溶栓剂蛋白质工程的新进展

介绍了国内外溶栓剂蛋白质工程方面的新进展，主要涉及了组织型纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ） 、尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｕＰＡ）、链激酶（ＳＫ） 、葡萄球菌激酶（ＳＡＫ） 、ＤＳＰＡ 及ＴＳＶＰＡ 的研究进展。一些ＰＡ 突变体及新型溶栓剂，如Ｋ２Ｐ、ＴＮＫＰＡ和ＳＴＡＲ等的临床实验结果表明它们在延长体内半寿期、增强对血纤维蛋白选择性和溶栓效率等方面有较大的改进。但溶栓治疗造成的颅内出血等局部性出血问题仍是目前的难题之一，说明新型溶栓剂的研制有很大潜力。

植物耐旱基因工程研究进展

随着生物技术的发展 ,特别是基因工程技术的迅速发展 ,植物耐旱已从传统的植物生理研究转向分子方向 .目前植物耐旱研究的分子生物学方法主要是基因工程技术 ,包括植物耐旱相关基因的克隆 ,植物水胁迫代谢调节相关基因的分离、鉴定 ,以及通过植物遗传转化改变植物遗传性状———获得稳定的耐旱植株 ,进一步推广生产 .利用植物基因工程技术获得稳定耐旱植株 ,对于干旱地区的农业、生态环境、畜牧业以及城市绿地的改造来说可能又将引起一场新的绿色革命 .

植物基因工程的现状与展望

介绍了80年代以来植物基因工程的历史、现状和发展趋势,对利用转基因植物生产药用蛋白,用工程病毒为载体生产药用蛋白,改进植物品质及逆境适应性,提高光合作用和固氮效率,抗除草剂工程植物及工程微生物与生物医学的关系等作了可行性分析和前景预测。

现代植物基因工程的挑战与希望

自从70年代末首次从分子水平上证实了有一种细菌,即土壤农杆菌(Agrobacterium tu-mefaciens)在侵染植物细胞后,不但能将它的一段DNA插入到被侵染的细胞的基因组中,而且还能稳定地随着植物遗传给后代。植物基因工程的发展日新月异,连续取得了一系列重大的突破,特别是进入80年代中后期,人们利用植物基因工程在植物抗病、抗虫、抗除草剂。

植物基因工程的研究及发展趋势(书面)

生物技术是10多年来迅速发展起来的高技术、新技术,具有十分明显的社会效益和经济效益。在所有的生物技术领域中,农业生物技术、特别是有关作物生物技术的研究和发展被认为是最有现实意义的技术之一,将在下一世纪出现的“绿色革命”中发挥巨大的作用。农业生物技术研究的内容有植物基因的操作,植物细胞和植物组织的培养,转基因植物和转基因鱼类、家畜家禽的获得等。农作物生物技术方面主要研究方向是提高蛋白质含量,改良氨基酸组成,提高作物抗逆境、细菌。

烟草花叶病毒运动蛋白基因的cDNA克隆、序列测定及植物转化

植物病毒侵染宿主植物的一个重要过程是通过它在宿主体内的转移和传播,产生病害。植物病毒在宿主体内的转移主要有两种方式,一种是通过植物维管组织进行的系统转移,另一种是植物病毒在宿主细胞之间的转移,这种转移是通过植物细胞的胞间连丝实现的。实验表明,病毒自身编码的一种蛋白参与了这个转移过程,对烟草花叶病毒(TMV)而言,这种蛋白就是分子量为30kDa的运动蛋白。

植物水孔蛋白研究进展

植物水孔蛋白在植物体内形成水选择性运输通道 ,在植物种子萌发、细胞伸长、气孔运动、受精等过程中调节水分的快速跨膜运输。有些水孔蛋白还在植物逆境应答中起着重要作用 ,因此研究水孔蛋白与植物抗旱性的关系引起了广泛关注。对水孔蛋白的发现、结构、分类、分布。

通过转基因途径获得植物雄性不育

对利用转基因的方法获得植物雄性不育的研究进展进行了概述 .小孢子发育过程涉及花药发育到花粉粒成熟过程中一系列基因的表达 .这些基因表达的异常往往导致部分或全部的花粉败育 .利用绒毡层特异性启动子或花药特异性启动子驱动一种外来基因的表达可以导致雄性不育 .育性的恢复也可通过转基因技术来实现 .控制植物育性的基因工程将在优势育种中发挥越来越重要的作用 .

