溶栓剂蛋白质工程的新进展

介绍了国内外溶栓剂蛋白质工程方面的新进展，主要涉及了组织型纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ） 、尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｕＰＡ）、链激酶（ＳＫ） 、葡萄球菌激酶（ＳＡＫ） 、ＤＳＰＡ 及ＴＳＶＰＡ 的研究进展。一些ＰＡ 突变体及新型溶栓剂，如Ｋ２Ｐ、ＴＮＫＰＡ和ＳＴＡＲ等的临床实验结果表明它们在延长体内半寿期、增强对血纤维蛋白选择性和溶栓效率等方面有较大的改进。但溶栓治疗造成的颅内出血等局部性出血问题仍是目前的难题之一，说明新型溶栓剂的研制有很大潜力。

抗虫植物基因工程研究进展

虫害是造成农业减产的主要原因之一。据不完全统计,全世界每年因虫害引起的作物减产达总产量的15％,损失高达数千亿美元。在我国,因虫害水稻减产在lO％以上;小麦减产近20％;

植物耐旱基因工程研究进展

随着生物技术的发展 ,特别是基因工程技术的迅速发展 ,植物耐旱已从传统的植物生理研究转向分子方向 .目前植物耐旱研究的分子生物学方法主要是基因工程技术 ,包括植物耐旱相关基因的克隆 ,植物水胁迫代谢调节相关基因的分离、鉴定 ,以及通过植物遗传转化改变植物遗传性状———获得稳定的耐旱植株 ,进一步推广生产 .利用植物基因工程技术获得稳定耐旱植株 ,对于干旱地区的农业、生态环境、畜牧业以及城市绿地的改造来说可能又将引起一场新的绿色革命 .

淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质组蛋白质表达差异

目的:以蛋白质组学技术研究淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质表达差异,从蛋白质分子水平探索老年性痴呆发病机制。方法:实验于2002-03/2003-10在河北医科大学第二医院、解放军总医院老年医学研究所、北京大学蛋白质工程国家重点实验室完成。淀粉样β蛋白前体转基因小鼠4只与正常C57小鼠4只脑组织经蛋白提取后,分别以固相pH梯度等电聚焦为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向进行双向电泳。图像分析软件Im-ageMaster2DElite分析电泳图谱。以MALDI-TOF质谱仪对差异蛋白进行鉴定。结果:8只小鼠均进入结果分析。11个蛋白点在淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑组织表达量明显不同。他们分别被鉴定为热休克蛋白86ku-1、神经丝三联体L、氧化还原酶75ku亚单位前体、血清白蛋白前体、甘油-3-磷酸脱氢酶、三磷酸腺苷合酶α亚单位、α-烯醇化酶、γ-烯醇化酶、泛素结合酶E2、肌酸激酶、天冬氨酸氨基转移酶。结论:通过蛋白质组学技术,寻找并鉴定了淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑差异表达蛋白质。

植物基因工程的现状与展望

介绍了80年代以来植物基因工程的历史、现状和发展趋势,对利用转基因植物生产药用蛋白,用工程病毒为载体生产药用蛋白,改进植物品质及逆境适应性,提高光合作用和固氮效率,抗除草剂工程植物及工程微生物与生物医学的关系等作了可行性分析和前景预测。

现代植物基因工程的挑战与希望

自从70年代末首次从分子水平上证实了有一种细菌,即土壤农杆菌(Agrobacterium tu-mefaciens)在侵染植物细胞后,不但能将它的一段DNA插入到被侵染的细胞的基因组中,而且还能稳定地随着植物遗传给后代。植物基因工程的发展日新月异,连续取得了一系列重大的突破,特别是进入80年代中后期,人们利用植物基因工程在植物抗病、抗虫、抗除草剂。

植物基因工程的研究及发展趋势(书面)

