PCR技术在动物疾病检验中的应用概况

聚合酶链反应(PCR)由美国Cetus公司人类遗传研究室的KaryMullis于1985年发明,首次应用于人类基因遗传变异的研究.随着Taq酶的普遍应用及自动化扩增仪的发展,逐渐成为分子生物技术实验室中的首选方法之一,并在动物疫病诊断和检验中得到广泛的应用.

肉品卫生的实验室快速检测技术与判定

随着我国商品经济的发展和广大人民物质生活水平的提高,广大消费者对肉品卫生质量的要求也越来越高,肉品卫生已成为人们普遍关注的热点。上至党和国家领导人,下至普通平民百姓,从街头巷议到全国人大及政协会议,肉品卫生、‘餐桌污染”等话题是大家共同关注的焦点。

北京市某肉联厂屠宰及检疫情况调查

北京市某肉联厂作为北京市屠宰行业的龙头企业，一直承担着屠宰和卫生检疫的重要任务，在病猪的检出、病害肉的无害化处理、控制畜禽疫病的扩散、让人民吃上“放心肉”等方面发挥了重要作用。本文对该厂１９８７年～１９９８年１２年间的屠宰及检疫情况进行了调查统计和分...

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立

将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记的PCR产物,最后进行免疫显色得出结果。试验主要对RT-PCR ELISA的各种反应条件进行了优化,确定了1mg/L的链亲和素、50μg/L生物素标记的探针、1∶3000抗地高辛的过氧化物酶、37℃杂交2h等为最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测高100倍以上,克服了组织样品中CSFV含量少而难以检测的困难,为猪瘟的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。

气相色谱-质谱法测定动物性食品及生物材料中的克伦特罗残留

为监测食品中的克伦特罗残留 ,采用气质联机法测定动物性食品及生物材料中的克伦特罗残留。试样用高氯酸提取 ,经超声加热后 ,用异丙醇 +乙酸乙酯 (40 + 6 0 )萃取 ,萃取液以弱阳离子交换柱分离富集 ,用乙醇 +浓氨水 (98+ 2 )溶液洗脱并浓缩 ,经N ,O -双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生 ,选择离子监测方式进行气相色谱质谱测定。以美托洛尔 (metoprolol)为内标 ,内标法定量。用猪肝和鸡肉为本底做了不同水平的回收实验 ,回收率在 4 9 6 %～ 82 4 %之间和 5 1 6 %～88 4 %之间 ,相对标准偏差 (RSD)在 13 8%～ 17 6 %之间。方法的定量限 (LOQ)为 0 5 μg kg。通过实验室协同性实验对动物肝脏、肌肉、尿液 ,人体尿液和血液进行测定 ,结果良好。本方法灵敏度高、特异性强 ,测定结果准确可靠 ,可用于动物性食品及生物材料中克伦特罗残留的确证检测。

重组家蝇抗菌肽Des-HF在酵母中的表达及对金黄色葡萄球菌的抗菌活性

参考家蝇防御素抗菌肽基因序列(AY260152)设计4条引物,用降落PCR方法获得家蝇防御素抗菌肽成熟肽基因。将基因克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC-Des-HF,转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,相对分子质量约5 000的重组抗菌肽Des-HF获得表达。抗菌试验结果表明,该表达产物对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性。以小鼠为试验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,试验结果表明,240μg重组Des-HF可分别保护小鼠免受10倍最小致死浓度的金黄色葡萄球菌(ATCC26003)和CowanⅠ的攻击。

柔嫩艾美耳球虫甘肃株钙调域蛋白激酶基因的克隆与表达

应用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)技术,从柔嫩艾美耳球虫甘肃株(E.tenellaGS,EtGS)孢子化卵囊的子孢子中提取总RNA扩增得到鸡球虫子孢子表面抗原钙调域蛋白激酶(CDPK)基因。将EtGSCDPK基因与原核表达载体pGEX6P1连接,构建了pGEXCDPK原核表达质粒,并获得高效表达和纯化的CDPK融合蛋白,表达率达35.4%。序列分析表明:EtGSCDPK与文献报道的EtCDPK比较,共有5个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为99.6%;有5个氨基酸发生变异,氨基酸同源性为98%。

NKT细胞研究进展

NKT细胞属于新发现的一类淋巴细胞 ,此类淋巴细胞不同于 NK细胞和 T细胞。新近在 NKT细胞发育、细胞表型、抗原识别及其在免疫调节中的作用等方面取得了很大进展。研究发现 ,NKT细胞表型为 Vα1 4 +。 CD1 1 c+CD1 1 b+DC或 CD1 1 c+CD1 1 b- DC可能参与了NKT细胞的发育。 NKT细胞识别自身抗原 ,具有 CD1限制性。NKT细胞通过调节 Th1和 Th2细胞发育参与免疫调节。NKT细胞的研究结果无论对免疫学基础理论还是多种免疫性疾病的临床治疗都有着重要的意义。

仙台病毒的结构和感染动物的诊断

仙台病毒是引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,它是具有包膜、线性、非片段的负链RNA病毒,可通过血清学方法和分子生物学技术进行检测。