细胞因子诱导杀伤细胞与抗原特异性细胞因子诱导杀伤细胞杀伤肿瘤效应比较的实验研究

目的 :制备具有抗原特异杀伤活性的效应细胞。方法 :反复冻融法提取肿瘤可溶性抗原 ,甲基噻唑基四唑 (methylthiazolylterrazolium ,MTT)法检测效应细胞杀伤活性。 结果 :经树突状细胞 (dendriticcell,DC)摄取肿瘤细胞抗原 ,并提呈给细胞因子诱导杀伤 (cytokineinducedkiller ,CIK)细胞所获得的DC A CIK细胞对同一肿瘤靶细胞的杀伤活性 ,较CIK细胞、未摄取抗原的DC CIK细胞及摄取不相同肿瘤抗原的DC A不相同 CIK细胞具有更高的杀伤活性。结论 :摄取肿瘤可溶性抗原的DC细胞可明显提高CIK细胞对相同肿瘤靶细胞的杀伤特异性和杀伤活性。

聚酰胺抑制基因转录研究进展

聚酰胺(polyamide)是一类人工合成的小分子,能以序列特异性与DNA小沟结合,从而干扰天然转录因子与特定DNA序列的结合,实现对特定基因表达的调控。此类小分子发展迅速,近年来与烷化剂连接而提出了基因沉默新途径,具有特异基因治疗的潜力。本文总结了聚酰胺对特定基因转录抑制的研究进展。

细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞的大容量扩增与杀伤活性观察

建立大容量细胞因子诱导杀伤 (Cytokine- induced killer,CIK)细胞培养方法 ,观察 CIK细胞回输后对患者细胞免疫功能的影响。采用 10 0 0 ml培养袋大量扩增患者自体 CIK细胞 ,用 MTT法检测 CIK细胞杀伤活性 ,比较回输前后患者外周血单个核细胞 (PBMNC)对靶细胞的杀伤活性及其毒副作用。结果表明 :大容量培养法使自体CIK细胞扩增总量达 1.6× 10 1 0以上 ,回输 CIK细胞使患者 PBMNC的杀伤活性明显增加 ,未出现毒副作用。

vWF基因A1381T多态性和ABO血型对血浆vWF水平的影响

本研究旨在探讨vWF基因A1381T多态性和ABO血型对血浆vWF水平的影响。采用酶联免疫吸附法测定120名(男女各60例)19-33岁健康志愿者血浆vWF:Ag水平,采用PCR限制性酶切片段长度分析vWF基因A1381T单核苷酸多态性,测序验证。实验数据根据志愿者性别、血型或/和基因型进行分组,采用t检验、方差分析等统计学处理。结果表明:志愿者O血型与非O血型相比,血浆vWF水平明显降低(p<0.001);vWF基因A1381T多态性AA基因型与AG、GG型相比,血浆vWF水平明显降低(p=0.003和0.019);而在男性、女性之间血浆vWF水平没有统计学意义(t=1.039,p=0.301);在O血型中,A1381T的AG基因型血浆vWF水平与AA、GG基因型有显著性差异(t=2.321,p=0.028);而在非O血型中,A1381T的AG基因型血浆vWF水平与AA基因型有显著性差异(p=0.032)。结论:血浆vWF的表达水平随ABO血型和vWF基因多态性不同而有明显的不同。O血型和vWF基因A1381T多态性的AA型血浆vWF水平明显低于其他血型或基因型,这些结果对了解出血性及血栓性疾病易感性具有明确的参考意义。

PCR基因芯片

基因芯片 (genechips)可以快速、微型化、自动化地检测大量基因 ,成了生物医学研究的重要推动力。随着微加工技术的发展 ,我们建立了有 12 0 0个微反应池的PCR基因芯片 ,将基因芯片和聚合酶链式反应 (PCR)技术结合在一起。PCR基因芯片综合了基因芯片体积小却可以检测大量基因 ,以及PCR敏感而且容易发现各种基因变异的特点 ,采用以PCR为基础 ,而非以分子杂交为基础的检测方式 ,克服了杂交技术所存在的内在缺陷 ,大大增强了实验的敏感性和可重复性 ;扩展了基因芯片在生物医学领域中应用的范围 ,更适用于各种基因重排、基因突变和基因缺失的鉴定。PCR反应采用荧光探针作实时定量分析。在临床肿瘤和白血病的诊断、人类基因组分析、基因多态性和疾病易感性鉴定、遗传性疾病的基因诊断、动物和植物基因变异筛选。