生物技术是10多年来迅速发展起来的高技术、新技术,具有十分明显的社会效益和经济效益。在所有的生物技术领域中,农业生物技术、特别是有关作物生物技术的研究和发展被认为是最有现实意义的技术之一,将在下一世纪出现的“绿色革命”中发挥巨大的作用。农业生物技术研究的内容有植物基因的操作,植物细胞和植物组织的培养,转基因植物和转基因鱼类、家畜家禽的获得等。农作物生物技术方面主要研究方向是提高蛋白质含量,改良氨基酸组成,提高作物抗逆境、细菌。

APP转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质组双向电泳图谱的比较

目的探讨APP转基因小鼠与正常C57小鼠脑蛋白质组双向电泳(2-DE)图谱差异,从蛋白质水平初步探索老年性痴呆发病机制。方法APP转基因小鼠与正常C57小鼠脑组织经蛋白提取后,分别以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行2-DE。图像分析软件ImageMaster 2D Elite分析电泳图谱。结果APP转基因小鼠与正常小鼠脑组织2-DE图谱分别检测出976和947个蛋白点。对两张电泳图进行匹配后,发现有16个蛋白点仅在APP转基因小鼠脑蛋白2-DE图谱检测到表达,而有7个蛋白点只在正常小鼠检测到。部分蛋白在2组小鼠脑组织中含量发生了明显变化。结论差异点的发现初步建立了差异表达蛋白质组学的技术方法;为研究阿尔茨海默病机制及研发新药提供了有益的线索。

人脑枕叶区衰老进程的比较蛋白质组学研究

分别从 2 3岁、 64岁、 72岁、 83岁以及 94岁无神经性和精神性疾病史个体大脑皮层枕叶区取样 ,制备蛋白质样品 ,进行双向凝胶电泳 ( 2 -DE)、考马斯亮蓝染色、凝胶扫描和 Image Master2 D Elite软件分析 ,每张胶上平均可检测到 1 0 0 0个以上蛋白质点 .通过软件半定量分析 ,进一步研究了衰老过程中枕叶蛋白质的差异表达 ,发现随年龄增长有 7种蛋白质有一致的显著上升或下降趋势 .应用质谱进行肽质量指纹图谱( PMF)和 /或肽序列标签 ( PST)分析 ,数据库检索共鉴定了 1 1种蛋白质 ,其中有 5种具有一致的上调或下调性 ,包括神经元突触结构蛋白低分子量神经丝蛋白 ( Neurofilamenttriplet L protein,NF-L)、参与抗氧化反应的硫氧还原蛋白过氧化物酶 ( Peroxiredoxin)、三羧酸循环关键酶 (顺 )乌头酸水合酶 ( Aconitate hydratase)和糖代谢途径中的关键酶烯醇化酶 2 ( Enolase2 )以及分子伴侣蛋白 T复合物蛋白 1 ( T-complex protein1 ) .首次建立了正常人脑枕叶区的双向电泳蛋白质表达图谱 ,针对人脑枕叶区蛋白质在衰老过程中的差异表达进行了研究 ,并对差异表达蛋白在衰老进程中可能的生物学意义做了探讨 .

正常与重金属铅注射的兔脑蛋白质双向电泳图谱比较与鉴定

重金属污染对人类健康的威胁日益受到关注 ,为了了解大量重金属摄入对脑蛋白质的影响 ,对比研究了正常兔脑组织蛋白质与重金属铅腹腔注射 2周后的兔脑组织在蛋白质双向电泳图谱中的差异 ,分析重金属注射对脑蛋白质表达的可能影响 .通过对脑组织蛋白质的提取 ,分离出水溶性的蛋白质组分 ,经双向电泳图谱比较正常与注射重金属铅的兔子在脑蛋白质表达上的差异 ,其中 3个蛋白质斑点经提取 ,反相高效液相色谱 (RP HPLC)分离 ,基质辅助激光解析电离质谱 (MALDI TOFMS)确定了分子质量 ,并利用肽质量指纹图谱检索数据库确定蛋白质的归属 .

