高效价腮腺炎病毒抗血清的制备及检定

目的制备高效价腮腺炎病毒抗血清,用于麻腮、麻腮风、麻腮风水痘联合疫苗的病毒滴定及鉴别试验等指标的检定。方法将腮腺炎病毒ME株接种于SPF鸡胚尿囊腔中,优化病毒制备工艺条件,收获高滴度病毒原液,制备免疫抗原;采用皮下多点注射法免疫SPF豚鼠,制备抗血清并对其进行中和效价、中和能力以及特异性干扰试验的检定。结果 ME株腮腺炎病毒以102倍稀释接种鸡胚尿囊腔,培养5 d经-20℃预冷1 h后,收获的尿囊液病毒滴度最高;以其免疫豚鼠所制备的抗血清平均中和效价达1∶3 276,高于鸡抗腮腺炎病毒血清;当豚鼠抗腮腺炎病毒血清稀释度为1∶320时,可完全中和1 000 CCID50/m L的腮腺炎病毒;豚鼠抗腮腺炎病毒血清对Vero细胞、RK-13细胞及2BS细胞的生长,均未见干扰及细胞毒性作用;豚鼠抗腮腺炎病毒血清对异种病毒(麻疹病毒、风疹病毒和水痘病毒)滴度的干扰试验显示,各病毒滴度其试验组与对照组的差值均<0.50 lg CCID50/m L,表明豚鼠抗腮腺炎病毒血清对麻疹病毒、风疹病毒和水痘病毒的滴度均无干扰;豚鼠抗腮腺炎病毒血清及鸡抗腮腺炎病毒血清对麻腮风水痘联合疫苗各病毒滴度均无干扰,且两种抗血清之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用优化后的病毒制备工艺条件及免疫方法,可获得较高效价的抗腮腺炎病毒血清,经检定和验证,均符合含腮腺炎成分疫苗检定抗血清使用要求。

配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗的各病毒原液最适滴度研究

目的研究配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗（measles-mumps-rubella-varicellacombined attenuated live vaccine,MMRV）的各病毒原液最适滴度。方法将麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液分别冻干，检测各冻干单价疫苗的滴度和热稳定性，观察病毒滴度的下降幅度。将4种病毒原液按不同配比配制MMRV，检测配制前后的各病毒滴度，摸索配制MMRV的最佳配比。按确认的最佳配比配制MMRV并冻干，检测冻干MMRV的各病毒滴度和热稳定性，确定配制MMRV的各病毒原液最适滴度。结果各病毒原液冻干后，麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0．6、0．6、0．4 lgCCID50／ml和0．5lgPFU／ml；各冻干单价疫苗37℃放置1周后，麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒的滴度分别下降约0．6、0．5、0．5lg CCID50／ml和0．5lgPFU／ml。在配制MMRV过程中，仅腮腺炎病毒可能在一定程度上受到其他病毒的干扰。按确认的最佳配比配制的MMRV冻干后，麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0．5、0．6、0．5lgCCID50／ml和0．6lgPFU／ml；冻干MMRV于37℃放置1周后，麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0．6、0．6、0．5lgCCIDsc，／ml和0．5lgPFU／ml。结论在按确认的最佳配比配制MMRV时，麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液的滴度需分别≥6．0、≥6．5、≥6．0lgCCID50／ml和≥5．3lgPFU／ml。

麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度测定方法研究

目的建立并验证麻疹、腮腺炎、风疹和水痘（measles,mumps，rubellaandvaricella，MMRV）联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法。方法首先通过比较温度，确定中和条件，再根据抗麻疹、腮腺炎、风疹病毒血清对相应病毒的完全中和能力，确定每种抗血清的使用浓度。观察抗血清对2BS细胞生长的影响和对水痘病毒的干扰作用。采用t检验对结果进行比较。结果与37℃1h相比，4℃1h的中和条件能准确反映MMRV疫苗中水痘病毒的滴度水平（t=6．7082，P〈0．01）。3种抗血清（麻疹1：80、腮腺炎1：40、风疹1：40）混合后对2BS细胞生长无影响，对不同滴度水痘病毒无干扰（高滴度t=0．4472，P〉0．05；中滴度t=O．9045，P〉O．05；低滴度t=0．3536，P〉0．05）。使用建立的方法测定MMRV疫苗中水痘病毒滴度，实测值与理论值之间的差异无统计学意义（t=1．7533，P〉0．05）。结论建立了MMRV联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法。

麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗的研制

目的 建立麻疹、腮腺炎、风疹和水痘（measles,mumps,rubella and varicella,MMRV）联合减毒活疫苗的生产工艺和检定方法.方法 采用麻疹病毒沪-191株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRDⅡ株、水痘-带状疱疹病毒北京84-7株,在原代鸡胚细胞或人胚肺二倍体细胞2BS株中制备高滴度疫苗病毒原液.观察4种原液按不同比例稀释配制后病毒的滴度变化和相互干扰现象,确定MMRV疫苗中4种原液的配制比例,并筛选适宜保护剂,建立最佳冻干工艺.同时,建立MMRV联合减毒活疫苗的检定方法.采用t检验对结果进行比较.结果 选择最佳配制比例、保护剂和冻干工艺制备出连续多批MMRV疫苗,按国家药典要求检定全部合格.其中连续3批疫苗经国家检定机构检定合格：麻疹病毒基础滴度和37℃放置7d后的滴度分别≥3.9和≥3.5 lg半数细胞培养感染量（50％ cell culture infective dose,CCID50）/ml,腮腺炎病毒≥5.0和≥4.7 lgCCID50/ml,风疹病毒≥5.0和≥4.8 lgCCID50/ml,水痘病毒≥4.5和≥4.4 lg噬斑形成单位/ml.用建立的方法检测MMRV疫苗,结果4种病毒滴度实测值与理论值之间的差异无统计学意义（t值为0.149～1.838,P值均＞0.05）.结论 建立了稳定、可行的MMRV疫苗生产工艺和检定方法.