组,每组10只。75mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠。用细铜丝在坐骨神经上结扎2次。在术前及术后第1,3,5,7,9,11,13天测定热板潜伏期。第15天给药后15,30,45,60min测定小鼠热板潜伏期。热板潜伏期的变化率(%)=(给药后各时间点测定的热板潜伏期-给药前基值)/给药前基值×100%。结果:150只小鼠在实验过程中无脱落,均进入结果分析。①Indoxacarb1.4～28mg/kg可显著减少小鼠扭体次数,抑制率分别为22.7%,32.0%,47.0%和49.4%;扭体抑制率与浓度存在剂量依赖关系。②Indoxacarb1.4mg/kg在早期(0～5min)能够显著缩短皮下注射甲醛后小鼠舔脚时间,显著抑制疼痛反应,Indoxacarb2.8mg/kg能极显著抑制晚期(15～30min)的疼痛反应。③Indoxacarb1.4mg/kg能够显著缓解甲醛所致小鼠足跖水肿。④Indoxacarb5.6mg/kg极显著增强热板潜伏期的变化率,能显著缓解结扎坐骨神经引起的小鼠痛觉过敏现象。结论:在3个小鼠镇痛模型中,indoxacarb均具有明显的镇痛作用,且具有剂量依赖关系。在镇痛剂量时能抑制皮下注射甲醛引起的水肿,抗炎效果明显。

灵芝抗肿瘤活性和免疫调节作用的研究进展

本文综述灵芝提取物和灵芝多糖的抗肿瘤活性和免疫调节作用及其机制。灵芝提取物和灵芝多糖在体内显著地抑制动物移植性肿瘤生长 ,将二者直接加到肿瘤细胞培养基中 ,既不抑制肿瘤细胞增殖 ,也不促进其凋亡 ,灵芝多糖在体内的抗肿瘤机制是由免疫学机制介导的。最近的研究指出 ,灵芝多糖肽在体内、外由于清除巨噬细胞中叔丁基氢过氧化物 (tBOOH)产生的自由基 ,而具有抗氧化作用。此外 ,灵芝多糖还促进体外培养的鼠骨髓衍生的树突状细胞 (DC)成熟 。

HPLC柱前衍生法测定兔血浆中海星甾醇(A1998)浓度

目的:建立高效液相色谱柱前衍生法测定兔血浆中海星甾醇(A1998)浓度。方法:用2,4-二硝基苯肼(2,4-DNPH)将A1998 C-17位上的2个羰基衍生化,形成双腙,以提高检测灵敏度。选用A1998的同系物3β-羟基雄甾-5烯-17酮己二酸酯(C6)作为内标。色谱条件:采用Agilent Zorbax Exend C18反相色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为100%甲醇,流速2.0 mL·min-1,检测波长为360 nm。结果:血样中A1998浓度在0.05-10μg·mL-1范围内具有良好的线性关系(r=0.9998),最低检测浓度为0.05μg·mL-1。回收率大于80%,日内及日间精密度RSD分别为3.2%-15%和6.7%-11%。结论:本方法灵敏、准确、实用,能够满足动物药物代谢动力学研究的要求。

海星甾醇琥珀酸酯(A1998)脂肪乳静脉给药后在大鼠体内的组织分布

目的:研究海星甾醇琥珀酸酯(3β-羟基雄甾-5烯-17酮琥珀酸酯,A1998)脂肪乳经静脉给药后在大鼠体内的组织分布经时变化规律。方法:大鼠单次静脉注射20 mg.kg-1A1998脂肪乳后,分别于不同时间点剖取各组织脏器,采用HPLC柱前衍生法测定大鼠各组织脏器药物含量。结果:A1998在大鼠体内主要分布于肺、肝、脾等器官,给药后15 min,测得肺脏药物含量最高(32.73±3.87)μg.g-1,脾脏(23.47±8.04)μg.g-1及肝脏(14.87±1.63)μg.g-1次之,均远高于同时间点大鼠血药浓度。A1998在上述3脏器中药物浓度维持时间亦久,至给药36 h后仍能检测出较高浓度,分别为(4.37±2.74),(4.69±2.37)及(8.30±5.96)μg.g-1。静注A1998后心脏及肾脏中药物浓度的经时变化与同时间点血药浓度相似。在胃、小肠、子宫、卵巢、体脂中未检测到药物分布。结论:大鼠单次静脉注射20 mg.kg-1A1998脂肪乳后,药物在血浆中消除迅速,并快速分布于各组织。A1998在大鼠体内的组织分布具有较强的选择性,各组织中药物浓度经时变化结果提示对肺、肝、脾等脏器具有高度的亲和力。

