肿瘤专科医院机会性感染筛查患者梅毒螺旋体血清学试验阳性率调查

目的调查近一年肿瘤专科医院行感染筛查患者梅毒螺旋体血清学阳性率,评价化学发光微粒子免疫分析法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination,TPPA)和梅毒快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma regain card test,RPR)3种方法检测结果的一致性,为制定合理的梅毒螺旋体血清学筛查和报告模式提供依据。方法梅毒血清学初筛采用CMIA,当S/CO>1时,报告初筛阳性,阴性结果发阴性报告;阳性时,行TPPA和RPR检测。分析不同滴度范围TPPA和RPR的阳性率。结果连续入选40350例行感染筛查患者,初筛阳性者共519例(占1.29%)。初筛阳性者TPPA复检阳性373例(占71.86%),RPR阳性49例(占9.44%)。CMIA检测滴度S/CO在1.1~2.0、2.1~3.0、3.1~4.0、4.1~5.0、5.1~6.0、6.1~10.0、>10时,TPPA与RPR检测的阳性率分别为21%、0%,67%、0%,71%、5%,68%、10%,91%、9%,89%、0%,99%、21%。结论肿瘤专科医院患者梅毒螺旋体血清学特异性抗体CMIA初筛阳性率和TPPA确认试验阳性率与三级综合医院相近,但RPR阳性率较低。初筛滴度边缘升高者,TPPA阴性者占比高。

新一代测序技术在肿瘤临床中的应用

随着测序技术的不断发展,成本低、速度快、通量高的新一代测序(NGS)技术在肿瘤临床领域显现出很高的应用价值。本文对NGS在肿瘤临床中的应用和研究进行了综述,主要包括检测胚系突变和单核苷酸多态性用于肿瘤预测预防,检测血浆中循环肿瘤DNA(ctDNA)用于肿瘤的早期诊断,基于NGS的单细胞测序技术检测体细胞突变用于指导个体化、靶向治疗及疗效预测。同时也简要介绍了NGS技术在临床应用中面临的挑战,为其更好地服务于临床提供思路。

人Survivin蛋白的纯化、单克隆抗体的制备及在肿瘤细胞的表达

目的表达人Survivin重组蛋白、制备单克隆抗体及检测Survivin在多种肿瘤细胞中的表达。方法诱导含有pMS-Survivin重组质粒的E.coli.表达人MS2-Survivin重组蛋白,并作为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA双筛,获得稳定分泌抗人Survivin mAb的杂交瘤细胞株。ELISA检测Survivin mAb的特异性。免疫细胞化学检测多种肿瘤细胞中天然Survivin的表达情况。结果诱导菌在相对分子质量为30KD左右表达出一新的蛋白条带。筛选出2株稳定分泌特异性抗人Survivin mAb的杂交瘤细胞株,亚类鉴定均为IgG1类。两株单克隆抗体的效价均达到6.4×105。ELISA结果显示出抗人Survivin mAb的特异性。在胃癌细胞、肺癌细胞、宫颈癌细胞中均强表达,且主要在细胞浆中。结论成功制备出特异性抗人Survivin mAb,为以后应用于临床检测奠定了基础,也为其进一步开发成诊断性试剂盒奠定了基础。

拉萨地区儿童临床常用生化检验项目参考区间验证

目的验证卫生行业标准WS/T780-2021《儿童临床常用生化检验项目参考区间》,判断其是否适用于我实验室所服务的拉萨地区儿童。方法在拉萨市人民医院体检人群中筛选健康体检儿童,按照参考区间建立时的性别、年龄亚组划分标准,每亚组筛选合格参考个体不少于20名,按WS/T661《静脉血液标本采集指南》采集样本,在迈瑞BS2000全自动生化分析仪上进行生化项目检测,将检测结果与行标参考区间进行比较,并对各检测参数进行年龄性别间差异比较。结果17~18岁女孩碱性磷酸酶(ALP)符合率为73.6%,未通过验证;其余的各亚组符合率均>90%,通过验证。对各项目年龄组间差异分析,除血清氯(Cl)在年龄组间差异无统计学意义,其余各项目在年龄组间差异均有统计学意义(P<0.05)。对相同年龄段性别间差异分析,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)13~18岁男女组间差异无统计学意义,无机磷(IP)15~18岁男女组间差异无统计学意义,其余各项目在相同年龄段性别间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论《儿童临床常用生化检验项目参考区间》基本适用于拉萨地区儿童,17~18岁女孩碱性磷酸酶参考区间应单独制定;儿童生化检验项目在不同年龄及性别间有较大差异,实验室在引用或建立儿童生化项目参考区间时应重视年龄及性别划分。

