模拟长期微重力对大鼠耳蜗基底膜p120-catenin表达的影响

目的观察模拟长期微重力对大鼠听功能的影响,探讨耳蜗黏附连接蛋白p120-catenin(p120ctn)在耳蜗基底膜表达情况及模拟微重力对其产生的影响。方法选取健康雄性SD大鼠48只,随机分为模拟微重力组和对照组,每组24只;模拟微重力组和对照组又根据暴露时间分别随机分为1 d、1周、8周、12周组,每组6只12耳。在暴露前(B0)、暴露结束后即刻(P0)进行双耳畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustic emission,DPOAE)和听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值检测,并于P0测听结束后处死每组大鼠并分离双侧耳蜗,进行免疫组化染色。结果各组DPOAE引出率比较,差异无统计学意义(P>0.05),ABR阈值随暴露时间的增加而升高,模拟微重力1周组、模拟微重力8周组、模拟微重力12周组P0时ABR阈值较B0时升高,差异有统计学意义(P<0.05)。模拟微重力8周组、模拟微重力12周组基底膜上p120ctn阳性表达较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论模拟微重力会导致大鼠听功能损伤,耳蜗基底膜上p120ctn表达随暴露时间的延长而增加,中长期微重力导致听功能下降可能与基底膜p120ctn的表达增加有关。

脉冲噪声所致爆震性听力损失人员中耳聋基因的突变谱研究

目的基于全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)检测在脉冲噪声所致的爆震性听力损失(explosion-induced hearing loss,EIHL)患者中耳聋基因的突变情况。方法采用横断面研究,收集长期暴露于脉冲噪声作业环境的作业人员共105人,对其工作环境进行噪声测试,并对作业人员进行纯音测听,根据听力情况对发生EIHL的作业人员行WES分析。采用生物信息学方法分析WES结果以筛选与耳聋机制相关的基因在EIHL中存在的基因突变情况。结果发生EIHL的作业人员共75人。纯音测听结果显示,EIHL组人员与同样环境下听力正常的作业人员比较,各个频率上的纯音听力均更差(P<0.05)。通过WES基因筛选,在已被标记为耳聋基因的基因中,有29个耳聋基因在EIHL人群中发生罕见有害错义突变,共包含37个有害错义突变位点。其中GJB4发生突变的频率最高,在4名作业人员中发生突变,突变位点为C292T、C370T和G376A。结论GJB4为本研究EIHL人群中突变频率最高的耳聋基因。

单侧症状的双侧腰椎神经根管狭窄行单、双侧减压的前瞻性研究

目的:探讨腰椎同一节段双侧神经根管狭窄伴单侧症状患者行单侧减压或双侧减压的治疗效果。方法:对同一节段双侧腰椎神经根管狭窄伴单侧症状患者80例,前瞻性随机分为行单侧减压组(A组)和双侧减压组(B组),均行后路斜向腰椎关节融合术(posterior oblique lumbar arthrodesis,POLAr)治疗,分别观察术前、术后腰痛及患肢疼痛的VAS评分,记录手术时间,采用统一的临床功能评估标准评估临床疗效,观察并发症发生情况。结果:术后随访11～30个月,平均18个月。每节段手术时间A组为136.3±42min,B组为152.6±38min,两组间差异有显著性(P<0.05)。两组术后1、3、6个月及末次随访时腰痛及患肢疼痛VAS评分与术前比较差异有显著性(P<0.05)。根据临床功能评估标准,A组优28例,良3例,可4例,差5例,临床优良率为77.5%(31/40);B组优35例,良2例,可3例,临床优良率为92.5%(37/40),两组间差异有显著性(P<0.05)。所有病例均未出现切口或深部感染;A组中出现对侧下肢根性疼痛5例,分别行对侧腰椎神经根管封闭术或对侧神经根管减压术后缓解,出现术后一过性节段性感觉运动减退1例,经对症及神经营养药物治疗3周后恢复;B组未出现下肢根性疼痛病例,出现术后一过性节段性感觉运动减退1例,经对症及神经营养药物治疗2周后恢复;两组之间并发症发生率有显著性差异(P<0.05)。结论:单侧症状的双侧腰椎神经根管狭窄者行双侧减压与单侧减压相比,虽然手术时间较长,但根性疼痛并发症发生率低,临床优良率高。

