骨肉瘤干细胞差异表达microRNA对其干性特性的影响

目的 探讨骨肉瘤干细胞差异表达microRNA(miRNA)及其对骨肉瘤干细胞的干性特性(自我更新、侵袭、凋亡)的影响。方法 采用无血清悬浮培养法和流式分选术分离鉴定骨肉瘤干细胞;分别采用成球实验、体外侵袭鉴定骨肉瘤干细胞的干性特性;高通量测序检测骨肉瘤干细胞中差异表达miRNA;采用定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测相关差异表达miRNA的情况,验证miRNA结果;相关miRNA抑制剂干扰后,分别进行成球实验和侵袭实验检测miRNA对骨肉瘤干细胞自我更新、侵袭能力和细胞凋亡的影响。结果 成功分离Saos-2的CD133^(+)和CD133^(+)细胞,具有较强的自我更新能力和侵袭能力。与CD133^(+)细胞相比,CD133^(+)细胞的高表达miRNAs共有15个;低表达miRNAs共有2个。采用qPCR技术验证高通量测序差异表达miRNA相关结果,CD133^(+)亚群中miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091表达上调,miR-3143、miR-3150a-5p表达下调。抑制相关高表达miRNA(miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091)表达后,CD133^(+)细胞的自我更新能力和侵袭均下降,细胞凋亡上升。结论 骨肉瘤干细胞中具有多种差异表达miRNA,其对骨肉瘤干细胞的干性特性具有调控作用。