两性霉素B成功治疗不规则毛霉引起的皮肤慢性毛霉病1例

患者,女,44岁,面部红斑、丘疹16年,溃疡、结痂8年。皮肤科检查:面部弥漫肿胀性红斑、大片状境界清晰的溃疡和坏死性焦痂。双眼睑外翻,右眼失明。真菌直接镜检、培养及分子生物学菌种鉴定,确诊为不规则毛霉所导致的皮肤慢性毛霉病,予两性霉素B静脉滴注治疗,皮损明显改善,遗留萎缩性瘢痕。

应用CLSI M38-A2方案测定须癣毛癣菌对抗真菌药物敏感性

目的对我国代表地区须癣毛癣菌临床分离株作抗真菌药物敏感性测定,进一步验证CLSI的M38-A2方案。方法选取我国南北方8个省市地区经表型和分子生物学鉴定的趾间型毛癣菌38株和苯海姆节皮菌6株,采用M38-A2方案测定氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、特比萘芬、灰黄霉素、联苯苄唑、环吡酮胺和阿莫罗芬等8种常见抗真菌药物的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）。结果氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、特比萘芬、灰黄霉素、联苯苄唑、环吡酮胺和阿莫罗芬对趾间型毛癣菌株的MIC值（μg/mL）范围分别为0.25~32、0.031 2~1、0.015 6~0.062 5、0.000 937~0.00781、0.062 5~1、0.031 2~2、1~2、0.007 81~0.062 5;对苯海姆节皮菌株的MIC值（μg/mL）范围分别为≥64、2、0.25~0.5、0.000 937~0.003 81、1、2~4、1~2、0.031 2~0.062 5。不同抗真菌药物对趾间型毛癣菌及苯海姆节皮菌的药敏有明显差别（P〈0.001）;趾间型毛癣菌和苯海姆节皮菌对伊曲康唑、灰黄霉素、环吡酮胺、伏立康唑和氟康唑的药敏差异有统计学意义,对特比萘芬、阿莫罗芬和联苯苄唑的药敏差异无统计学意义。结论趾间型毛癣菌和苯海姆节皮菌之间对伊曲康唑、灰黄霉素、环吡酮胺、伏立康唑和氟康唑的药敏有明显差异。M38-A2方案有较好的重复性和稳定性,适合用来体外测定须癣毛癣菌对抗真菌药物的敏感性。

对新型冠状病毒肺炎继发真菌感染的思考

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)疫情十分严重,给民众的健康带来了巨大威胁。COVID-19患者可能继发侵袭性真菌感染,会严重威胁患者的生命,因此,在诊治策略上应该给予重视。除了加强高危患者中病原真菌的常规检查外,还应加大力度支持和扶持病原真菌先进检测技术的研发;此外,还应重点支持针对医疗单位、公共场所和家庭等常温环境以及体表和器物表面灭活病毒、细菌、真菌等病原体的新型技术和方法的研发。最终为国家战胜COVID-19和继发感染疫情提供新措施和新策略。

ATB FUNGUS 2法在念珠菌属和新生隐球菌抗真菌药敏试验中应用的评价

目的评价ATB FUNGUS 2半固体培养基法在测定念珠菌属和新生隐球菌对4种常用抗真菌药物敏感性中的应用价值。方法利用CLSI M27-A2微量液基稀释法和ATB FUNGUS 2法同时测定131株念珠菌和20株新生隐球菌对两性霉素B(AmB)、氟康唑(FLC)、氟胞嘧啶(5-FC)和伊曲康唑(ITC)的敏感性。结果两种方法对于AmB、5-FC、FLC和ITC的一致性分别为98%、89.4%、78.8%和78.1%。②所有受试菌株中两种方法的一致性为80%;但ATB FUNGUS2法将2/5株M27-A2法检查为FLC耐药的白念珠菌判断为敏感或剂量依赖,将8/10株M27-A2法检查为FLC剂量依赖的白念珠菌判断为敏感或耐药。③ATB FUNGUS 2法中AmB的MIC值判读范围偏高,以致于实际工作中不能读出准确的值。结论ATB FUNGUS 2半固体培养基法在测定念珠菌属和新生隐球菌对4种常用抗真菌药物的敏感性时不失为简单、快速而且重复性好的方法。

真菌耐药性产生的新机制:热休克蛋白90的作用

近年来白念珠菌病发病率呈上升趋势。随着抗真菌药物的广泛应用,临床出现的耐药菌株也不断增多。最近对耐药菌株的产生机制的研究有了重大突破,对Hsp90的作用有了更深的了解,即Hsp90可以参与由于快速选择而出现的真菌耐药机制,而且对耐药性的维持也起到一定作用。该文对Hsp90对真菌产生耐药性的机制及其临床应用的研究进展作一综述。