肝移植急性排异患者外周血Th17及调节性T细胞的特征及意义

目的探讨肝移植术后急性排异患者外周血中Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的变化特征及临床意义。方法 2011年1-9月解放军302医院肝移植研究中心收治的肝移植术后患者25例,根据移植组织穿刺活检病理结果分为急性排异组(排异组,12例)和非排斥稳定组(稳定组,13例),另选取13名健康体检者作为对照。采用流式细胞分析法检测外周血中Th17、Treg细胞占CD4+T细胞的比例,观察Th17/Treg比值变化及其与肝脏损伤的关系。结果移植术后排异组外周血中Th17占CD4+T细胞的比例(3.50%±0.86%)明显高于稳定组(2.10%±0.52%)和对照组(1.79%±0.42%,P<0.01),稳定组和对照组比较无统计学差异(P>0.05)。排异组和稳定组患者外周血中Treg占CD4+T细胞的比例(分别为0.90%±0.25%、1.51%±0.23%)明显低于对照组(2.57%±0.79%,P<0.01),且排异组明显低于稳定组(P<0.05)。排异组Th17/Treg比值(4.20±1.69)明显高于稳定组(1.43±0.47)及对照组(0.75±0.28,P<0.01),且稳定组明显高于对照组(P<0.01)。Th17/Treg比值与丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酸转氨酶(GGT)水平呈正相关(分别为r=0.5023,P=0.0105;r=0.4561,P=0.0219;r=0.4393,P=0.0280;r=0.5516,P=0.0043)。结论肝移植术后急性排异反应患者外周血中存在Th17/Treg失衡,且与肝脏损伤有一定关系。Th17/Treg失衡可能参与了肝移植术后急性排异反应的发生发展过程。

慢性乙肝患者石蜡包埋肝组织中HBV cccDNA定量检测方法的建立

目的建立慢性乙肝患者微量石蜡包埋肝组织共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)定量检测方法。方法以37例慢性乙肝患者甲醛固定石蜡包埋肝组织为研究对象,提取肝组织HBV DNA,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化后,利用滚环扩增加跨缺口实时荧光PCR扩增技术检测肝组织中HBV cccDNA含量,以β-actin为内参照。通过已知浓度的模板DNA进行梯度稀释鉴定该方法的灵敏度,并对该方法进行批内和批间重复性检测。应用该方法分析37例慢性乙肝患者肝组织HBV cccDNA与血清总HBV DNA、肝组织总HBV DNA的关系,以及肝组织HBV cccDNA和HBV DNA与血清HBeAg表达之间的关系。结果成功建立了微量石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的定量检测方法,该方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。HBeAg阳性者肝组织中cccDNA含量明显高于HBeAg阴性者,HBV cccDNA水平与血清总HBV DNA水平(R2=0.48,P=0.042)及肝组织总HBV DNA水平(R2=0.63,P=0.001)呈正相关。结论该方法可特异灵敏地定量检测微量石蜡包埋组织切片中的HBV cccDNA。

