以NF-_κB为靶的药物筛选方法的建立与应用研究

核转录因子-3B(NF-4B)通过调节其靶基因的表达,在机体免疫应答、炎症与肿瘤的发生发展过程中发挥着重要功能,因此也被认为是预防和治疗肿瘤与炎症的理想靶点.pNiFty-SEAP质粒被成功地转入HEK293细胞,因此该转染细胞含有5×NF-5B基序的增强子、SEAP报告基因和Zeocin抗生素抗性筛选基因.通过检测报告基因表达水平可反映NF-6B的活化状态.在以pNiFty-SEAP/HEK293细胞为基础建立的筛选体系中,TNF7和PMA等已知的NF-8B激活剂能剂量与时间依赖性地促进NF-9B的活化,而PDTC和NAC等NF-:B抑制剂的作用则相反.该筛选体系不仅具有稳定、特异、高通量等特点,而且可同时检测NF-;B的激活剂与抑制剂,将为发现作用于NF-<B信号传导通路的抗肿瘤与免疫调节药物提供有效的实验方法.

DJ-1基因:抗帕金森病药物作用的可能新靶点

帕金森病是一种常见于中老年人群的神经系统退行性疾病,其发病与环境因素和遗传因素相关。DJ-1的基因突变和氧化损伤分别与家族性和散发性帕金森病相关。DJ-1基因突变或氧化损伤导致帕金森病的机制包括氧化应激、线粒体损伤和蛋白酶体损伤。此外,DJ-1还是散发性帕金森病的生物标记物,并且有可能成为抗帕金森病药物作用的潜在新靶点。

蛋白质分子伴侣和以其为靶的药物作用机制

蛋白质从新生态到天然态的折叠中 ,大多数都依赖于已经存在的功能蛋白质即蛋白质分子伴侣。在目前研究的 2 0多种分子伴侣中 ,对于Hsp6 0如E .coli中的GroEL和GroES的功能和结构研究得最多 ,也最详细 ,其主要功能是帮助非天然态的多肽折叠成具有生物活性的天然态功能蛋白质。蛋白质分子伴侣除折叠功能外 ,还可以作为药物如格尔德霉素 (geldanamycin ,GA)作用的靶点 ,GA通过与蛋白质分子伴侣Hsp90作用 ,影响其底物的正确折叠而被降解 ,达到其作用之目的。

大蒜提取物Z-ajoene对U937细胞增殖抑制作用机制的研究

目的 研究大蒜含硫化合物Z ajoene抗肿瘤作用的分子机制。方法 应用MTT法测定Z ajoene对不同白血病细胞株的生长抑制作用。采用流式细胞技术 (FACS)分析Z ajoene对U937细胞周期的影响以及对该细胞的诱导凋亡作用。用Western blot的方法检测Z ajoene对凋亡相关蛋白以及微管蛋白表达的影响。结果 Z ajoene对两种白血病细胞系HL6 0和U937有着相近的生长抑制作用 ,IC50 值均约为10 μmol·L-1。细胞周期分析发现 ,在给药初期和药物浓度较低时G2 /M期细胞数量明显升高 ;2 0 μmol·L-1Z ajoene作用 2 4h时 ,G2 /M期细胞比对照组升高约15 2 5 %。Z ajoene可以诱导U937细胞凋亡 ,并呈浓度和时间依赖性。实验结果表明 ,细胞凋亡过程中的关键蛋白酶caspase 3的激活及其底物PARP蛋白的裂解随着给药浓度和时间的增加而增加。此外 ,Z ajoene也产生以出现 2 3ku裂解带为特征的Bcl 2裂解。另外 ,实验浓度的Z ajoene对β 微管蛋白的表达有抑制作用 ,而对α 微管蛋白表达无明显改变。结论 Z ajoene能明显抑制U937细胞株的生长并可阻断U937细胞周期于G2 /M期 ,且这种阻断早于细胞凋亡。Z ajoene抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡和干扰微管蛋白聚合相关。

稀土离子对大鼠肝细胞核脂质过氧化的影响

用光度法测定丙二醛 (MDA)研究不同浓度La3 +,Ce3 +,Pr3 +,Nd3 +,Eu3 +对大鼠肝细胞核脂质过氧化的影响。结果表明 :稀土离子在 1×10 - 4 ～ 1× 10 - 6mol·L- 1 浓度范围内能抑制振荡温育或H2 O2 引起的脂质过氧化 ,且与浓度正相关。但是对大鼠肝细胞核用稀土离子处理一定时间 ,稀土离子Eu3 +对脂质过氧化的抑制作用明显减弱 。