免疫球蛋白基因体细胞高突变对慢性淋巴细胞白血病预后的影响

慢性淋巴细胞白血病的临床过程和与预后会有很大区别,精确诊断对判断预后、指导治疗及发病机制的研究均具有非常重要的意义。免疫球蛋白重链可变区(IgHV)突变是目前预测病情最稳定的分子指标。通常IgHV基因序列体细胞高突变者较无突变者预后较好,总体生存期长。最近的研究发现,在一些病例中无论突变与否,特定IgHV基因的表达也能预测疾病结果。CLL患者的临床预后还可根据特定IgHV基因表达被进一步的分层。本文对特定IgHV基因片段在慢性淋巴细胞白血病中表达的临床意义的国内外的研究现状作一综述。

白血病多发家系的遗传因素分析

目的 通过一家族多发性白血病家系的基因连锁分析结合国内外文献探讨白血病发病的遗传因素。方法 收集 4代 2 0人中有 3人患有急性粒细胞白血病M1亚型的家系。应用DNAIQ试剂盒从骨髓涂片上提取DNA ,酚氯仿抽提法从外周血提取DNA。逆转录 -多重巢式PCR方法筛查白血病常见融合基因。利用Powerplex试剂盒进行微卫星多重荧光PCR扩增。结果 筛查家系中 5位成员未发现融合基因。确认 3例白血病患者代表位于 11条不同染色体上 11个基因的微卫星没有共同连锁关系。其他 2个微卫星由于在这个家族中的多态性不高 ,无法确认或者排除基因的连锁关系。结论 仅仅根据不充分的家系特征和某些细胞遗传学异常就认定白血病多发家系是遗传性白血病显然还缺乏证据。

多发性骨髓瘤中人类疱疹病毒8型的定量分析及其相关基因的表达

目的 确定多发性骨髓瘤 (MM)骨髓活检标本中是否存在人类疱疹病毒 8型 (HHV8)感染 ,病毒负荷量的差异与临床表现之间的关系。方法 实时荧光定量PCR确定骨髓活检标本中的HHV8病毒的负荷量 ,采用筑巢式PCR扩增患者外周血、骨髓穿刺和骨髓活检标本中HHV8KS330 2 3 3Bam片段 ,用逆转录 PCR方法了解HHV8病毒的致病基因病毒源白细胞介素 6 (vIL 6 )和病毒源干扰素调节因子 1(vIRF 1)的表达情况。结果 多数MM患者的骨髓活检标本可检出HHV8,荧光定量PCR发现阳性率为 6 9 6 % (16 / 2 3) ;筑巢式PCR时的阳性率为 82 6 % (19/ 2 3) ,骨髓穿刺和外周血标本的阳性率分别为 4% (1/ 2 5 )和 0。临床分析表明病毒的检出可能与化疗有关。vIRF 1在骨髓活检标本中表达率很高 ,为 83 3% (10 / 12 ) ,vIL 6的表达率为 0。结论 多发性骨髓瘤和HHV8感染有关 ,高表达的vIRF

用流式细胞仪分析骨髓细胞诊断淋巴瘤

FCM已经成为临床诊断淋巴瘤的有力工具。骨髓细胞FCM诊断的主要依据是SSC和CD45细胞分布图上是否出现大小和分布不同于正常细胞的异常细胞，这种细胞是否存在和缺失相应的细胞表型。B细胞淋巴瘤的克隆性用免疫球蛋白κ或λ轻链限制性确定，然后根据CD5和CD10表达与否，分为4种类型，进一步区分B细胞淋巴瘤亚型。T细胞淋巴瘤的克隆性用TCR α/ β和γ/δ，TCR vβ25个家族的限制性确定，然后根据CD4和CD8表达与否，分为4种类型，进一步区分T细胞淋巴瘤亚型。NK细胞瘤可用CD56 EBV、细胞毒颗粒TIA-1、颗粒酶B和穿孔素阳性与否进一步确定亚型。