肝移植患者外周血Tfh细胞特征的初步研究

目的检测肝移植术前和术后患者外周血滤泡性辅助性T细胞(Tfh)及其分子表达特点,探讨其在肝移植免疫中的作用。方法肝移植术后患者及健康对照各20例,其中移植术后肝功能稳定者13例,对其进行断面研究;余7例病例资料完整,进行随访研究。应用流式细胞仪检测所有入组者的Tfh细胞频率,并对随访患者进行术后1月的动态监测,同时检测其丙氨酸转氨酶(ALT)水平。结果与移植术前相比,移植术后患者外周血CD4+CXCR5+Tfh和CD4+CXCR5+PD-1+细胞频率明显升高(P<0.05),CD4+CXCR5+ICOS+细胞虽有上升趋势,但无统计学意义。随访发现移植术后肝功能稳定患者CD4+CXCR5+Tfh水平在移植术后明显上升,1周后达峰值随后下降,其ALT水平也在术后第10天达到峰值后降低。随访期间1例患者发生急性排斥反应,其CD4+CXCR5+Tfh水平与ALT水平变化趋势一致。肝功能稳定组与健康对照组相比,CD4+CXCR5+Tfh、CD4+CXCR5+PD-1+和CD4+CXCR5+ICOS+细胞频率均明显升高(P<0.05)。结论外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞在肝移植后表达上调,可能参与了肝移植术后的免疫调节。

隐匿性乙型肝炎病毒感染患者S基因突变特点分析

目的分析1例血清HBV DNA长期阳性但HBsAg阴性的隐匿性乙型肝类病毒感染(OBI)患者HBV S基因突变特点,揭示S基因突变与OBI发生及肝脏疾病进展的关系。方法收集该患者不同时间点的4份血清样本,扩增HBV S基因并进行克隆测序,挑选代表性突变株病毒基因构建重组载体并进行表型分析。结果从该患者4份血清样本中检出多种S基因突变形式,包括前S1区大片段缺失、s126–127"RPCMNCTI"插入突变、sQ129N、s131–133 TSM→NST和经典的sG145R突变等,其中s131–133 TSM→NST在前后4份动态样本的检测病毒克隆中所占比例分别为0%、26%、59%和74%;前S1区大片段缺失在4份样本检测病毒克隆中始终存在,所占比例分别为26%、17%、15%和21%。表型分析发现,sQ129N和s131–133 TSM→NST可以降低抗体对HBsAg的亲和力,增加病毒分泌;与野生株相比,前S1区大片段(nt 3046–3177)缺失病毒株复制力下降了43.7%,表面抗原启动子Ⅱ(SPⅡ)活性下降了97.2%;sG145R可降低病毒的分泌能力。结论此例HBV感染患者的长期OBI临床表现是由于其感染有多种S基因突变病毒株引起,其中一些S基因突变可以影响病毒的表型特点,可能与肝脏疾病进展密切相关。

噪声习服对风洞噪声致听觉损伤的保护作用

目的探讨噪声习服对风洞噪声致听觉损伤的保护作用。方法取健康成年豚鼠100只,随机分为噪声习服后暴露组(A组)和直接暴露组(B组)各50只。A组动物先连续七天暴露于习服噪声后再连续七天暴露于模拟强风洞噪声,B组直接暴露于模拟强风洞噪声7天。分别于实验前、习服噪声暴露后、模拟强风洞噪声暴露后检测各组豚鼠ABR反应阈。结果 A组实验前、习服后、强风洞噪声暴露后ABR反应阈分别为13.45±4.96、20.41±8.22、28.58±10.19dB SPL,B组实验前、强风洞噪声暴露后ABR反应阈分别为:14.88±4.47、26.57±9.89dB SPL。强风洞噪声暴露后A组豚鼠ABR反应阈阈移(8.18±7.96dB)小于B组(11.69±10.92dB)(P<0.05)。结论习服噪声和强风洞噪声暴露均可引起听力损失,但噪声习服可对其后强风洞噪声暴露导致的听力损伤有一定的保护作用。

乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭190例生存分析

目的调查分析乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)早、中期患者预后影响因素。方法随访调查我院2006年9月-2009年1月住院治疗的190例HBV-ACLF早、中期患者,建立临床资料数据库,并进行生存分析。结果对该组患者资料进行生存分析显示:生存时间0.1～26.7个月,中位生存时间为5.10个月。患者3、6、12个月生存率分别为61.8%、57.6%和57.6%。影响生存因素Cox回归模型分析显示:核苷类似物抗病毒治疗能降低早、中期HBV-ACLF患者死亡风险,相对危险度(relative risk,RR)=0.597;而肝肾综合征、电解质紊乱及肝性脑病可以显著增加HBV-ACLF患者死亡风险,RR分别为2.186、2.075、1.864。结论核苷类似物抗病毒治疗早、中期HBV-ACLF可提高患者生存率。肝肾综合征、肝性脑病和电解质紊乱可降低早、中期HBV-ACLF患者生存率。

