他莫西芬-十一酸睾酮联合治疗严重少(弱)精子症、分泌型无精子症

目的结合近来的文献报道以及临床材料,探讨生精障碍的药物治疗方案。方法 12例生精阻滞患者中分泌型无精子症4例,严重少(弱)精子症8例。采用他莫西芬-十一酸睾酮联合治疗,时间1～3月。结果治疗前后比较,患者精液体积无统计学差异,精子密度(少精子症)或精子数量(无精子症)具有统计学意义;血清FSH、LHT治疗后水平较治疗前提高,睾酮浓度无统计学差异。LSD-t检验显示,少精子症患者中,治疗后2月精子密度较治疗前明显提高(P=0.018);a级精子比例在治疗后1月(P=0.01)、治疗后2月(P=0.02)较治疗前明显升高。结论他莫西芬-十一酸睾酮联合应用,能提高精子数量,可以采用他莫西芬-十一酸睾酮联合治疗精子发生障碍。

Tpap基因在小鼠睾丸中的表达

背景:精子发生过程受许多特异分子及细胞间作用的严格调节,包括染色体结构变化及一系列特定基因程序性表达调控。长期以来由于缺乏合适的体内和体外研究模型,精子发生分子机制的研究进展较慢,尤其缺乏对关键调节基因的认识。目的:筛选与精子发生相关的基因,并分析其表达特点。方法:将4,9,18,35,54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因。然后通过反转录-聚合酶链反应分析差异表达基因在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达。结果与结论:对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过在NCBI与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是Tpap基因。该基因在4,9,18,35,54d和6月龄小鼠睾丸中杂交信号校正值分别是4.4(A)、12.9(A),262.4(P)、1136.7(P)、1617.5(P)和1128(P),表明4,9d小鼠睾丸中该基因无表达,18d小鼠开始表达,RT-PCR结果表明小鼠Tpap基因在小鼠9d及之前的睾丸中没有表达,在18d睾丸后开始表达,与基因芯片分析相一致。结果表明,Tpap基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠Tpap的表达与小鼠精子发生的过程有很强的一致性,推测该基因在哺乳动物精子发生中起重要作用。

树突状细胞在男性生殖系统中的作用

树突状细胞（dendriticcell，DC）是目前已知抗原提呈功能最强的抗原提呈细胞，是机体适应性T细胞免疫应答的始动者，又是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。近年来研究资料显示，DC在男性生殖系统发挥重要作用，特别是在生殖道炎症所致男性不育的病因中可能起关键性作用。文章综述了近年来的相关研究资料阐述DC在男性生殖道的表型和功能，探讨DC与男性不育之间的联系，旨在为男性不育的临床诊治提供新的思路。

686例生精障碍患者染色体核型与Y染色体微缺失分析

目的利用染色体核型分析及Y染色体微缺失基因检测方法探索无精子症及严重少精子症患者的遗传学病因。方法收集无精子症患者490例、严重少精子症患者196例,使用传统G显带方法进行染色体核型分析,并使用15个Y染色体序列标签位点进行基因检测,对检测结果进行统计学分析。结果 490例无精子症患者共检出染色体多态性49例(10%)、异常核型30例(6.12%),Y染色体微缺失70例(14.29%),196例严重少精子症患者共检出染色体多态性15例(7.65%),Y染色体微缺失22例(11.22%),检测结果具有统计学意义。结论无精子症及严重少精子症患者具有较高的染色体核型异常与Y染色体微缺失发生率。

