内源性二氧化硫抑制血管紧张素Ⅱ致心肌肥厚小鼠心肌细胞自噬的研究

目的 探讨内源性二氧化硫（SO2）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致心肌肥厚小鼠心肌细胞自噬的抑制作用。方法 9周龄健康C57BL小鼠16只,按随机数字表法随机分为野生型对照组（WT Con组）、野生型+AngⅡ组（WT AngⅡ组）;心肌特异性天冬氨酸氨基转移酶2（AAT2）转基因小鼠16只,按随机数字表法随机分为AAT2对照组（AAT2 Con组）、AAT2+AngⅡ组（AAT2 AngⅡ组）。每组8只。每只小鼠在背部皮下植入预装生理盐水或AngⅡ的胶囊渗透压泵,连续给药4周。检测4组小鼠全心重/体重（HW/BW）比值;HE染色观察心肌细胞结构变化;免疫组织化学染色检测心肌标志分子α重链肌球蛋白（α-MHC）的表达;高效液相色谱检测心肌组织SO2含量;Western blot检测内源性SO2生成酶AAT1和AAT2、心肌表型标志分子α-MHC和β-MHC以及心肌自噬标志分子Beclin-1、LC3、Atg4B以及p62蛋白表达变化。结果 与WT Con组相比,WT AngⅡ组心肌组织SO2含量显著降低（P<0.01）,AAT1蛋白表达无明显变化（P>0.05）,AAT2蛋白表达显著减少（P<0.05）,HW/BW明显增加（P<0.01）,心肌纤维明显增粗,免疫组织化学法显示心肌细胞浆中α-MHC蛋白表达明显减弱,Western blot结果显示心肌细胞α-MHC蛋白表达显著降低（P<0.01）,β-MHC蛋白表达显著升高（P<0.01）,心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高,Beclin-1和Atg4B蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低（均P<0.01）。与WT Con组相比,AAT2 AngⅡ组小鼠心肌组织SO2含量和AAT2蛋白表达显著升高（P<0.01）,AAT1的蛋白表达无显著变化（P>0.05）,HW/BW显著降低（P<0.05）,心肌纤维的增粗显著减轻,α-MHC蛋白向β-MHC蛋白的转化显著降低（P<0.01）,心肌细胞自噬水平显著降低。结论 内源性SO2/AAT2体系可抑制AngⅡ致小鼠心肌肥厚及心肌细胞自噬。

巯基修饰剂对硫化氢的离体心脏灌流效应的影响

目的观察巯基氧化剂及还原剂对大鼠离体心脏心功能的影响,以探讨巯基氧化剂二酰胺(diamide)及还原剂二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)对心肌活动的调节意义,并观察其对硫化氢的离体心脏灌流效应的影响。方法应用Langendorff灌流大鼠离体心脏,用生理浓度NaHS(100μmol.L-1)持续灌流20 min,测量心率(HR)、左室内压差(△LVP=左室收缩压-左室舒张压)、左室内压变化速率(±dp/dtmax)、冠脉灌流量(CPF)等指标;分别应用Diamide及DTT预灌流,后给予生理剂量NaHS灌流,观察其是否可以阻断NaHS的效应。结果生理剂量NaHS持续灌流20min内,可以明显抑制±dp/dtmax及△LVP(P<0.05),而对HR、CPF几乎没有影响。巯基氧化剂二酰胺可以大部分阻断H2S的心脏功能负性调节效应,而经巯基还原剂DTT灌流后,H2S可以发挥负性调节作用。结论内源性H2S可能通过作用于心肌组织蛋白质中Cys-SH位点,产生心肌的负性调节作用。

内源性二氧化硫及其生成酶在大鼠体内的生成与分布

目的:探讨内源性二氧化硫(SO2)及其生成酶谷氨酸草酰乙酸转移酶(GOT)在大鼠体内的正常分布。方法:选用Wistar大鼠,分别留取心、肝、肺、肾、主动脉、肺动脉、肠系膜动脉、肾动脉和尾动脉,应用高效液相色谱荧光法(HPLC)检测各组织中亚硫酸盐的含量;应用酶学法测定各组织中GOT酶活性及荧光定量PCR测定各组织中GOT mRNA的含量;原位杂交检测血管组织中GOT mRNA的分布。结果:心、肝、肺、肾、主动脉、肺动脉、肠系膜动脉、肾动脉和尾动脉中均含有一定量的亚硫酸盐,且以动脉血管中的含量较高;心、肝、肾等组织中的GOT酶活性及GOT mRNA含量明显高于动脉血管的含量;GOT mRNA主要位于血管内皮细胞和近内皮的血管平滑肌细胞。结论:SO2可在心血管系统内源性产生,动脉血管中SO2含量高于组织器官中的含量,GOT酶及GOT mRNA的含量在动脉血管中较低,这可能与局部代谢及作用有关。

硫化氢对自发性高血压大鼠血管炎症反应的调节作用

目的探讨新型气体信号分子硫化氢（H2S）对自发性高血压大鼠（SHR）血管炎症反应的调节作用。方法4周龄Wistar-Kyoto（WKY）雄性大鼠和SHR雄性大鼠分为4组：WKY大鼠对照组、SHR对照组、SHR＋硫氢化钠（NariS，H2S供体）组及SHR＋炔丙基甘氨酸（PPG，H2S生成关键酶抑制剂）组，饲养至9周。尾容积法测清醒时大鼠血压，免疫组织化学方法检测主动脉内皮细胞膜细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）和核转录因子抑制因子-α（IκB-α）的蛋白表达，原位杂交分析检测主动脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达。结果SHR对照组血压显著高于WKY对照组（P〈0．05），主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65明显高（P均〈0．01），胞浆IκB-α蛋白表达明显低（P〈0．01）。SHR＋NariS组血压显著低于SHR对照组，主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65蛋白表达明显低（P〈0．05），胞浆IκB-α蛋白表达明显增高（P〈0．05），SHR＋PPG组主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65蛋白表达更高（P〈0．05），胞浆IκB-α蛋白表达显著低（P〈0．05）。结论H2S可通过抑制SHR血管炎症发挥抗高血压效应。H2S的抗血管炎症效应可能通过上调IκB-α的表达，降低NF-κB p65的表达，抑制ICAM-1 mRNA的转录和蛋白表达实现。

线粒体膜钾通道阻断剂在硫化氢对大鼠心功能调节的意义

目的观察线粒体膜K。通道特异性阻断剂5-羟基葵酸盐（5-hydroxydecanoate，5-HD）对硫化氢（H2s）灌流的大鼠离体心脏心功能的影响，以探讨线粒体膜K。通道阻断剂在H2S调节心功能过程中的意义。方法应用Langendorff灌流大鼠离体心脏，用生理浓度NaHS（100μmol／L）持续灌流20min，测量心率、左室内压差（ALVP=左室收缩压-左室舒张压）、左室内压变化速率（±dp／dtmax）、冠状动脉流量等指标，分别应用非特异性KATP通道阻断剂格列苯脲、线粒体膜K。TP通道阻断剂5-HD预灌流，后给予生理剂量NaHS灌流，观察其是否可以阻断H2S的心功能效应。结果生理剂量NariS持续灌流20min内，可以显著抑制±dp／dtmax及ALVP（P〈0.05），而对心率、冠状动脉流量几乎没有影响。非特异性K。开通道阻断剂格列苯脲及线粒体膜K。通道阻断剂5-HD均可以大部分阻断生理剂量NariS对心功能的抑制效应。结论内源性H2S可以通过开放线粒体膜KATp通道，产生对心肌的负性肌力调节作用。