UA-5800和AE-4020尿液分析仪尿蛋白试纸条结果的一致性及其与尿蛋白/肌酐比值的相关性研究

目的比较迈瑞公司UA-5800和日本爱科来公司AE-4020尿液分析仪试纸条检测尿蛋白的一致性并验证其测定的灵敏度和特异性。方法随机收集2016年10月某肿瘤专科医院门诊及住院尿液标本共721例,同时采用UA-5800和AE-4020尿液分析仪行尿蛋白定性检测,其后采用生化分析仪检测尿白蛋白含量和肌酐水平,计算尿白蛋白/肌酐比值(ACR)。以ACR≥30 mg/g Cr作为尿蛋白阳性的诊断标准,以尿试纸条阴性组ACR<30 mg/g Cr的阴性率作为特异性,以尿试纸条结果微量、1+、2+和3+组ACR≥30 mg/g Cr的阳性率作为灵敏度。结果UA-5800和AE-4020的尿蛋白定性结果具有一致性(κ=0.65),两者检测尿蛋白的特异性分别为85.19%和83.41%。UA-5800和AE-4020检出蛋白尿的灵敏度在尿蛋白微量组、1+组、2+组和3+组分别为35.53%和34.27%、86.79%和73.69%、100%和100%、100%和92.31%。结论国产UA-5800和日本AE-4020尿分析仪尿蛋白干化学检测具有较高的一致性和良好的诊断蛋白尿的特异性和灵敏度。二者均具有良好的蛋白尿筛查性能。

临床实验室HIV感染的筛查、确认及报告

艾滋病在我国的传播呈现快速增长的趋势,已成为严重威胁我国人民健康的公共社会问题。近几年来中国疾病预防与控制中心对于HIV感染筛查策略有所调整,中美间筛查策略也有细微差别。该文简要介绍了HIV感染者筛查的血清学生物标志物及中美筛查和确认策略,并对医疗机构HIV筛查报告发放模式提出建议。

实验室检查在胸腔渗出液与漏出液鉴别诊断中的作用

胸腔积液是由于局部或全身病变破坏了胸腔内液体滤过与吸收的动态平衡,导致胸腔内液体形成过快或吸收过缓所产生的一种临床常见病征,分为渗出液与漏出液两种性质。胸腔积液的性质对病因的辅助诊断具有一定的临床价值。本文对形态学和生物化学检查在渗出液与漏出液鉴别诊断中的现状作归纳与总结。

建立数字PCR检测非小细胞肺癌溶酶体相关的4次跨膜蛋白B基因拷贝数变异方法

建立芯片式数字PCR(dPCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)LAPTM4B基因拷贝数变异方法,并初步评估其基本性能和临床应用的可行性。设计LAPTM4B基因引物及特异性探针,建立dPCR反应体系,根据制备的不同浓度目的DNA样品验证该检测方法的最低检测限、精密度和线性范围。本研究首次建立并优化dPCR检测LAPTM4B基因拷贝数的反应体系,分析数据显示,该方法最低检测到12.5%的LAPTM4B基因拷贝数缺失,批间精密度变异系数CV<10%,且缺失比例在12.5%~100%范围内线性良好(R^(2)>0.99)。此外,收集2021年3月至7月于北京大学肿瘤医院就诊的6例NSCLC患者,采用自建方法检测其冰冻组织标本,探究其临床应用可行性。dPCR结果显示,其中5例患者的组织样本存在LAPTM4B基因拷贝数缺失,1例出现拷贝数增加,推测可能与其术前化疗有关。综上所述,本研究成功应用芯片式dPCR方法,建立非小细胞肺癌LAPTM4B基因拷贝数变异的检测体系,并在组织标本中初步证实其临床应用的价值。