胰岛素样生长因子Ⅱ基因在肾细胞癌中的印迹丢失和意义

目的:探讨肾细胞癌患者肾癌组织及其相应癌旁(>5cm)组织中胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因的印迹状态,初步研究其在肾细胞癌的发生、发展中的关系。方法:根据IGF-Ⅱ基因第9外显子具有ApaI位点多态性,用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性技术分析IGF-Ⅱ基因印迹状态。结果:30例肾细胞癌患者中癌及相应癌旁组织IGF-Ⅱ均发生杂合子基因型的有19例(63.3%),其中癌及相应癌旁组织均发生IGF-Ⅱ印迹丢失(LOI)13例(68.4%);癌组织发生IGF-Ⅱ LOI而其相应的癌旁组织未发生IGF-Ⅱ LOI为1例(5.3%);22例透明细胞性肾细胞癌中有10例(45.45%)癌及相应癌旁组织均发生LOI;5例乳头状肾细胞癌中有2例(40%)癌及相应癌旁组织均发生IGF-Ⅱ LOI;2例嫌色性肾细胞癌中有1例(50%)癌及相应癌旁组织均发生IGF-ⅡLOI;1例黏液样小管状和梭形细胞癌的癌组织发生了IGF-Ⅱ LOI而其相应的癌旁组织IGF-Ⅱ印迹正常。并且在14岁到68岁各年龄段都有IGF-Ⅱ LOI的发生,且发生频率接近,表明IGF-Ⅱ LOI的发生与肾细胞癌的病理类型及年龄相关性不大。本实验涉及的30例肾细胞癌中,按照TNM分类,8例T_1期肾细胞癌中有6例(75%)癌及其相应癌旁组织均发生了IGF-Ⅱ的LOI,1例(12.5%)在癌组织中发生IGF-Ⅱ LOI,但其相应癌旁组织中IGF-Ⅱ印迹正常。结论:IGF-Ⅱ LOI可能是肾细胞癌的早期发生事件,可能对其早期发生有重要作用。

外源性雌激素对男性生殖的影响研究进展

外源性雌激素是一类广泛存在于自然界并对机体正常内分泌系统产生明显干扰作用的化合物。它对机体的影响是多方面的，主要包括生殖系统、胚胎发育、肿瘤发生等，因而日益受到国内外生物医学界的高度重视。在生殖系统方面，外源性雌激素通过改变激素信号的传导，导致动物和人类生殖功能异常”。。但迄今为止，外源性雌激素引起男性生殖系统异常的作用机制仍然不清楚。本文就外源性雌激素对男性生殖的影响研究进展进行综述。

ACRV1在正常男性和弱精子症患者精液精子中的表达差异

目的研究精子顶体小泡蛋白-1（ACRVl）在正常人和弱精子症患者精液精子中的表达差异，探讨ACRVl在弱精子症发生机制中的作用。方法采用计算机辅助精液分析（CASA）技术对精液进行常规分析，经非连续密度梯度离心分离纯化正常男性和弱精子症患者精液精子，以排除生精细胞和白细胞的污染。采用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）和免疫印迹（Western Blot）方法，从mRNA和蛋白水平检测ACRVl的表达及其差异。结果Real．time PCR结果表明，ACRVl mRNA在弱精子症患者精子中的表达量明显低于其在正常对照组精子中的表达量，下降了5．9倍。Westem Blot发现ACRVl蛋白在弱精子症组较正常组下降，该结果与Real-time PCR结果相一致。结论ACRVl基因及蛋白在弱精子症患者精子中的表达下调可能与精子活力下降有密切关系，提示ACRVl基因及蛋白可能是导致弱精子症发生的原因之一。

精浆弹性硬蛋白酶、IL-6、IL-23在男性不育患者精浆中的表达及其临床意义

目的研究精浆弹性硬蛋白酶、白细胞介素(IL)-6以及IL-23在慢性生殖道炎症患者精液中的表达水平及其与精液参数的关系。方法收集男性不育患者精液标本60例,健康生育男性精液标本20例作对照组。每份标本按照世界卫生组织《人类精液检验与处理实验室手册》第五版标准进行分析处理,同时行白细胞CD45染色、精子染色质结构完整性实验以及采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测精浆弹性硬蛋白酶、IL-6和IL-23表达水平。结果精浆IL-6、IL-23与精子总数、存活率、活力具有显著负相关性,并且IL-6与精子DNA碎片化指数呈显著正相关性(r=0.645,P<0.01)。精浆IL-6、IL-23在两组之间差异具有统计学意义,且二者之间呈正相关(r=0.625,P<0.01)。精浆弹性硬蛋白酶表达水平与精液量、精子密度呈负相关性(P均<0.05)。结论精浆炎症因子弹性硬蛋白酶、IL-6和IL-23对诊断慢性生殖道炎症具有提示意义,并且精浆IL-6和IL-23可能对精液质量影响更大。