牦牛MT-Ⅰ/-Ⅱ cDNA分子克隆及其蛋白质结构分析

利用基因特异引物YMTSP1和YMTSP2,通过RT-PCR从牦牛肝脏组织RNA中克隆出了牦牛 MT-Ⅰ(Genbank Accession No:AY513744)和MT-Ⅱ(Genbank Accession No:AY513745)基因编码区全 长。将牦牛MT-Ⅰ和MT-Ⅱ cDNA序列在CBI上进行同源性搜索发现,牦牛MT-Ⅰ/-Ⅱ编码区序列在 不同哺乳动物中相当保守。牦牛MT-Ⅰ和MT-Ⅱ编码的MT-Ⅰ和MT-Ⅱ蛋白分别由61个氨基酸组 成,其具有保守的短肽结构如:C-X-C,C-C-X-C-C,C-X-X-C等,其决定MT蛋白分子的整个三维结 构,在分子进化上十分保守。同时对牦牛MT的疏水性和跨膜区分析表明,牦牛MT蛋白可能不 存在跨膜区,也不存在信号肽,是1种非分泌蛋白。并通过同源比较模建,预测和构建了牦牛 MT-Ⅰ和MT-Ⅱ蛋白的分子空间结构,表明牦牛MT-Ⅰ和MT-Ⅱ由α-和β-两个结构域组成,在α-结构 域含有5个Cys短肽结构,β-结构域有4个Cys短肽结构,且2个结构域由保守的三肽序列KKS 相连。

在大肠杆菌表达体系中以包涵体形式存在的真核生物蛋白质的分离、复性和二硫键的形成

在大肠杆菌中表达的含有二硫键真核生物的重组蛋白，往往以包涵体的形式存在。存在于包涵体的重组蛋白，因分子内及分子间二硫键的错配，而常常导致重组蛋白无生物活性。着重介绍了一些从包涵体中分离有正确配对的二硫键重组蛋白新的技术条件，总结了含有二硫键真核生物重组蛋白的不同分离和复性步聚及方法，并对重组蛋白在体外折叠的机理进行了探讨．

急性运动轴索型神经病患者血清对培养脊髓运动神经元的影响-比较蛋白质组研究

目的为深入理解急性运动轴索型神经病(acute motor axonal neuropathy,AMAN)分子机制,以蛋白质组技术比较AMAN患者与正常对照组血清对培养的大鼠脊髓运动神经元的影响。方法原代培养脊髓运动神经元蛋白质以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳,图像分析软件Image Master2D Elite分析电泳图谱,MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定在AMAN患者血清的影响下,培养的神经元发生变化的蛋白质。结果 AMAN患者血清干预24h的脊髓运动神经元与正常对照组血清干预24h的脊髓运动神经元相比较,有13个蛋白的表达量降低,8个蛋白的表达量升高,这些蛋白与能为疾病血清中致病因子作用的靶蛋白。结论在急性运动轴索型神经病患者血清作用下,培养大鼠脊髓运动神经元的细胞凋亡相关蛋白、氧化应激蛋白、突触可塑性相关蛋白、细胞骨架蛋白表达发生变化,这些发现有助于我们深入理解该疾病的病理机制。通过进一步的研究,本文发现的差异表达蛋白质也可能对急性运动轴索型神经病的诊断治疗有一定的帮助。

分子内分子伴侣──Pro肽在蛋白质折叠中的作用

在体内，许多蛋白质，如很多胞外蛋白酶、某些多肽激素等都以含前导肽的前体形式合成。前导肽在蛋白质折叠中具有分子伴侣的功能。为了与一般意义上的分子伴侣相区别，人们将对蛋白质折叠有帮助的前导肽称为分子内分子伴侣。分子内分子伴侣帮助蛋白质在折叠过程中克服高的能量障碍，某些蛋白质的分子内分子伴侣甚至促进其在氧化性折叠中二硫键的正确配对。

