血液样本蛋白质组分析方法的比较研究

比较和优化血液样本蛋白质组学样品制备和质谱分析技术,为深度研究和挖掘血液样本蛋白质组学信息创造条件。采用Q-Exactive Plus质谱仪,对比分析血浆、血清和去除高丰度蛋白血清预处理方法制备的大鼠血样蛋白质组构成;比较血清样本的常规酶切、45℃孵育、热辅助酶切、二次热辅助酶切、尿素辅助酶切和变温酶切的效率;比较数据依赖性采集(data-dependent acquisition,DDA)、数据非依赖性采集(data independent acquisition,DIA)和平行反应监测(parallel reaction monitoring,PRM)质谱数据采集的定性定量特征;采用优化的方法进行大鼠血液样本蛋白质组分析。血清样本去除高丰度蛋白后蛋白鉴定数更高、定量重复性更好;热辅助酶切和变温酶切血清样品的蛋白和肽段鉴定数以及质谱谱图匹配率相对较高,蛋白酶切效率和定性定量重复性较好;DDA操作简便,DIA重复性高,PRM定量精确;血清样本去除高丰度蛋白,采用热辅助结合变温酶切和DDA数据采集模式,3次重复试验分别鉴定到490、490、504个蛋白,鉴定总蛋白数590个,共有蛋白占比69.8%。优化的方法操作简单,蛋白鉴定率较高,重复性好,适用于血液样本的蛋白质组学分析。

慢性心力衰竭气虚血瘀证及复方人参补气颗粒干预机制的蛋白质组学研究

复方人参补气颗粒广泛用于治疗慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)气虚血瘀证,但其作用机制不明确。该研究基于定量蛋白质组学技术研究CHF气虚血瘀证发病及复方人参补气颗粒的干预机制,进一步挖掘其生物学基础。将SD大鼠分为空白对照组、正常给药组、模型组、模型给药组和阳性药对照组,采用左前降支冠状动脉结扎复合慢性睡眠剥夺诱导CHF气虚血瘀证大鼠模型,正常给药组和模型给药组给予复方人参补气颗粒,阳性药对照组给予缬沙坦。6周后采集血清,采用非靶向定量蛋白质组学数据依赖性采集(data dependent acquisition, DDA)技术,比较各组间蛋白表达差异,通过靶向定量蛋白质组学非数据依赖性采集(data independent acquisition, DIA)技术对差异表达蛋白(differentially expressed proteins, DEPs)进行验证。证候指标显示,与空白对照组相比,模型组大鼠体质量、抓力值、脉搏幅度均降低,舌面RGB值升高,病理形态学显示心肌组织发生炎细胞浸润、细胞变性坏死、组织纤维化等,经复方人参补气颗粒干预后多项指标发生回调。蛋白质组学结果显示,与空白对照组相比,模型组和正常给药组分别发现144、111个DEPs;与模型组相比,模型给药组和阳性药对照组分别发现107、194个DEPs;与正常给药组相比,模型给药组发现119个DEPs。经过DIA验证,6个蛋白在各组中的定量与DDA保持一致。证候指标和心肌组织病理形态学显示建立CHF气虚血瘀证模型,模型组的蛋白表达谱发生了明显的改变,并发现复方人参补气颗粒可逆转免疫蛋白等的差异表达来调控CHF气虚血瘀证,为CHF气虚血瘀证的发病机制和复方人参补气颗粒的干预机制研究提供线索。