厚朴酚与和厚朴酚抗鼻咽癌作用机制研究

目的探讨厚朴中小分子化合物厚朴酚与和厚朴酚对鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法分别采用MTT比色法、细胞划痕实验、Transwell实验,观察厚朴酚与和厚朴酚对鼻咽癌细胞HONE1增殖、迁移、侵袭的影响。结果厚朴酚与和厚朴酚对鼻咽癌细胞HONE1有较显著的抑制增殖、迁移和侵袭效应,而且这种效应呈显著的剂量依赖性。结论厚朴酚与和厚朴酚能够抑制鼻咽癌肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,厚朴酚与和厚朴酚是具有开发潜力的抗癌小分子化合物。

DNA甲基化的世代传递

在过去的几年里,人们对表观遗传修饰中的DNA甲基化修饰有了新的认识。这种修饰作用决定了基因在何时何地表达,这一修饰作用不仅会贯穿生物体的整个发育过程,而且会遗传给下一代。异常的DNA甲基化修饰会导致复杂的突变,同样,这些突变亦有可能遗传到子代,进而影响到子代的生长发育。对DNA甲基化在世代间传递现象的探讨会为表观遗传机制的研究提供很好的模型,进而有助于生物医学方面的研究。本文就DNA甲基化世代传递方面的研究进展作一综述。

Stra8基因启动子逆转录病毒包装细胞株的建立

目的建立小鼠Stra8基因启动子控制绿色荧光蛋白EGFP表达（Pstra8-EGFP）的逆转录病毒包装细胞株，以方便地将Pstra8-EGFP转导到目的细胞，为生殖细胞鉴定分选提供基础。方法PCR扩增小鼠基因组DNA中的Stra8基因启动子片段，构建Stra8基因启动子控制表达的EGFP报告基因逆转录病毒质粒。将质粒脂质体法转染PT67病毒包装细胞，G418抗性筛选后，梯度稀释法将包装细胞单克隆化并扩增成多个细胞株。以包装细胞培养上清液感染NIH3T3细胞的所形成的G418抗性阳性细胞数定义病毒滴度，确定高滴度病毒包装细胞株。通过染毒小鼠骨髓间充质干细胞（mouse bone marrow mesenchymal stemcells，MSCs）验证该细胞株的Pstras8-EGFP转导效果。结果所建立的病毒包装细胞株培养上清液滴度达到1．3×10^6 cfu／ml。MSC经包装细胞培养上清液感染后，在（retinoicacid，RA）诱导下能表达EGFP蛋白。结论成功构建了将Pstras．EGFP转导到目的细胞的PT67逆转录病毒包装细胞株。

睾丸特异性启动子计算机识别方法研究

目的研究应用生物信息学技术对小鼠睾丸特异启动子进行识别、预测。方法分析睾丸特异性启动子序列和非睾丸特异性启动子序列,通过反式作用因子在两种序列中的对应密度比,确定识别特征,进行睾丸特异性启动子识别。结果收集了24条睾丸特异性启动子序列,分析得到9个反式作用因子及其特征向量。结论本方法对小鼠睾丸特异启动识别、预测具有较高的准确性。

基因敲除技术在睾丸功能研究中的应用

基因敲除（gene knock．out）是基因打靶的一种方法，是根据DNA同源重组的原理而设计的一项技术。通过DNA分子的同源重组，特异性地在基因组的某个位点引入预定的突变，进而获得基因型发生了改变的基因打靶小鼠，以研究目的基因的体内功能或相关疾病的致病机制。睾丸的主要功能是产生精子和分泌睾酮，在睾丸发育过程中，任何基因的突变或者是酶、蛋白质的缺失都会对睾丸的正常功能造成一定的影响，导致雄激素浓度、精子数目、精子形态、精子活动力等指标异常，进而影响男性的生育能力。近年来，在国内外的研究中，