四逆汤对肾性高血压大鼠血压的调节作用和机制

目的探讨四逆汤对肾性高血压大鼠血液内血管活性物质含量和主要靶器官血管活性物质表达的调节作用。方法健康♀Wistar大鼠24只,随机分为伪手术(SO)组、肾性高血压(RH)组和四逆汤治疗(ST)组,每组8只。根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型,应用RBF-2型大鼠尾动脉血压计测量血压,硝酸还原酶比色法测定血清中一氧化氮(NO)含量,放射免疫法测定血浆中内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量。免疫组化法测定心、脑、肾组织内皮素受体A(ETRA)、一氧化氮合酶(NOS)、AngⅡ和CGRP的表达。结果①ST组大鼠血压明显低于RH组(P<0.05)。②大鼠血清NO、血浆CGRP和ET含量ST组均明显高于RH组(P<0.05),AngⅡ含量无变化(P>0.05)。③大鼠心、肾ETRA表达水平ST组均明显低于RH组(P<0.05),但脑组织中含量差异无显著性(P>0.05);心脏eNOS表达水平ST组明显高于RH组(P<0.05),脑、肾iNOS表达水平ST组明显低于RH组(P<0.05);心、脑、肾CGRP表达水平ST组均低于RH组(P<0.05);心、肾AngⅡ表达水平ST组均明显低于RH组(P<0.05),但在脑差异无显著性(P>0.05)。结论四逆汤可能通过调节肾性高血压大鼠心、脑、肾内血管活性物质的表达及其血液内的有效含量,而发挥血压调节作用。

多肽GRGDS修饰的紫杉醇长循环靶向脂质体的体外评价

目的:本研究以甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(glycine-arginine-glycine-aspartic acid-serine,GRGDS)五肽修饰的脂质体作为抗癌药物-紫杉醇的载体,对其体外理化性质和细胞毒作用进行评价。方法:采用化学偶联合成DSPE-PEG-GRGDS,以此作为导向性材料,采用薄膜分散法制备载紫杉醇的PEG修饰长循环脂质体(GRGDS-SSL-PTX),并对脂质体的包封率、粒径和体外释放率等性质进行了考察,同时采用人卵巢癌SKOV-3细胞和人乳腺癌MCF-7细胞进行了体外细胞生长抑制的评价。结果:与普通紫杉醇长循环脂质体(SSL-PTX)相比,本研究制备的紫杉醇主动靶向脂质体(GRGDS-SSL-PTX)的粒径、包封率、载药量、体外释放及稳定性等理化性质无显著差异,包封率约为95%,平均粒径为(115.5±2.2)和(117.5±1.3)nm。冰冻蚀刻透射电镜观察结果表明,脂质体外观基本圆整且均匀分散。体外释放结果表明,12 h内分别有67.9%和72.3%的PTX从SSL-PTX和GRGDS-SSL-PTX中释放。体外细胞毒实验结果表明,GRGDS-SSL-PTX对人卵巢癌SKOV-3细胞和人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用均有增强,分别为SSL-PTX的1.42倍和2.12倍。结论:GRGDS五肽修饰的紫杉醇靶向脂质体成功制备,将有利于体内肿瘤的靶向治疗效果。

红树林植物海漆的化学成分(Ⅰ)

目的:从红树林植物海漆中寻找具有肿瘤抑制活性的先导化合物。方法:利用柱层析手段,结合波谱方法(ESI-MS,1D NMR和2D NMR)分离鉴定海漆的化学成分。结果:从红树植物海漆的石油醚部分分离纯化了10个次生代谢产物:蒲公英赛酮(1),3-羰基-18-烯-齐墩果烷(2),3,28-二羟基-羽扇豆醇(3),3-羰基-28-羟基-羽扇豆醇(4),3-羟基-18烯-齐墩果烷(5),邻苯二甲酰正二丁酯(6),邻苯二甲酸二乙基己酯(7),4-烯-3-酮豆甾烷(8),脱镁叶绿素A(9),脱镁叶绿素甲酯A(10)。结论:化合物1和7具有较弱的肿瘤抑制活性。