隐匿性乙型肝炎病毒感染研究进展

血清HBs Ag阴性,但肝组织或血清HBV DNA长期存在,这种状态被称为隐匿性HBV感染(OBI)。由于实际HBV流行率和病毒流行株的地域性差异、所选取的研究人群的差异和不同检测方法的敏感性和特异性的差异,不同研究所得到的OBI的流行率有很大的差别。OBI的形成机制尚未完全阐明,可能有多种病毒学因素、宿主因素参与其中。OBI能通过输血、分娩和肝移植等方式进行传播,引起新发感染。当宿主免疫功能下降或应用免疫抑制性药物时,OBI可以复燃,恢复经典的血清学表现。OBI引起的轻微但持续的坏死性炎症可以促进肝脏疾病的进展,并且可以通过直接或者间接的机制增加肿瘤的发生风险。临床上需要建立更敏感的检测方法诊断OBI,以减少OBI相关的潜在威胁,帮助医师合理采取治疗措施,延缓病情进展。

粒细胞集落刺激因子治疗乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭随机对照临床研究

目的评价重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant granulocyte-colony stimulating factor,r G-CSF)治疗乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)的有效性和安全性。方法将99例ACLF患者随机分为2组,试验组49例,对照组50例。对照组给予内科综合治疗,试验组在综合治疗基础上接受r G-CSF300μg,1次/d,皮下注射,共计6针,然后减量至隔日1次,共6次,总计12针。结果生存分析表明,试验组治疗1月、3月的生存率分别为91.3%和72.9%,大于对照组的63.7%和50.0%(P<0.05)。治疗期间无严重不良反应发生。结论r G-CSF能够显著提高HBV-ACLF患者的生存率,并且有较高的安全性。

失重环境中创伤和应激损伤与修复的研究进展

随着载人航天事业的蓬勃发展,人类对空间环境的认识不断深化。太空环境十分复杂,载人航天工程面临一系列挑战。随着越来越多的航天员相继进入太空,并在太空的驻留时间不断延长,舱外活动日益频繁,航天员发生意外创伤和应激损伤的概率相应增多[1-2]。尽管国外在这方面做了一系列研究,但详细的报道并不多见。

雌激素对模拟失重及飞船舱内噪声下豚鼠内耳Caspase-3表达的影响

目的探讨失重及飞船舱内噪声复合因素对豚鼠听功能及内耳凋亡标志物Caspase-3表达的影响,并观察雌激素对上述复合因素暴露后豚鼠听功能损伤及内耳细胞凋亡的防治作用。方法 36只豚鼠随机分为4组,正常对照组6只(对照组),失重+噪声组(A组)、雌激素治疗组(B组)、雌激素预防组(C组)各10只。各实验组动物均后肢悬吊模拟失重,同时模拟飞船舱内噪声暴露5天,B组暴露过程中每天肌注苯甲酸雌二醇0.08mg/kg,首剂加倍,至暴露结束后3天;C组暴露前3天开始肌注苯甲酸雌二醇0.08mg/kg,首剂加倍,持续3天。对照组不给任何处理。于实验前、暴露后即刻和恢复3天时行听性脑干反应测试,免疫组织化学染色方法观察凋亡标志物Caspase-3在内耳毛细胞、血管纹及螺旋神经节细胞上的表达。结果暴露后当天,B组ABR反应阈低于A组和C组(P<0.05);暴露前后B组ABR阈移也低于A组和C组(P<0.05);恢复前后,C组ABR阈移高于A组低于B组(P<0.05)。对照组毛细胞、血管纹和螺旋神经节Caspase-3表达均为阴性;A、B、C组在暴露后即刻、恢复3天时,毛细胞、血管纹和螺旋神经节上Caspase-3的表达均为阳性;暴露后即刻,B组毛细胞和血管纹Caspase-3表达较弱,而C组表达较强;恢复3天后,A、B、C三组毛细胞、血管纹和螺旋神经节Caspase-3表达仍为阳性,C组表达较弱。结论使用雌激素治疗可有效减少失重和噪声复合作用暴露后即刻的听力损失和内耳细胞凋亡;而预防性使用雌激素对暴露后即刻的听力损伤无保护作用,但在恢复过程中可促进其恢复,减少内耳细胞凋亡。