利用蛋白质指纹图谱技术检测硒诱导金属硫蛋白实现大鼠肝纤维化防护作用

【目的】探索硒诱导金属硫蛋白及其对大鼠肝纤维化防护作用的蛋白质指纹图谱改变。【方法】利用表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术测定硒对金属硫蛋白的诱导,寻找大鼠肝纤维化的异常蛋白表达标志并评估硒代金属硫蛋白的防护作用。【结果】IMAC-Cu蛋白质芯片6279 Da和6650Da处特征性MT蛋白质表达增强证实硒对MT的高诱导作用;肝组织点样的WCX2芯片5 140Da综合峰的两峰与正常组相对应处比较明显倒置,血清点样的H4芯片7 105 Da左右的蛋白质出现高表达,4 820Da左右的蛋白质表达受抑,三种图谱变化是大鼠酒精性肝纤维化的相关信号蛋白;硒诱导MT增高后上述异常表达均有改善,说明有机硒对肝纤维化有防护作用。【结论】组织和血清的蛋白质指纹图谱可以作为肝纤维化疗效监测和评价的一类标志物,为今后进行更多的药物或方法筛选奠定了一种可以尝试的试验模式。

蛋白质组学技术鉴定吉兰-巴雷综合征患者与正常人血清的差异表达蛋白

目的为深入理解吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barré syndrome,GBS)分子机制,以蛋白质组技术比较GBS患者与正常对照组血清的差异表达蛋白。方法血清蛋白质以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳,图像分析软件Image Master2DElite分析电泳图谱,MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定差异表达蛋白。结果 24种蛋白质的表达量在吉兰-巴雷综合征患者与正常对照组显著不同,其中17种在吉兰-巴雷综合征患者血清中表达量上调的蛋白质被鉴定为补体C3、α-2-巨球蛋白、补体因子B、血浆铜蓝蛋白、补体因子H、补体C4-B、维生素D结合蛋白、血清淀粉样P物质、丛生蛋白、α-1-抗胰凝乳蛋白酶、触珠蛋白、Afamin、血红素蛋白、视黄醇结合蛋白4、补体C1s亚成分、补体C4-A、α-2锌糖蛋白;7种在吉兰-巴雷综合征患者血清中表达量下调的蛋白质被鉴定为α-1-抗胰蛋白酶、Igγ-1-C链、Igκ-C链、CD5类抗原、载脂蛋白E、血清铁传递蛋白、维生素D结合蛋白。结论 GBS患者血清中补体蛋白及急性期反应蛋白表达量发生了明显变化,这些结果加深了我们对GBS发病分子机制的理解。

烟草花叶病毒运动蛋白基因的cDNA克隆、序列测定及植物转化

植物病毒侵染宿主植物的一个重要过程是通过它在宿主体内的转移和传播,产生病害。植物病毒在宿主体内的转移主要有两种方式,一种是通过植物维管组织进行的系统转移,另一种是植物病毒在宿主细胞之间的转移,这种转移是通过植物细胞的胞间连丝实现的。实验表明,病毒自身编码的一种蛋白参与了这个转移过程,对烟草花叶病毒(TMV)而言,这种蛋白就是分子量为30kDa的运动蛋白。

植物水孔蛋白研究进展

植物水孔蛋白在植物体内形成水选择性运输通道 ,在植物种子萌发、细胞伸长、气孔运动、受精等过程中调节水分的快速跨膜运输。有些水孔蛋白还在植物逆境应答中起着重要作用 ,因此研究水孔蛋白与植物抗旱性的关系引起了广泛关注。对水孔蛋白的发现、结构、分类、分布。

查尔酮合酶基因对转基因植物花色和育性的影响

查尔酮合酶 ( chalcone synthase,CHS)是花色素合成途径中的一个关键酶 ,它在植物中表达量的改变可能影响花的颜色。从矮牵牛 ( Petunia hybrida)特定发育阶段的花瓣的 c DNA中 ,克隆到查尔酮合酶基因 ,并正向插入到原核表达载体和含有花椰菜花叶病毒 Ca MV 35 S启动子的真核表达载体中 ,在原核中得到高效表达 ,并通过土壤农杆菌介导的方法转化矮牵牛。转基因植物的花色不但发生了明显的变异 ,其育性也受到了影响 ,不能产生正常花粉粒 ,成为雄性不育植株。 Northern杂交表明 ,转基因植物花瓣中 。