β-七叶皂苷钠抗大鼠主动脉血管形成作用及机制初探

目的:研究β-七叶皂苷钠对血管形成的作用及其作用机制。方法:采用大鼠主动脉片96孔板培养,检测β-七叶皂苷钠对体外血管形成的影响;采用MTT法研究β-七叶皂苷钠对ECV-304细胞增殖的影响;采用免疫组织化学法研究β-七叶皂苷钠对小鼠S180肉瘤内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。结果:β-七叶皂苷钠50μg.mL-1组在d1～d5对大鼠主动脉片血管出芽发生率有明显的抑制作用,抑制率均>39.0%;在d2～d6大鼠主动脉片血管相对面积明显小于阴性对照组,抑制率均>68.9%。MTT实验证明β-七叶皂苷钠对ECV-304细胞增殖具有明显抑制作用:100μg.mL-1抑制率为70.3%,50μg.mL-1抑制率为53.6%;免疫组织化学实验β-七叶皂苷钠1.4和2.8mg.kg-1组VEGF表达量均明显少于生理氯化钠溶液对照组。结论:β-七叶皂苷钠具有抑制血管形成的作用,其发挥作用的可能机制是抑制血管发生、内皮细胞的增殖及VEGF的表达。

西松烷二萜类海洋活性成分研究进展

综述了近年来海洋天然产物,127个西松烷二萜类化合物的分离、结构鉴定以及其生物活性研究进展,为海洋生物的合理开发利用提供科学依据。

温郁金茎叶化学成分研究

目的:研究温郁金Curcuma wenyujin地上茎叶部分的化学成分。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20等色谱方法进行分离、纯化,通过理化性质及波谱方法鉴定其化学结构。结果:从温郁金95%乙醇提取物的石油醚部分分离得到9个倍半萜类化合物,分别为:莪术二酮(curdione,1),新莪术二酮(neocurdione,2),反,反吉马酮(trans,trans-germacrone,3),顺,反吉马酮(cis,trans-germacrone,4),郁金烯酮(curcumenone,5),郁金二酮(curcumadione,6),异原郁金醇(isoprocurcumenol,7),欧亚活血丹内酯(glechomanolide,8),和二氢莪术二酮[(1R,10R)-(-)-1,10-dihydrocurdione,9]。结论:以上9个化合物均为首次从该植物地上茎叶部分分离得到。

红树植物内生真菌Penicillium s p.中一个醌类化学成分的研究

利用各种层析手段(反相ODS健合硅胶、葡聚糖凝胶LH-20柱层析等),从红树植物内生真菌Penicil-liumsp.的发酵液中分离纯化了1个醌类化合物,通过各种波谱实验(1D-NMR,2D-NMR以及ESIMS)确定其结构为:5-甲氧基-11,12,18,19-四羟基蒽醌(1)。

β-七叶皂苷钠对鸡胚血管新生的影响

目的:研究β-七叶皂苷钠对鸡胚血管新生的抑制作用。方法:采用平皿法,观察β-七叶皂苷钠对鸡胚卵黄囊和绒毛尿囊膜血管(chick chorioallantoic membrane,CAM)的作用。结果:β-七叶皂苷钠(100和500μmol·L-1,10μL／药膜)显著抑制卵黄曩血管网的发育,使血管走形发生改变。β-七叶皂苷钠(500和1 000μmol·L-1,10μL／药膜)能够显著抑制鸡胚绒毛尿曩膜血管生成,500μmol·L-1组作用12和24 h后其抑制率分别为59．7％(P<0．01)和54．5％(P<0．01),1 000μmol·L-1组作用12和24 h后抑制率分别为67．7％(P<0．01)和65．3％(P<0．01)。结论:β-七叶皂苷钠能显著抑制鸡胚血管的新生,可能成为抗血管形成抑制剂。

水峰调制下的3,4-Seco-olean-11,13-dien-4,15α,22β,24-tetraol-3-oic Acid的NMR结构解析

对海南半红树植物黄槿(Hibiscus tiliaceus)内生菌中提取的一个新化合物进行核磁共振结构解析的研究.在核磁共振测试时发现水峰信号与部分样品信号发生了重叠,直接影响了该化合物谱图数据的分析.本工作通过实验确证了在氘代二甲亚砜(DMSO-d6)溶剂中水峰化学位移与含水量之间的变化规律.依据该规律,利用定量加入纯水的方法对实际样品中的水峰信号进行了调制,解决了水峰信号与样品信号的重叠问题,得到了较理想的1HNMR,13CNMR一维谱和COSY,HMQC,HMBC等二维谱.利用核磁共振提供的信息完成了对新化合物结构的解析,确定该化合物为齐墩果烷三萜类化合物3,4-seco-olean-11,13-dien-4,15α,22β,24-tetraol-3-oic acid.