血小板凝胶的制备方法及其影响因素

背景:血小板凝胶制备方法繁多,分类标准不统一。目的:总结血小板凝胶制备方法,并讨论影响因素。方法:由第一作者检索1990至2011年PubMed数据库及万方数据库。英文检索词为"Plateletgel,Classification,Parameters",中文检索词为"血小板凝胶,分类,影响因素"。结果与结论:依据凝胶产量与成分、凝胶中纤维蛋白结构两个主要影响因素可将血小板凝胶制备方法分为4大类,即纯富血小板血浆凝胶、富白细胞-血小板血浆凝胶、纯富血小板纤维蛋白凝胶和富白细胞-血小板纤维蛋白凝胶;根据制备流程不同,血小板凝胶的每一种制备方法还可以再分为手工制备方法和全自动制备方法,但各种分类方法均存在不足之处。

微重力及太空飞行对微生物影响的研究进展

随着航天事业的迅猛发展,太空感染问题亟待深入研究。微生物是存在于自然界的一群体形微小、结构简单的微小生物。随宇航员和太空飞行器进入太空的微生物,在失重环境下生长变化,时刻威胁着宇航员的健康及飞行器的安全。本文主要对模拟微重力及太空飞行环境中微生物的生物学特性变化,包括微生物形态结构、生长速率、细胞代谢、毒力、生存能力和基因表达等方面做一综述,以期进一步对微重力及太空飞行环境下微生物属性变化进行研究。

肝移植术后γδT细胞及其亚群的特征及临床意义

目的分析肝移植术后发生急性排斥反应的患者外周血中γδT细胞及其Vδ1、Vδ2亚群的特征及临床意义。方法应用流式细胞术(FCM)检测11例肝移植术后发生急排反应患者、16例不发生急排反应患者及12例健康对照者外周血中γδT细胞、Vδ1亚群、Vδ2亚群的频率,以及Vδ1/Vδ2的比值,并分析其与肝功能指标之间的关系。结果急排组外周血中Vδ1亚群频率、Vδ1/Vδ2比值低于稳定组差异有统计学意义(P<0.05);而Vδ2亚群频率高于稳定组,差异有统计学意义(P<0.05);两组间的γδT细胞频率差异无统计学意义,急排组与对照组的Vδ2亚群频率、γδT细胞频率、Vδ1/Vδ2比值差异均无统计学意义;Vδ1/Vδ2比值与ALT、AST、ALP、GGT水平呈明显的负相关。结论 Vδ1亚群可能在维持移植物免疫耐受中起重要作用,肝移植术后Vδ1/Vδ2比值可能作为急性排斥反应的预测指标。

模拟航天环境对大鼠内耳淋巴液容积的影响

目的探讨模拟中长期飞船舱内失重及噪声复合因素对大鼠听力及内耳淋巴液容积的影响。方法健康SD大鼠22只随机分为实验组(失重+噪声组)12只,对照组10只。分别于暴露前、暴露后2周、4周、8周检测其双耳听性脑干诱发电位(ABR)阈值,并进行内耳MRI扫描,通过专用软件对内耳淋巴液容积进行计算。结果 1.实验组动物ABR阈值在暴露4周时开始与实验前出现统计学差异(P<0.05),且8周时ABR阈值与实验前有统计学差异(P<0.01)。2.实验组动物双耳内耳淋巴液容积在暴露2周时与暴露前无统计学差异(P>0.05),在暴露4周时与暴露前开始出现统计学差异(P<0.05),在暴露8周时与暴露前有统计学差异(P<0.01)。对照组动物内尔淋巴液容积在实验前后均无统计学差异。结论模拟中长期飞船舱内失重和噪声复合因素可造成SD大鼠听觉电生理的损伤,且会导致大鼠内耳淋巴液容积增大。

