淫羊藿苷对大鼠成骨细胞核结合因子α1、骨形成蛋白-2、骨形成蛋白-4 mRNA表达的影响

目的:研究淫羊藿苷对成骨细胞增殖、分化以及对核心结合因子α1(Cbfα1)、骨形成蛋白-2(BMP2)、骨形成蛋白-4(BMP4)mRNA表达的影响。方法:以酶序列消化法从新生大鼠颅骨分离、培养成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色和钙结节茜素红染色法鉴定细胞。取第3～5代细胞,用CCK-8法检测经0 mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L的淫羊藿苷处理24、48、72 h后成骨细胞的增殖情况。分别用流式细胞技术和对硝基苯酚法检测上述各浓度的淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞的增殖指数和碱性磷酸酶(ALP)活性。用real-timePCR法检测10-6mol/L淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4mRNA表达的改变。结果:10-8～10-4mol/L的淫羊藿苷对成骨细胞均无增殖促进作用,但可促进成骨细胞的ALP活性;10-6mol/L淫羊藿苷可以上调成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4mRNA的表达。结论:淫羊藿苷可能是通过上调Cbfα1、BMP2和BMP4mRNA的表达而促进成骨细胞的分化。

大鼠下颌骨牵引成骨过程中骨改建机制的探讨

目的观察骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)和细胞核因子 KB 受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)在下颌骨牵引成骨(distraction osteogenesis,DO)过程中的表达,揭示 DO 过程中骨改建的规律。方法 42只成年雄性 SD 大鼠下颌骨牵引成骨模型,牵引程式:间歇期5 d,牵引速度0.2 mm×2次/d,牵引期6 d,稳定期4周。分别于间歇期结束(术后第5天)、牵引期结束以及稳定期第1、2、3和4周6个时间点切取标本,X 线检查后制片,HE染色、抗洒石酸酸性磷酸酶染色、OPG 和 RANKL 免疫组织化学染色及半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测并分析了 OPGmRNA 和 RANKLmRNA 表达及 RANKE/OPG 比值。结果稳定4周骨断端由新生骨连接,在所有时间点 OPG 和 RANKL 在成骨细胞、髓腔衬里细胞和新形成的骨细胞内共表达;OPG 表达至牵引期结束达到峰值并维持至稳定期2周;RANKL 表达在稳定期1周达峰值,并维持至稳定期3周;RANKL/OPG 比值则持续升高至稳定期3、4周达峰值。结论牵引成骨过程中的骨改建主要由成骨细胞、髓腔衬里细胞和骨细胞通过旁分泌 OPG 和 RANKL 完成;稳定期第3、4周是骨吸收的活跃期。