红树植物内生真菌Penicillium sp.中两个甾体化合物的研究

从红树植物内生真菌Penicillium sp.的发酵液中分离纯化了两个甾体类化合物,通过各种波谱实验(1D-NMR,2D-NMR,ESI-MS)确定为:麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(1)和麦角甾-5,7,22-三烯-3-醇(2),1对于3α-HSD脱氢酶在250μm浓度下有较弱的活性。

红树植物内生真菌Penicillium sp.的化学成分

应用各种层析手段,从红树植物内生真菌GT26158菌丝体的甲醇提取物中分离纯化了7个含氮化合物,结合多种波谱方法(ESI-MS,1D-NMR,2D-NMR),它们被鉴定为2′-deoxyuridine(1)、thymidine(2)、2′-deoxyad-enosine(3)、cyclo(tyrosyl-phenylalanyl,4)、serine(5),cyclo(seryl-tryptophyl,6)、alanine(7)。

红树植物内生真菌GT6105发酵产物的化学成分

目的从红树植物内生真菌中寻找具有酶抑制活性的次生代谢产物。方法利用各种柱层析手段,结合各种波谱方法分离鉴定红树植物内生真菌GT6105的化学成分。结果从红树植物内生真菌GT6105发酵液中分离纯化了12个化合物邻苯二甲酸二乙基己酯(1),阿魏酸(2),3,5-二羟基甲苯(3),邻苯二甲酸丁酯(4),2-羟基-3-苯丙酸(5),2,3-二羟基甲苯(6),3,4,5-三羟基甲苯(7),5-甲氧基-2,3-二羟基甲苯(8),对羟基苯甲酸(9),2,2-二甲基-1-苯并吡喃-6-醇(10),2,2-二甲基-6-羧基-苯并吡喃(11),4-(4-甲酰-2-甲氧-1-苯氧基)丁酸(12)。结论化合物12为首次从天然界分得,化合物2、10和11具有较弱的酶抑制活性。

烹调油烟提取物和燃煤颗粒物对豚鼠肺泡巨噬细胞自由基的体外诱导作用

目的探讨烹调油烟提取物和燃煤颗粒物对豚鼠肺泡巨噬细胞内源性自由基的体外诱导作用。方法采集北京市民用菜油油烟提取物和蜂窝煤燃烧颗粒物(PM10),制备样品,分别以终浓度为0、0.5、1.0、2.0mg/ml和0、1.25、2.50、5.00mg/ml的各4个剂量组染毒豚鼠肺泡巨噬细胞,每次实验设3个平行样,实验重复1次。以豆蔻酰佛波醇乙酯为阳性对照。采用电子自旋共振(ESR)自旋捕捉技术对烹调油烟提取物和燃煤颗粒物刺激豚鼠肺泡巨噬细胞产生活性氧自由基进行了实验研究。结果烹调油烟提取物、燃煤颗粒物及颗粒物丙酮提取后的剩余物均可刺激豚鼠肺泡巨噬细胞,引起呼吸爆发,产生羟自由基(·OH)。0、0.5、1.0mg/ml剂量组烹调油烟提取物的刺激作用比较,差异有统计学意义(P<0.05)。燃煤颗粒物及丙酮提取后剩余物的刺激作用,各剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。燃煤颗粒物的刺激作用明显大于丙酮提取后剩余物的刺激作用,差异有统计学意义(P<0.05)。表明颗粒物诱导自由基的作用来源于颗粒物中有机成分的化学刺激和颗粒物的颗粒组分的机械刺激两部分。结论烹调油烟提取物和燃煤颗粒物可诱导豚鼠肺泡巨噬细胞产生活性氧自由基,产生的自由基可能参与这些污染物的肺损伤及致突变、致癌作用。

基于吴茱萸汤相关功效从平滑肌角度探讨其质量控制的可行性

目的:观察吴茱萸汤对平滑肌的活性及其特点,并探讨其作为全方质量控制方法的可行性。方法:利用体外实验从组织水平对血管、胃、小肠和子宫平滑肌收缩活性进行观察。结果:吴茱萸汤对血管平滑肌具有先收缩后舒张的双向作用,降低胃平滑肌的张力,对小肠及子宫平滑肌收缩具有明显的抑制作用。作为君药的吴茱萸与吴茱萸汤结果相近。其它组成药物则没有明显的作用。结论:吴茱萸汤的这种对不同平滑肌的收缩舒张的不同作用,可以作为对该方综合评定的指标。