超敏反应辅助蛋白基因(hrap)转化番茄的研究

将可以诱发植物对病原菌抗性的甜椒hrap基因置于35S启动子的驱动下,经农杆菌介导引入番茄。再生植株经过含卡那霉素的培养基的选择,后经PCR检测和Southern杂交鉴定含有目标基因。Northern杂交检测其表达后,初步的抗菌检验显示其提高了对青枯病原菌的抵抗力。

天麻中一种抗真菌蛋白基因的克隆

依据天麻(GastrodiaelataBl.f.flavidaS.Chow)抗真菌蛋白GAFP_1的N端部分氨基酸序列设计简并引物,通过RACE(快速分离cDNA末端)的方法扩增得到GAFP_1全长cDNA。该cDNA包含一个编码171个氨基酸的ORF,推导的多肽序列与测得的蛋白质部分序列相同;在5′端有一个长为55bp的5′非编码区;终止密码子下游有一个141bp长的3′非编码区,其中含有两个加poly(A)信号及长度为26个腺苷酸的poly(A)。经检索发现该推导蛋白序列与火烧兰(Epipactishelloborine)和二叶兰(Listeraovata)的甘露糖结合蛋白以及雪花莲(Galanthusnivalis)中的甘露糖结合凝集素具有很高同源性。

高等植物的LRR蛋白:结构与功能

ＬＲＲ结构存在于细胞定位和功能上各不相同的多种蛋白质中，与蛋白质之间的相互作用和细胞内的信号传递过程密切相关。植物中含ＬＲＲ的蛋白主要有类受体蛋白激酶、抗病基因编码的蛋白和多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白等，它们分别在细胞的生长发育、抗病反应等过程中发挥着重要作用，其相似的ＬＲＲ结构为从分子水平上研究这些蛋白的作用机制提供了结构基础。

外源钙调蛋白对植物细胞分裂增殖作用的研究

外源钙调蛋白（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ，ＣａＭ）对胡萝卜悬浮细胞增殖具明显促进作用，不同浓度ＣａＭ的促进程度不同，７ｕｇ／ｍｌ时促进作用最大。ＣａＭ抑制剂ＴＦＰ（Ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒ－ａｚｉｎｅ）则明显抑制该悬浮细胞的增殖，ＴＦＰ浓度越高则抑制作用越强。另外，外源ＣａＭ可以加快珍珠梅花粉第二次有丝分裂，改变生殖细胞有丝分裂各期花粉管的比例，说明外源ＣａＭ对植物体细胞和性细胞的增殖和分裂均有促进作用。

cre基因在大肠杆菌中的表达及表达蛋白活性的检测

Cre重组酶来自噬菌体P1,可以识别特异的loxP位点的DNA序列 ,并进行专一性的剪切和拼接。利用PCR技术将cre基因克隆至原核表达载体pET 2 9a ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)得到了高效表达。采用DEAE 5 2柱层析的方法对表达蛋白进行了纯化。体外生物学活性检测表明 ,表达蛋白对含有同向loxP位点的质粒有切割活性。

人肝金属硫蛋白-I_A基因在鱼腥藻中的克隆与表达

将人工合成的人肝金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，简称ＭＴ）－ＩＡ基因插入至中间载体ｐＲＬ－４３９上强启动子ｐｓｂＡ后，再将其与穿梭载体ｐＫＴ－２１０相连，得到大肠杆菌－蓝藻穿梭表达载体ｐＫＴ－ＭＴ，用三亲接合转移法将ｐＫＴ－ＭＴ转入丝状体蓝藻－鱼腥藻７１２０，经链霉素筛选，得到了稳定的转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻．纯化单藻落，液体扩大培养．从鱼腥藻中提取的质粒经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，确定人肝ＭＴ－ＩＡ基因已转入鱼腥藻７１２０中，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析表明，金属硫蛋白在转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻中得到了表达．经原子吸收光谱法测定表达量约为７００μｇＭＴ／ｇ鲜藻，重金属耐受性实验表明，得到了能耐受重金属－镉的转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻，它将在清除水域中重金属污染和医药研究方面发挥重要作用．

