颞下颌关节骨关节病髁状突软骨细胞体外培养及细胞生物学特性研究

目的 :从兔的颞下颌关节骨关节病模型动物获得髁状突软骨细胞并行体外培养。方法 :采用部分关节盘手术切除的方法制造颞下颌关节骨关节病模型 ,组织大体观察、超微结构观察和组化检测方法确定骨关节病的存在。在此基础上 ,通过机械分离、胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法从骨关节病髁状突软骨组织中获得软骨细胞 ,进行体外环境下的贴壁培养 ;通过软骨细胞特异性蛋白的免疫组化方法进行细胞鉴定。四甲基偶氮唑盐法比较病理模型细胞与正常细胞的增殖能力差异。结果 :上述颞下颌关节骨关节病模型全面地模拟了骨关节病变关节软骨组织的特征 ;利用机械分离、胰蛋白酶胶原酶联合消化的方法成功地从骨关节病髁状突软骨组织中分离出软骨细胞并在体外贴壁条件下培养成活 ;应用特异性的Ⅱ型胶原多克隆抗体和聚合性糖胺多糖单克隆抗体对培养细胞进行免疫组化检测鉴定 ,均显示阳性。骨关节病髁状突软骨细胞的增殖能力高于正常细胞。结论 :成功地建立了骨关节病髁状突软骨细胞的体外模型 ;骨关节病早期的髁状突软骨细胞表现出增殖活跃的特性。

颞下颌关节骨关节病髁突组织细胞凋亡的研究

目的 研究颞下颌关节骨关节病髁突组织中软骨细胞凋亡发生的特点,探讨细胞凋亡在颞下颌关节骨关节病发病机制中的作用。方法 通过手术切除部分关节盘的方法建立颞下颌关节骨关节病动物模型,15 d-6个月内采用TUNEL法标记髁突各相应时段的凋亡细胞,结合相应组织学变化,观察、分析颞下颌关节骨关节病髁突组织中细胞凋亡发生的特点。结果 关节盘损伤后软骨产生明显应激性修复增殖反应时,凋亡细胞主要集中于关节表面的纤维层中;随着关节软骨和骨组织不断改建,软骨组织中逐渐出现大量的细胞凋亡现象,主要发生于表面纤维层与增殖层,尤其集中在软骨细胞簇中;在软骨组织消耗严重时,浅表区域内的细胞凋亡现象逐渐减少,肥大钙化层中出现了较多的凋亡细胞。结论 颞下颌关节骨关节病髁突软骨组织中存在过量凋亡的现象,软骨细胞异常增殖与过度凋亡导致软骨基质自身调节机制的破坏可能是骨关节病发生的重要原因之一。

颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞雌激素受体β差异表达的研究

目的探讨大鼠颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞雌激素受体(βERβ)的差异表达。方法25只SD大鼠随机分为实验组(15只)和对照组(10只)。实验组以去除左侧部分关节盘的方法建立大鼠颞下颌关节骨关节病模型,术后3个月处死动物,取其髁突软骨细胞进行培养,采用免疫组化、逆转录聚合酶链反应、肽质量指纹谱(PMF)和Westernblot等方法观察软骨细胞中ERβ蛋白和mRNA的表达。结果PMF显示,ERβ是软骨细胞线粒体蛋白质组的成分,Westernblot、逆转录聚合酶链反应和免疫组化结果显示,ERβ在实验组细胞和线粒体中表达水平较对照组降低(P<0.01)。结论ERβ可能通过线粒体途径参与了颞下颌关节骨关节病的病理过程。

健康成人戴用软垫紧咬运动时脑激活区域的功能性磁共振成像研究

目的 应用功能性磁共振成像技术探讨戴软垫紧咬运动时人脑功能活动区域定位,试图从中枢机制探 讨垫的治疗作用机理。方法 选取10名健康成人受试者,采用时段设计,任务状态与休息状态交替。任务状态 分2组设计,实验组为戴软垫紧咬运动,对照组为不戴软垫紧咬运动。采用Elscint GE2.0T磁共振系统成像, 应用SPM99软件进行数据后处理及组分析。结果 实验组10名受试者在单侧或双侧的运动皮层、感觉皮层、前额 叶皮层、颞叶皮层、前运动皮层、脑岛、额盖、基底神经节壳核、顶叶皮层及扣带回等区域有明显激活。组分析结果 显示双侧运动皮层(BA6)、右侧感觉皮层、双侧基底神经节壳核、双侧脑岛等区域均出现明显激活,其中左侧运动皮 层的激活程度明显强于右侧。对照组紧咬运动组分析结果显示双侧运动皮层(BA6)、双侧感觉皮层、双侧基底神经 节壳核、左侧顶叶皮层等区域均出现明显激活,其中运动皮层的激活双侧基本对称。结论 戴软垫后紧咬运动 脑皮层激活区域尤其是运动皮层和感觉皮层的变化可能是垫作用机理的中枢机制。

兔髁状突软骨细胞藻酸盐凝胶三维培养体系的建立

目的 :建立兔髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系。方法 :利用机械与酶消化的方法获得均一性的兔髁状突软骨细胞 ,在二维贴壁培养条件下增殖至P2代 ;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质 ,进行三维培养 ;分别对培养细胞凝胶微球行石蜡包埋与树脂包埋切片 ,对三维培养条件下的软骨细胞行组织化学、免疫组织化学检测和超微结构观察。藻酸盐凝胶三维体系培养 6周后 ,以EDTA分解凝胶 ,收获培养的软骨细胞 ,免疫组化法检测三维体系中收获的软骨细胞的蛋白合成能力。结果 :藻酸盐凝胶三维培养体系中的髁状突软骨细胞生长状态良好 ;培养 6周后从凝胶体系中收获细胞的软骨特异性功能蛋白表达水平较转入三维体系前未见降低 ,培养细胞保持了良好的分化表型。结论 :成功地建立了髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系 ,在该体系中 ,软骨细胞生长状态与功能蛋白分泌能力良好。