CellaVision DM96血细胞形态分析仪外周血细胞分类结果评价

目的评价CellaVision DM96全自动血细胞形态分析仪(简称DM96)对外周血白细胞与非白细胞成分识别与分类的性能。方法选取来自健康体检人员、肿瘤患者及白血病患者共155例外周血标本,经涂片染色,用DM96对外周血中白细胞与干扰白细胞识别的非白细胞成分共17类进行预分类,经专业人员审核再分类,以再分类结果作为"金标准"计算DM96对这17类成分分类的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果本研究DM96共采集白细胞与非白细胞成分19 587个,总正确率为82.3%(16 123/19 587)。DM96在健康体检人员和肿瘤患者组中对中性粒细胞、淋巴细胞预分类的敏感性和阳性预测值均>85%。DM96对检测幼稚粒细胞的敏感性及阳性预测值均<50%,对原幼细胞的敏感性较低,为36.1%(223/618),但阳性预测值良好,为92.1%(223/242)。结论 DM96对成熟细胞有较高识别能力,但对幼稚粒细胞和原幼细胞的识别不佳;可作为外周血涂片形态学复检的辅助工具,但对含有幼稚细胞较多的白血病外周血标本,建议仍进行人工显微镜检查。

3种检测系统常规血液凝固试验结果一致性比较

目的比较3种系统测定凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(PT-INR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(DD)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)结果的一致性,并观察质控物的基质效应。方法选取不同水平患者样本100份,采用CA7000血液凝固分析仪、Top700血液凝固分析仪、CP2000血液凝固分析仪(分别简称CA7000、TOP700、CP2000)同时检测PT、PT-INR、APTT、Fib、TT、DD、FDP,采用线性回归分析评价不同系统检测患者样本结果的相关性,计算两两系统间相对偏差。选取18种不同来源质控物在3种检测系统上同时检测PT、Fib、DD,评价质控物互换性。结果不同系统检测患者样本PT、PT-INR、Fib结果有良好的相关性(r2为0.91～0.99),两两系统间偏差分别<15%、15%、20%;3种系统检测DD的结果显著相关(r2≥0.90),CA7000、CP2000检测DD一致性好,但Top700测定结果显著低于CA7000、CP2000;不同系统检测患者样本APTT、TT结果有中度相关性(r2为0.56～0.76),且三者间测定结果有系统偏差。3种系统均采用同一品牌试剂盒及配套校准品检测FDP,系统间FDP检测结果有良好相关性(r2>0.99)。不同系统检测DD结果相关性良好(r2为0.92～0.99),但两两系统间测定结果偏差显著。18种质控物PT、Fib、DD的检测结果在3种检测系统间均无互换性。结论不同检测系统血液凝固试验检测结果一致可比程度不同,血凝质控物基质效应显著,使其在不同系统上检测结果偏差大于患者样本的检测结果。

腺苷脱氨酶诊断结核性胸腔积液的性能验证

目的验证腺苷脱氨酶(ADA)诊断结核性胸腔积液的性能。方法连续收集结核性胸腔积液43例、非结核性胸腔积液163例,用酶动力学法检测胸腔积液中ADA浓度。以非结核性胸腔积液组为对照,用ROC曲线计算ADA诊断结核性胸腔积液的临界值,并与既往文献报道的ADA诊断的敏感性和特异性进行比较。结果结核性胸腔积液组ADA浓度(中位数52.5 U/L)高于对照组(中位数9.8和10.6 U/L)(P<0.05)。临界值为25.0 U/L时,诊断结核性胸腔积液的敏感性和特异性分别为88.0%和91.0%。分析17篇QUADAS评分≥10分的文献发现,ADA诊断结核性胸腔积液的临界值为(28.1±12.8)U/L(10.2~55.8 U/L),Meta分析合并的诊断敏感性为89.0%(95%CI:87%~91%),合并的特异性为89.0%(95%CI:88%~91%)。结论 ADA诊断结核性胸腔积液的敏感性和特异性可达85%以上,但不同文献报告的诊断临界值有所差异。