布洛芬对曲霉的体外抗真菌活性评价

目的观察布洛芬对曲霉临床分离株的体外抗真菌活性。方法分别用微量液基稀释法和纸片扩散法,测定布洛芬对10株烟曲霉、黄曲霉和土曲霉的抗菌活性。结果微量液基稀释法显示布洛芬对曲霉的最低抑菌浓度(MIC)范围为1000～2000μg/mL,最低杀菌浓度(MFC)范围为2000～8000μg/mL;纸片扩散法也显示布洛芬有体外抗曲霉活性:48h时,1000μg布洛芬对曲霉产生的抑菌圈直径为(20.1±3.89)mm。结论布洛芬有体外抗曲霉活性。

含有额外拷贝黄曲霉cyp51同源基因的烟曲霉对抗真菌药物的敏感性测定

目的通过构建黄曲霉cyp51同源基因额外拷贝株,研究这些基因对抗真菌药物敏感性的影响。方法通过序列同源性比对,在黄曲霉基因组中找出其cyp51基因的开放读码框(ORF)及其上下游约1 000 bp的基因序列,PCR扩增后利用DNA重组技术将该片段克隆到穿梭质粒pRG3-AMA1-NotI;用重组后的质粒和空质粒转化烟曲霉嘧啶营养缺陷株(pyrG-)AF293.1,并利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定转化株对两性霉素B(AMB)、伊曲康唑(ITC)、伏立康唑(VRC)、泊沙康唑(POS)和卡泊芬净(CAS)敏感性。结果黄曲霉cyp51同源基因有3个:cyp51A、cyp51B和cyp51C,ORF大小约为1 400～2 000 bp;将其克隆到穿梭质粒pRG3-AMA1-NotI产生重组质粒pRG3-AMA1-CYP51A、pRG3-AMA1-CYP51B和pRG3-AMA1-CYP51C;连同空质粒转化AF293.1后得到阳性转化子rC-YP51A、rCYP51B、rCYP51C和rpRG;微量液基稀释法和E-test法显示,rCYP51A和rCYP51B对VRC和ITC交叉耐药,对AMB和CAS敏感;rCYP51C和rpRG对VRC和ITC中度敏感,而对AMB和CAS敏感。结论额外拷贝黄曲霉cyp51A或cyp51B基因影响烟曲霉对唑类药物的敏感性,对AMB和CAS的敏感性没有影响;额外拷贝黄曲霉cyp51C对测试药物的敏感性没有明显影响。

我国代表地区须癣毛癣菌复合体的分子鉴定与分型研究

目的对我国代表地区的须癣毛癣菌菌株进行分子再鉴定和分型研究。方法选取我国南北方8个省市地区经表型鉴定的须癣毛癣菌菌株47株,通过再培养形态观察、生理试验;PCR扩增核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)和核糖体大亚基(LSU)D1-D2区,测序后利用数据库进行序列比对,对须癣毛癣菌复合体进行再鉴定;PCR扩增rDNA非转录间隔区(NTS)的三个串联重复亚单位S0、S1和S2区,进行种内分型,并比较不同部位来源菌株型别的差异性。结果我国南北方8个省市地区47株须癣毛癣菌中3株鉴定为断发毛癣菌,6株鉴定为无性型苯海姆节皮菌,其余均鉴定为万博节皮菌中的亲人型趾间毛癣菌;三对不同引物扩增38株趾间型毛癣菌和2株苯海姆节皮菌NTS区,共产生28种特征性带型。带型和菌株来源及发生部位无相关性。结论我国分离自人类须癣毛癣菌复合体的主要组成菌种为趾间毛癣菌;ITS区结合LSU D1-D2区测序有助于鉴定须癣毛癣菌复合体至种水平;NTS区的三个串联重复亚单位所产生的特征性指纹图提供了一种快速、稳定的分子生物学种内分型方法,可应用于趾间毛癣菌感染的流行病学研究。

