酒石酸托特罗定与奥昔布宁双盲双模拟随机对照治疗膀胱过度活动症多中心临床研究

目的：评价国产酒石酸托特罗定治疗膀胱过度活动症的有效性和安全性。方法：以盐酸奥昔布宁为对照，采用随机双盲双模拟多中心临床试验设计，对２３７例（托特罗定组１１４例，奥昔布宁组１２３例）膀胱过度活动症患者进行研究服药方法每日２次，每次托特罗定２ｍｇ或奥昔布宁５ｍｇ。结果：治疗６周后，试验组（ｎ＝１０９）和对照组（ｎ＝１０８）２４ｈ平均排尿次数减少、尿失禁患者的中均尿失禁次数减少以及平均每次尿量增加比较无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。试验组患者不良事件的总发生率４８．２％，其中主要不良事件口干发生率为３２．５％；而奥昔布宁组不良事件的总发生率为６５．０％，口干发生率为５５．３％，不良事件总发生率及口干发生率在两组间均有统计学差异（Ｐ＜０．０５）。结论：托特罗定是治疗膀胱过度活动症的有效药物，其疗效与奥昔布宁等效，但其药物不良反应明显低于奥昔布宁。

放射性碘标抗膀胱癌免疫毒素生物分布与代谢研究

目的:对偶联苦瓜毒素(MT)后131I-BDI-1在荷瘤裸鼠体内分布与代谢性能变化进行研究,探讨其应用于膀胱癌导向治疗的可能性。方法:MT与BDI-1通过异型双功能交联剂SPDP进行偶联;BDI-1与BDI-1-MT采用ChT法进行131I标记;两组荷人膀胱癌裸鼠分别经尾静脉注射131I-BDI-1-MT与131I-BDI-1,经48h,72h及120h后进行体内放射性分布测定与γ显像。计算肿瘤与各个脏器的摄取百分数(%ID/g)及与正常组织放射性之比(T/NT)。结果:与131I-BDI-1相比,131I-BDI-1-MT在肿瘤中的摄取率未见明显降低,但在多数正常组织中的摄取率显著低于131I-BDI-1,其T/NT值明显高于131I-BDI-1;131I-BDI-1-MTγ影像中肿瘤与正常组织的对比度优于131I-BDI-1;131I-BDI-1-MT与131I-BDI-1在肿瘤中清除速率差异不大,而131I-BDI-1-MT在正常组织中(尤其在血液中)的清除速率高于131I-BDI-1。结论:131I-BDI-1-MT有抗肿瘤活性,可有效地靶向膀胱癌细胞。

体外培养组织工程用人骨髓间充质干细胞的试验性研究

目的本研究对人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)进行基本生物学特性研究,并探讨以微载体培养技术进行大量增殖的可能性。方法对成人骨髓血用Percoll淋巴细胞分离液进行密度梯度离心,以获取hB-MMSCs。原代和传代培养后描绘细胞增长曲线。以流式细胞术对所获取的hBMMSCs进行细胞表型鉴定。以Cytodex3微载体对hBMMSCs进行动态培养,并与无微载体培养的细胞进行数量对比。结果以Percoll淋巴细胞分离液可成功地对人骨髓血进行间充质干细胞的分离,原代和传代培养后细胞生长良好。以流式细胞术对hBMMSCs进行表型鉴定,其中CD29、CD44、CD73、CD105和CD147呈阳性表达,阳性率高于96%;CD71、CD90的阳性率为86.74%和71.01%;而CD14、CD34、CD38、CD45和HLA-DR呈阴性表达,且大多低于2%。以Cytodex3微载体进行动态培养时,hBMMSCs能够在微载体上迅速贴附、铺展并生长。在相同的时间点,当hBMMSCs在微载体表面长满时,细胞数目均显著多于无微载体的培养方法(P<0.001),其细胞密度和培养速度至少是普通培养法的4.5～9.6倍。Cytodex3上细胞数目的大量增长大约在第8天后进入平台期。结论应用Percoll淋巴细胞分离液能便捷地将hBMMSCs从人骨髓血中分离提取出来,对细胞活性影响小,并可以流式细胞术快速有效地鉴定其表面标记物。已获取的hBMMSCs的纯度较高,而且表型也较均一。与普通培养相比较,Cytodex3微载体培养体系可以在相同时间内获取大量的hBMMSCs,便于进一步开展在心血管外科领域的组织工程学应用。

雄性生殖细胞体外分化研究现状

生殖细胞的体外研究已建立了多种组织和器官培养系统、精曲小管培养系统、Sertoli细胞和生殖细胞共同培养系统等。随着对血 睾屏障和睾丸细胞极性在体外培养中重要性的逐步重视 ,已初步建立了模拟睾丸分隔结构的双室培养系统和藻酸钙三维培养系统。现有培养系统已经成为深入了解和认识精子发生过程的一种强有力工具。目前在体外已经获得某些动物精子发生的整个减数分裂过程 ,但对雄性生殖细胞体外减数分裂的详细调控机制还知之甚少。