血清VEGF对非小细胞肺癌患者治疗疗效评估的指导意义

目的检测非小细胞肺癌患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)变化水平,评估治疗对VEGF的影响及其临床作用,探讨VEGF在非小细胞肺癌患者化疗或手术后疗效评估的指导意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测444例非小细胞肺癌患者血清标本中VEGF水平,其中71例未接受任何治疗,177例接受化疗,140例曾接受手术治疗,33例正在接受表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗,23例接受贝伐单抗联合化疗,同时检测86例健康志愿者的血清标本。结果非小细胞肺癌患者血清VEGF水平明显高于健康志愿者血清VEGF水平(P<0.001),血清VEGF水平与肿瘤大小及患者吸烟状态相关。接受贝伐单抗联合化疗患者血清VEGF水平低于未接受治疗患者血清VEGF水平(P=0.009),接受化疗患者出现完全缓解(CR)和部分缓解(PR)的血清VEGF水平比评效为疾病稳定(SD)和疾病进展(PD)的患者血清VEGF水平低(P=0.042),在既往接受手术治疗的肺癌患者中,发生复发转移的患者血清VEGF水平高于未发生复发转移的患者(P<0.05),近期手术患者接受辅助化疗者血清VEGF水平低于未接受辅助化疗者(P=0.024)。结论血清VEGF水平对非小细胞肺癌患者具有一定诊断意义以及对化疗和手术等治疗的疗效评估具有良好的指导和预测意义。

全自动血细胞分析仪体液模式与手工法对胸腹腔积液细胞计数及分类的结果比较

目的与手工法对比,评价迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪体液模式对胸腹腔积液细胞计数及分类的准确性。方法收集2017年7月至2018年3月某肿瘤专科医院患者胸腹腔积液标本112例。应用全自动血细胞分析仪体液模式(仪器法)与改良牛鲍计数板(手工法)进行红细胞、有核细胞计数及分类,观察两种方法的计数结果的相关性和偏差。结果无论血性或非血性胸腹腔积液标本,红细胞(RBC-BF)手工法与仪器法计数均有较强的相关性(rs分别为0.989、0.973)。与手工法比较,血性标本红细胞仪器法计数较非血性标本一致性好,偏差分别为-8.9%~27.6%、-27.6%~25.3%。有核细胞总数≤100×10^(6)/L时,有核细胞(TC-BF)、单个核细胞(MN)、多个核细胞(PMN)仪器法与手工法计数相关性(rs分别为0.704、0.792、0.761),低于计数>100×10^(6)/L区间内的相关性(rs分别为0.958、0.930、0.925);两个区间内三者仪器法与手工法计数的最大相对负偏差分别为-60%~-42.3%、-25.2%~-22.1%,最大正偏差分别为41.1%~54.5%、28.7%~29.7%。结论迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪体液模式红细胞计数和在有核细胞数>100×10^(6)/L时的TC-BF、MN、PMN计数与手工法比较具有良好的一致性。

慢性肾脏病及急性肾损伤的实验诊断

慢性肾脏病（CKD）为各种原因所致慢性肾脏疾病的统称，常规实验室检查在其诊断和筛查中具有重要的作用。急性肾损伤（AKI）是一组以肾功能急性减退、血清肌酐在短期内急剧升高为共同临床表现的综合征，尽管治疗技术有了很大提高，但其总病死率高，主要原因归于尚缺乏早期诊断标志物。本文简要讨论实验室检查在AKI和CKD诊断管理中的建议及未来面临的挑战。

肾脏病发作概念的问世与急性肾损害分类和诊断标准更新

急性肾损伤（AKI）是一种发生率和病死率较高的临床综合征。为提高对AKI的认识，有学者提出肾脏病发作的概念，其后透析质量指导组（ADQI）发布了2013广义AKI分类和诊断建议。ADQI广义标准将AKl分为单纯尿肾小管损伤标志物阳性、血清肌酐未升高和功能损伤标志物阳性（血清肌酐急性升高或尿量快速减少）两类。肾脏病发作概念及广义AKI诊断标准的提出将进一步推进AKI的早期诊断、预防和治疗决策。（中华检验医学杂志，2014，37：404-405）