前列腺增生的尿液蛋白质组学分析

目的在临床前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)升高的情况下,特别是前列腺特异性抗原在4μg/L至10μg/L时,前列腺增生和前列腺癌的鉴别诊断很难,本实验对前列腺增生患者、前列腺癌患者和健康对照的尿液蛋白质双向凝胶电泳图谱进行对比分析,旨在较全面的分析其成分,为临床鉴别诊断提供依据。方法用丙酮沉淀蛋白的方法对前列腺增生患者、前列腺癌患者和健康对照尿液中的蛋白质进行浓缩,再用双向凝胶电泳技术分离蛋白质样品,CANON G9照相获取图像,PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析,寻找差异表达蛋白质。在此基础上用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALIDI-TOF)进行肽指纹图谱鉴定,并进行生物信息学分析。结果通过前列腺增生、前列腺癌和健康对照尿液双向凝胶电泳图的对比分析,获得前列腺增生差异蛋白质点,选取其中20个做质谱和生物信息学分析,最终分离鉴定出血清白蛋白、视黄醇结合蛋白前体等17种有效蛋白。结论通过实验条件的优化,应用蛋白质组学方法分析前列腺增生患者尿液蛋白质的组成成分是可行的,为研究前列腺增生患者尿液检测特异标志物提供了基础资料,为今后鉴别前列腺增生和前列腺癌提供了有益的依据,同时也为解决临床误诊难题提供了思路。

天门冬氨酸氨基转移酶参考方法建立及性能评价

目的建立测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的参考方法,并对其主要分析性能进行评价。方法按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)颁布的AST一级参考测量程序(37℃)的要求建立参考方法,并根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)系列文件(EP15-A、EP6-A)对建立的参考方法的精密度、线性范围等性能进行评价,通过测定有证参考物质(ERM)和参加国际参考实验室间比对活动(RELA)对准确度性能进行评价。结果所有仪器性能均符合IFCC公布的关于AST的测定参考方法(37℃)的标准操作程序以及CNAS-CL33:《检测和校准实验室能力认可准则在临床酶学参考测量领域的应用说明》中对临床酶学参考实验室的主要设备的计量学性能要求;CV批内<1%,CV总<1%,符合参考方法精密度性能要求;ERM测定均值在其给定的参考值范围内,RELA测定结果在其给定的置信区间内,符合参考方法准确度性能要求;在AST参考方法所涉及的浓度范围内(16.05～361.88U/L)呈线性,本实验室检测线性范围上限为361.88U/L,高于IFCC公布的AST参考方法的最大线性范围(247.65U/L)。结论 AST参考方法已基本建立,精密度、准确度及线性范围等性能指标均符合方法要求。可以提供给参考物质赋值等参考测量服务以及进行相关标准化研究。

2型糖尿病合并视网膜病变患者凝血功能分析

目的分析2型糖尿病(T2DM)合并视网膜病变(RD)患者的凝血功能。方法选择T2DM确诊患者154例,根据患者眼底检查结果分为无DR(NDR)组、DR组,DR组患者分为增殖性视网膜病变(PDR)组和非PDR(NPDR)组。采集所有患者一般资料,同时检测空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白A1c(HbA1c)、胆固醇(CHOL)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(DD)、纤维蛋白降解产物(FDP)等指标水平。对各研究组检测结果进行统计学分析。结果各研究组间FPG、HbA1c、CHOL、TG、HDL、LDL、PT、APTT、TT、DD、FDP水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。DR组FIB水平高于NDR组(P<0.05),NPDR组、PDR组FIB水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论糖尿病合并DR患者FIB水平升高,FIB可能在T2DM合并DR的发生、发展过程中起到一定的作用。

2型糖尿病伴视网膜病变患者的尿微量白蛋白和超氧化物歧化酶的变化特征

目的分析超氧化物歧化酶(SOD)和尿微量白蛋白与2型糖尿病视网膜病变的关系。方法收集2型糖尿病152例,行眼底镜检查、OCT+眼底照相检查或者眼底血管荧光造影检查,记录患者的一般临床资料,检测空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c%)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TRIG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿素氮(BUN)、血肌酐(CRE)、超氧化物歧化酶(SOD)以及8h尿液中的微量白蛋白。根据眼底检查结果对这些糖尿病患者进行分组,分析不同指标之间的变化;按照尿液微量白蛋白进行分组,分析DR发生率和SOD在不同组之间的差异。统计分析时,对于定量资料:两组间比较采用成组t检验,三组间比较采用单因素方差分析;对于计数资料:两组间比较采用卡方检验,三组间比较采用k样本的非参数统计。结果根据眼底结果分组,血SOD、血CRE、血BUN以及8h尿微量白蛋白在不同的组之间有统计学差异(P<0.05);按照8h尿微量白蛋白的不同程度分组,DR的发病率随着尿微量白蛋白的排出增加而升高(P<0.05),SOD是随着尿微量白蛋白排出的增加而降低。结论血SOD和尿微量白蛋白在糖尿病视网膜病变的过程中发挥一定的作用。

糖尿病足感染病原菌分布和耐药特点研究

目的研究糖尿病足感染的病原菌分布特征和耐药特点,为临床治疗提供科学依据。方法收集糖尿病足患者感染创面的分泌物标本,标本接种于培养基后在5%CO 2培养箱中35℃培养24~48 h。采用Vitek 2细菌鉴定及药敏系统和K-B法药敏试验对培养阳性的菌株进行菌种鉴定和药敏试验。结果共收集563份糖尿病足感染患者标本并获得319株病原菌,其中革兰阴性菌占60.2%,革兰阳性菌占35.1%,真菌占4.7%。主要的革兰阴性菌为大肠埃希菌(14.4%)、肺炎克雷伯菌(12.5%)、铜绿假单胞菌(11.9%)和鲍曼不动杆菌(11.3%)。主要革兰阳性菌为金黄色葡萄球菌(11.0%)、凝固酶阴性葡萄球菌(9.4%)和肠球菌属(9.1%)。药敏试验结果显示肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌对左氧氟沙星、亚胺培南、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、美罗培南以及阿米卡星的敏感率较高,均在70%以上;鲍曼不动杆菌对亚胺培南敏感率较高(72.2%);主要革兰阳性菌对万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁的敏感率较高,均在86%以上。结论糖尿病足感染病原菌分布广泛,不同细菌耐药特点不同,临床应根据菌种鉴定和结果合理选择抗菌药物。