曲霉生物膜的形成过程与结构特征

目的研究曲霉生物膜的形成过程和结构特征。方法我们利用一个曲霉生物膜体外模型研究其形成过程和结构特征。将200μL浓度为1×105孢子/mL的受试曲霉(烟曲霉AF293,黄曲霉BMU03940,土曲霉BMU00802,黑曲霉BMU04689)的孢子悬液加到24孔组织培养板中的无菌塑料细胞培养盖玻片上,37℃孵育不同时间(0、2、4、8、10、12、16、18、24、48、72 h),加入25μmol/L的FUN-1室温避光染色后,用波长488 nm激光激发,通过共聚焦激光扫描显微镜观察曲霉生物膜的形成过程;再用波长为488 nm和633 nm激光同时激发,将两个波长下的图像叠加后观察曲霉生物膜的活力;利用XYZ轴成像观察其结构特征。在上述不同的时间点用钙荧光白染色后,用波长为405 nm的紫外光激发,观察曲霉生物膜细胞外基质的产生。结果烟曲霉AF293在第4 h即开始有散在的孢子黏附于盖玻片上;8 h时孢子开始萌芽,10～12 h菌丝延长形成单细胞层;16～20 h菌丝缠绕形成多层立体结构;24 h形成一个具有复杂的三维立体结构特征的多细胞菌落,菌丝有序排列,细胞外基质弥散的分布在菌丝的周围;48～72 h生物膜逐渐成熟。成熟的烟曲霉生物膜是由细胞外基质包裹的有序排列的菌丝形成的复杂立体结构。黄曲霉BMU03940、土曲霉BMU00802、黑曲霉BMU04689与烟曲霉AF293有类似的生物膜发育阶段,包括黏附、孢子萌芽、菌丝延长、菌丝有序排列形成三维立体结构。结论烟曲霉、黄曲霉、土曲霉和黑曲霉在体外都能形成典型的生物膜,它的形成过程和结构特征与其他真菌生物膜类似。

皮肤镜在甲真菌病与炎症性甲病诊断及鉴别诊断中的应用

甲真菌病与炎症性甲病传统的诊断和鉴别诊断方法包括真菌学检查和组织病理检查。但由于真菌学检查敏感性低,依赖于真菌实验室设备和经验丰富的真菌学检验专家,而组织病理具有有创、疼痛、耗时、花费高的缺点,限制了它们的临床应用。近年来,皮肤镜逐渐应用于甲病的临床实践,对提高甲真菌病和炎症性甲病的临床诊断与评估具有重要价值。本文从皮肤镜观察甲部病变的基本原则与方法、皮肤镜在甲真菌病诊断与鉴别诊断中的应用、皮肤镜在炎症性甲病诊断及鉴别诊断中的应用三个方面予以综述。

犬小孢子菌致成人结缔组织病患者头癣一例

临床资料 患者，女，57岁，农民。主因头部脱发伴瘙痒1年，于2011年10月就诊。

曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性测定及其耐药的分子机制初探

目的探讨曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性及其耐药的分子机制。方法利用微量液基稀释法测定22株曲霉游离孢子对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性；同时建立22株曲霉生物膜的体外模型，用抗真菌药物敏感试验联合甲基四氮盐（x1Tr）减低法来评价曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性。通过实时RT—PCR测定烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因的相对表达量。结果对于曲霉的游离孢子，两性霉素B的最低抑菌浓度（MIC）范围是0．5～2mg／L，卡泊芬净的最低有效浓度（MEC）范围是0．125—0．25mg／L，伏立康唑的MIC范围是0．5—1mg／L；对于曲霉生物膜，两性霉素B的SMIC。（抑制50％固着性曲霉生物膜生长的最小药物浓度）和SMIC。（抑制80％固着性曲霉生物膜生长的最小药物浓度）范围分别是2～〉32mg／L和8～〉32mg／L，卡泊芬净的SMIC∞和SMIC8D范围分别是32～〉256mg／L和256～〉256mg／L，伏立康唑的SMIC∞和SMIC。范围分别是4～〉256mg／L和32～〉256mg／L。烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因相对表达量测定显示，与0h相比，7个待测基因在4h时表达量没有变化；8h时AfuMDR1、CYP51A、CYP51B表达量升高，CYP51A表达量升高最明显；12、16、24h时MuMDR1、AfuMDR2、AfuMDR4、CYP51A、CYP51B表达量升高，其中CYP51A表达量升高的最明显；AfuMDR3和atrF在生物膜形成过程中表达量没有明显变化。结论与游离孢子相比，曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性明显下降；烟曲霉形成生物膜以后，药物外排泵基因和唑类靶酶基因的表达量升高。

鼻前庭囊肿伴真菌感染一例

患者女，58岁，因发现左侧鼻唇沟肿物伴反复红肿1年余于2015年2月25日以鼻前庭囊肿伴感染入院。患者1年前发现左侧鼻唇沟肿物，约花生米大小，质韧，伴左侧面部及左下眼睑肿胀，局部皮肤充血肿胀，轻度压痛，无破溃，无鼻塞。就诊于当地医院，口服抗生素（具体药物及剂量不详）治疗，面部肿胀消失。