勃起功能障碍的性治疗研究进展

性治疗是最早使用的治疗勃起功能障碍的方法之一。回顾近年来勃起功能障碍性治疗的相关文献可以看出,性治疗的疗效还没有大样本的随机、对照、前瞻性的临床试验研究加以证实。先前的研究尚未得出一致的结论,也很少有与其他治疗方法的对比研究,而且各文献中的病例选择、疗效评估方法并不一致,导致疗效的比较有许多困难,甚至无法比较。影响性治疗预后的因素很多,有许多心理社会因素,也有生物学的因素。尽管如此,许多研究仍表明性治疗是一种有效的治疗勃起功能障碍的方法。

抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达

目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行初步鉴定。结果 :成功构建抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,并实现其真核表达。初步的功能鉴定表明抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体具有较好的特异性和亲合力。结论 :构建的抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体在真核细胞内得到表达 ,且其功能较为理想。

通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达

目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选,用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平。结果:通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变,使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化。转染CHO细胞后,可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果,抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关。从弱化程度最高的pWS2-BDI组中,我们筛选得到表达量达55μg/(106细胞·24 h)的高表达细胞株,经锌离子进一步诱导后,表达量可达100μg/(106细胞·24 h)以上。结论:弱化表达载体中DHFR的表达,可提高MTX对工程抗体表达的增加效果。

人精原干细胞特异性标志的初步筛选

目的:寻求可能用于人精原干细胞(SSC)分离和纯化的特异性表面标志。方法:通过免疫组化方法,应用造血干细胞(HSC)表面标志c-kit、Thy-1,人胚胎干细胞(ES)表面标志阶段特异性胚胎抗原SSEA-3、SSEA-4、碱性磷酸酶(ALP),原始生殖细胞(PGC)标志SSEA-1以及小鼠SSC表面标志α6和β1整合素对成人及胎儿睾丸SSC的特异性表达进行筛选和鉴定。结果:在成人睾丸组织中,α6整合素在生精小管生殖细胞表面存在较广泛而显著阳性表达,而β1整合素主要在生精小管基底部细胞存在显著阳性染色,Thy-1在成人睾丸生精小管基底部细胞可见散在阳性染色,少量间质细胞中亦可见阳性染色。上述3种抗原标志在成人生殖细胞表面的表达具有一定的特异性。在胎儿睾丸生精小管中,可见SSEA-1在生殖细胞表面存在显著阳性表达,具有明显特异性。结论:α6、β1整合素和Thy-1可作为阳性标志用于人SSC的分选。SSEA-1可作为识别胎儿SSC的特异性标志。

前列腺穿刺活检单针阳性患者前列腺内癌灶分布特点

目的:通过对前列腺穿刺活检单针阳性并接受根治性手术治疗的前列腺癌患者的手术标本病理结果进行回顾分析,了解前列腺内癌灶的分布情况。方法:对我院37例经直肠前列腺穿刺活检,单针阳性确诊为前列腺癌并接受前列腺癌根治术的患者手术前后资料进行比较,评价活检与术后病理结果的非一致性,分析肿瘤总体被低估的可能危险因素。结果:多数患者(26/37)术后病理证实肿瘤呈多灶性分布;术后Gleason评分7～9分患者(21/37)所占比例明显升高;术前临床分期明显被低估;单针中癌组织比例大是术前临床分期被低估的可能危险因素;PSAD>0.2μg/L是肿瘤总体被低估的可能危险因素;前列腺体积较大(体积≥40 ml)时肿瘤多灶性分布的可能性增大。结论:前列腺穿刺活检单针阳性患者的肿瘤可能被低估;其前列腺癌灶的分布具有多灶性特点。

人精原干细胞的体外培养及其功能鉴定

目的:通过应用多种培养条件下的生殖细胞共培养体系,寻求人精原干细胞(SSC)长期体外生存和扩增的优化途径。方法:应用磁式分选所获得的α6+Thy-1+c-k it-细胞,分别以STO、MEF、Sertoli细胞为饲养层,于DMEM/F12、DMEM或DMEM-SF培养液条件下短期培养,然后选择胎儿Sertoli细胞作为共培养体系,在32℃、5%CO2、DMEM/F12(含10%胎牛血清)培养条件下,分别观察成人和胎儿生殖细胞的长期培养结果。并应用免疫组化技术和SSC移植技术对培养细胞进行初步生物学特性和功能鉴定。结果:在短期培养中,α6+Thy-1+c-k it-细胞在存在饲养层时,可在DMEM和DMEM/F12培养液中稳定生存,1周内存活率可达90%。长期培养条件下,α6+Thy-1+c-k it-细胞逐渐与Sertoli细胞形成紧密的贴附或镶嵌关系,呈单个、成对、短链状或小团簇状;胎儿SSC与成人类似,部分以圆球形散在分布于Sertoli细胞表面,并常可观察到明显的成对或短链状细胞,部分呈有突起的长梭形扁平细胞,与Sertoli细胞相互形成紧密连接;经反复传代3个月,仍可观察到稳定存在的圆球形SSC贴附于Ser-toli细胞表面。由PKH26标记的α6+Thy-1+c-k it-细胞在移植后2个月可迁移至裸鼠生精小管基膜,表现为单个或成对的细胞。生精小管内荧光细胞计数显示α6+Thy-1+c-k it-细胞在体外培养2、4周后仍然保留54.9%和9.2%的SSC。结论:该培养系统的进一步优化将有利于体外产生大量SSC,并有助于进一步深入了解SSC的生物学特性和男性生精功能障碍的治疗。