贯叶连翘提取物和盐酸赖氨酸复方抗炎效应及其可能的作用途径

目的:观察贯叶连翘提取物和盐酸赖氨酸复方对小鼠角叉菜胶实验模型和醋酸诱发小鼠腹膜炎模型的影响,进而分析其抗炎作用和可能的作用途径。方法:实验于2003-05/2003-10在北京大学医学部药理系完成。清洁级健康ICR小鼠120只,雌雄各半,随机分为6组,每组20只,即赖金丝组、阳性对照组、贯叶连翘提取物166,333,666mg/kg组和阴性对照组,以上各组小鼠分别给予赖金丝(贯叶连翘提取物和盐酸赖氨酸按2∶1混合)500mg/kg,阿司匹林300mg/kg,贯叶连翘提取物166,333,666mg/kg组和羧甲基纤维素钠2.5g/L灌胃,每天1次,连续给药7d。每个实验组组再随机均分为两组,分别制造小鼠角叉菜胶实验模型和醋酸诱发小鼠腹膜炎模型,观察赖金丝和贯叶连翘提取物对角叉菜胶致小鼠足肿胀、炎症渗出液中前列腺素E2含量的影响,以及对醋酸诱发的腹膜炎中腹腔毛细血管通透性的影响。结果:ICR小鼠120只全部进入结果分析,没有脱失。①赖金丝和贯叶连翘提取物对角叉菜胶引起的小鼠足肿胀的影响:与阴性对照组比较,赖金丝组和贯叶连翘提取物166,333,666mg/kg剂量组角叉菜胶所致的小鼠足肿胀程度都显著减轻,差异有显著性意义(P<0.05～0.01)。赖金丝对足肿胀的抑制率(43.93%),略高于贯叶连翘提取物333mg/kg(39.07%)。②赖金丝和贯叶连翘提取物对小鼠足炎症渗出液中前列腺素E2含量的影响:与阴性对照组比较,赖金丝组、贯叶连翘提取物666mg/kg剂量组炎症反应中前列腺素E2的生成被显著抑制,差异有显著性意义眼(0.182±0.036),(0.166±0.074),(0.234±0.061)A/g,P<0.05演。③赖金丝对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响:与阴性对照组比较,赖金丝组、贯叶连翘提取物666mg/kg剂量组腹膜炎中腹腔毛细血管的通透性显著抑制,差异有显著性意义眼(0.096±0.033),(0.093±0.021),(0.134±0.041)A,P<0.05演。结论:赖金丝能显著抑制角叉菜胶引起的足肿胀和前列腺素E2的生成,抑制小鼠腹膜炎的腹腔毛细血管通透性,并且赖金丝复方较单用贯叶连翘提取物抗炎效果理想。

CFTR与囊性纤维化

囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)是一种cAMP激活的ATP门控性氯离子通道,表达于气道,消化道和生殖道上皮细胞的顶部质膜中。囊性纤维化(CF)是白人中最常见的遗传性疾病之一,由CFTR基因突变造成。对CFTR基因的破译使人们进一步了解CF的发病机制,并为该疾病的诊断提供了新的线索。

姜黄素通过诱导人内皮细胞产生自噬抗氧化应激损伤

目的：研究姜黄素在过氧化氢（H2O3）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化应激损伤中的作用，并且研究其细胞可能的保护机制。

河豚毒素与局麻药联合应用对家兔角膜局麻作用的研究

目的 研究河豚毒素 (tetrodotoxin ,TTX)与局麻药联合应用的局麻作用。方法 家兔角膜感觉试验 (角膜反射 )。结果 单独使用阈下浓度的TTX、丁卡因、利多卡因对家兔角膜均无明显影响 ,而阈下浓度的TTX与阈下浓度的利多卡因或丁卡因联合应用 ,给药后 5min即产生局麻作用 ,2 0min达到高峰 ,作用维持约 40min ,局麻增强作用与药物的给药顺序无关 ,实验中没有发现TTX的全身毒性反应。