香蕉钙调蛋白基因的克隆及序列分析

从香蕉（ＭｕｓａｎａｎａＬｏｕｒ，）果实中提取总ＲＮＡ，以ＯｌｉｇｏｄＴ（１８ｂｐ）为引子合成ｃＤＮＡ第一链，以大麦钙调蛋白基因两端的寡聚核苷酸为引物，用ＰＣＲ方法扩增香蕉钙调蛋白基因，并克隆到ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ－载体上。酶切分析和测定ＤＮＡ全序列，将该序列与几种植物的钙调蛋白基因作比较，同源性高达８１．９％－９５．３％。进一步将基因克隆到表达载体ｐＴｒｃＨｉｓＢ上，得到高效表达的融合蛋白。

外源甜蛋白THAUMATINII基因转入烟草的研究

利用土壤农杆菌系统，将高甜度的外源甜蛋白ｔｈａｕｍａｔｉｎＩ１基因转入烟草细胞，并得到大量转基因植株及其后代。经分子杂交分析确证ｔｈａｎｍａｔｉｎＩＩ基因已整会到烟草植株的基因组中，并在转录水平检测到表达。标记基因胭脂碱合成酶（ＮＯＳ）基因及新霉素磷酸转移酶（ＮＰＴＩＩ）基因也在转基因植株中正常表达。

番茄转果聚糖合酶基因获得抗寒植株

从枯草芽孢杆菌毖Bacillus subtilis中分离克隆果聚糖合酶(levansucrase)基因sacB,构建置于CaMV35s启动子调控下的表达载体,通过农杆菌介导,将sacB基因导入番茄栽培品种碧娇。Southern杂交证明,目的基因已经整合到番茄基因组中。RT-PCR分析表明,sacB基因在转基因植株中获得转录。在含50mg·ml-1卡那霉素生根培养基中转化植株生根良好。抗冻试验、叶片电导率测定、多糖含量测定的试验结果均表明,果聚糖合酶基因赋予转基因番茄良好的抗寒性状。

查尔酮合酶基因的克隆、全序列分析及在大肠杆菌中的高效表达

类黄酮是植物中的一种重要的次级代谢产物,它与植物的花色形成有关。查尔酮合酶(Chalcone synthase,CHS)是类黄酮合成途径中的一个关键酶,在植物体内,CHS表达量的增加或减少都可能改变花的颜色。从矮牵牛(Petunia hybrida)花瓣的cDNA中克隆到了CHS-A基因,进行了全序列分析,并与国外已报道的CHS-A序列进行了同源性比较。结果表明,克隆的CHS-A基因长为1170bp,编码一个由389个氨基酸组成的多肽,与国外已报道的CHS-A同源率高达99％。此外,还在大肠杆菌中实现了CHS-A基因的高效表达。CHS-A基因的成功克隆与表达为研究CHS-A基因对植物花色的影响打下了一个良好的基础。

Cre-lox重组系统介导转基因烟草中外源基因删除的研究

对Cre在转基因个体中介导的重组效率进行了研究。构建了含有Cre基因 (p35S Cre)和GUS基因侧翼含同向loxP位点的 (loxP p35S GUS loxP)两种植物表达载体。以共转化的技术将两种基因元件同时转化烟草得到转基因植株 ,根据对共转化植株GUS基因的活性分析、分子检测、PCR检测及对重组后扩增DNA片段进行序列分析表明 :Cre loxP重组系统在转基因烟草中能精确高效地介导转基因的删除 ,但也存在部分植株不能完全删除的现象。

转基因产品致敏性评估的规范化

在转基因产品商业化之前需要对其安全性进行全面评估 ,其中包括对潜在致敏性的评价。介绍了多个国际组织对致敏性的评估程序 ,并对致敏性测试的某些环节进行了论述。随着中国加入WTO以及在国际贸易中转基因产品数量和品种的增加 ,我国对转基因产品食用安全性中致敏性的评估程序及评估技术与国际接轨日益重要。