膀胱移行细胞癌中MK表达与其临床病理特征及预后的关系

目的:研究中期因子(MK)蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达,探讨其与膀胱癌临床病理特征及术后患者预后的关系。方法:采用SP免疫组化染色法检测50例手术切除膀胱移行细胞癌组织和10例正常膀胱黏膜中MK表达,分析MK在膀胱癌组织中的表达与其临床对应的各项病理参数的关系,对其中40例有随访资料者的MK表达与预后的关系进行统计学分析。结果:MK在膀胱癌组织中表达率为90%(45/50),在人正常膀胱组织中无表达或弱表达;在膀胱癌中随肿瘤侵润深度和分级的增加,MK表达逐步增强(P<0.05,P<0.01)。MK表达与性别、年龄、肿瘤大小、数目、初复治无相关(P>0.05)。生存分析表明,MK低表达组1、3、5年生存率分别为81.8%、81.8%、72.7%,MK高表达组1、3、5年生存率分别为63.6%、36.4%、18.2%,MK高表达组生存率显著低于MK低表达组,组间生存率差异显著(P<0.05)。结论:MK在膀胱移行细胞癌组织中高表达,在正常膀胱黏膜上皮无或弱表达。MK随肿瘤分期和分级的增加表达逐步增强,而与患者性别、年龄、肿瘤大小、数目、初复治无相关。MK表达与膀胱癌术后患者的预后相关,MK呈高表达者的生存时间比低表达者短。

中医药在器官移植中的应用

自1954年首例肾移植成功以来,器官移植成为近半个世纪发展最快的医学领域之一。为数百万器官功能衰竭患者带来了生命的希冀。这些成绩多半应归功于以环孢霉索A(CsA)、强的松、硫唑嘌呤等为代表的免疫抑制剂的良好抗排斥作用。尤其是环孢霉素A得到广泛应用以后,器官移植的存活率得到了明显提高。近年来OKT_3、ATG,FK_(506),MMF等新型免疫抑制剂的不断出现,使移植器官存活率进一步提高。

骨桥蛋白与肾结石

本文着重叙述骨桥蛋白 (OPN)的分子结构、在肾脏的表达调控及其与肾结石的关系。

肾脏移植物血管内皮细胞嵌合现象预后观察

目的:用荧光原位杂交方法(FISH)观察移植肾中血管内皮细胞被受体内皮细胞替代(内皮嵌合)的现象,并分析内皮嵌合对肾脏移植物预后的影响。方法:移植后2周到4个月男性供者、女性受者的移植肾穿刺活检标本34例,选择Y染色体长臂Yq12区域(异染色质区)DNA片段作为探针,同时选择X染色体着丝粒区(α卫星DNA)探针作为对照,通过在石蜡切片标本上进行间期细胞双色荧光原位杂交,分析血管内皮细胞被受体替代的现象,分析其对移植肾预后的影响。结果:肾脏移植物中血管内皮细胞嵌合现象较普遍存在,内皮细胞的分布呈灶状,供者内皮细胞和受体内皮细胞可相邻存在。血管内皮细胞嵌合的发生与否移植肾1年血清肌酐值分别为(115.88±25.06)μmol/L,(118.16±18.85)μmol/L,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:肾脏移植物中血管内皮细胞可以被受者来源的内皮细胞所替代,对移植后1年的肾功能无明显影响,内皮嵌合对移植肾的长期存活的影响有待进一步观察。

抑制性消减杂交技术与肿瘤相关基因克隆新进展

抑制性消减杂交 (SSH)技术是以抑制性PCR为基础的基因差异显示克隆技术 ,近年来已成功应用于疾病相关基因的克隆 ,特别是肿瘤相关基因的克隆。

通用两孔法腹腔镜初步应用

目的比较改良的两孔法腹腔镜技术和常规法后腹腔镜输尿管切开取石术在输尿管切开取石术中的应用效果。方法对2006年3月～2007年12月行两孔法腹腔镜手术和常规腹腔镜手术的31例输尿管结石患者的临床资料进行分析,比较两组手术医生人数、手术时间、术中出血量、术中并发症、术后住院时间、术后并发症等。结果两组手术医生、手术时间比较差异有统计学意义(P<0.05),术中出血量、术中并发症、术后住院时间、术后并发症等差异无统计学意义(P>0.05)。结论两孔法腹腔镜手术可以单人操作,无需助手配合,自己掌握物镜方向,大大方便手术,提高效率,也可以使新开展腹腔镜手术医院的外科医生较快掌握腹腔镜技巧。