雌激素对模拟航天环境听觉器官的保护作用

目的探讨模拟失重及飞船舱内噪声复合因素对大鼠听觉电生理与超微结构的影响,及雌激素对上述复合因素损伤的保护作用。方法 32只SD大鼠随机分为A、B、C3组,其中A组(失重+噪声组)12只,B组(雌激素+失重+噪声组)12只,C组(对照组)8只。A组、B组动物均粘尾悬吊模拟失重,同时模拟飞船舱内噪声暴露8周,B组动物在此基础上每周两次肌注苯甲酸雌二醇0.02mg/只,首剂加倍,至暴露结束。分别于暴露前、暴露后3天、1周、2周、4周、8周检测其双耳听性脑干反应阈值(ABR)。并于暴露结束后取耳蜗标本进行电镜扫描。结果组内对照,A组SD大鼠在暴露3天直至暴露8周后ABR阈值均较暴露前明显增高(P<0.01);B组SD大鼠在暴露3天直至暴露8周后ABR阈值均较暴露前亦有所增高(P<0.05);C组SD大鼠在暴露2周较暴露1周ABR阈值有所提高(P<0.05),其他时间点增高不显著。组间对照,A组大鼠在暴露3天至暴露8周均较C组大鼠听力显著提高(P<0.01);B组大鼠在暴露3天至暴露8周较C组听力无明显提高(P>0.05);A组大鼠至暴露1周时较B组大鼠听力升高不明显,在以后时间点均较B组大鼠听力明显升高(P<0.05)。扫描电镜显示A组损伤最重,B组损伤次之,C组未见异常。结论失重和噪声复合因素可造成SD大鼠听觉电生理及内耳毛细胞的损伤,雌激素对失重和噪声复合因素下的听功能损伤具有一定保护作用。

习服后风洞噪声相关听力损失易感性及其耳蜗超微结构变化

目的研究噪声习服后暴露和直接暴露于风洞噪声条件下豚鼠听力损失的易感性,和其耳蜗超微结构的变化。方法健康成年豚鼠100只随机分为习服后暴露组和直接暴露组,暴露于习服噪声和风洞噪声,于实验前、习服后、暴露后分别测定听性脑干反应阈值。根据其变化筛选噪声性听力损失易感和非易感个体,并通过扫描电镜观察其耳蜗形态学变化。结果习服后暴露组高强度风洞噪声引起的听阈升高程度较直接暴露组轻,其耳蜗内、外毛细胞病变较直接暴露组轻,各组内易感个体毛细胞损伤较非易感个体明显严重。结论噪声习服可有效减少风洞噪声暴露引起的听力损失和毛细胞损伤,但暴露于相同噪声条件下,其听力损失和毛细胞损伤存在较大个体差异。

应激性高血糖的临床研究进展

应激性高血糖在危重症患者中普遍存在并严重影响其预后。应激性高血糖正逐渐受到广泛重视和研究,其发生机制目前已经基本阐明。应激性高血糖的治疗主要是胰岛素治疗,研究表明胰岛素治疗可降低危重症患者的病死率并改善其预后。但由于胰岛素治疗在危重症患者中应用时间较短,胰岛素治疗的血糖控制目标仍然存在一定争议,目前临床上还没有统一的血糖控制目标。本文在简述应激性高血糖的流行病学特征的基础上,探讨了应激性高血糖的发生机制及其重要临床意义。回顾了胰岛素治疗的研究进展并分析了强化胰岛素治疗的优缺点,最后提出了胰岛素治疗的原则和对于不同患者的血糖控制目标。