体外光化学疗法抑制器官移植免疫排斥反应的作用机制

体外光化学疗法(ECP)是以分离外周血单个核细胞(PBMC)技术为基础,通过加入光敏剂和紫外线处理,再回输入患者体内的一种免疫治疗方法。ECP首先应用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤,并取得成功。后来又被先后应用于治疗移植物抗宿主病(GVHD)、多种自身免疫性疾病和器官移植排斥反应。ECP利用凋亡细胞被受者的未成熟树突状细胞(imDC)吞噬后,可以抑制树突状细胞(DC)成熟的原理,进而诱导负向免疫调节。ECP作为一种新的细胞免疫疗法,在不增加移植受者感染发生率的基础上可明显减轻免疫抑制剂的不良反应,其使用安全性高且应用范围广泛,在临床应用中有广阔的前景。本文就ECP的原理、ECP在器官移植排斥反应中的应用及ECP的分子机制作一综述。

体外光化学疗法对皮肤移植小鼠产生调节性T细胞的影响

目的探讨输注体外光化学法处理的脾淋巴细胞对皮肤移植受体小鼠产生调节性T细胞(Treg)及移植物存活时间的影响。方法以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体,建立小鼠皮肤移植模型。分离C57BL/6和BALB/c小鼠脾淋巴细胞(CSP、BSP),制备经8-甲氧基补骨脂素联合长波紫外线(PUVA)处理的小鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP)。根据受者静脉输注的成分将实验动物随机分为5组(每组12只):PUVA-BSP组、PUVA-CSP组、BSP组、CSP组及磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,每组受体分别于术前7 d、手术当日和术后7 d按组别从尾静脉注入PUVA-BSP、PUVA-CSP、BSP、CSP或PBS。观察受体移植物的存活时间,检测受体外周血中CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg表达情况。结果皮肤移植术后,PUVA-BSP组和PUVA-CSP组的受体小鼠外周细胞CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg的比例明显高于输注BSP组、CSP组和PBS对照组;PUVA-CSP组高于PUVA-BSP,BSP组和CSP组低于PBS对照组。PUVA-BSP组和PUVA-CSP组的受者小鼠移植皮片存活时间明显长于BSP组、CSP组和PBS对照组(均为P<0.05)。结论输注足够数量的PUVA-SP可诱导受体体内产生较多的CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg,可以显著延长移植物的存活时间。

肾移植术后16年未经诱导形成免疫耐受1例

肾移植是终末期肾病的有效治疗手段。但术后长期应用免疫抑制剂可能引起严重的不良反应、机会性感染或肿瘤。因此,肾移植术后最理想的状态是形成免疫耐受,以减少甚至停止应用免疫抑制剂。但肾移植术后患者未经诱导而形成免疫耐受的病例极其少见,现报道1例肾移植术后16年形成免疫耐受患者的资料,供临床参考。患者于1995年7月18日接受同种异体肾移植术。2011年8~9月因输尿管恶性肿瘤分别行左、右肾输尿管全长切除术+部分膀胱切除术。患者于2011年10月自行停用所有免疫抑制剂,随访至投稿日,移植肾功能良好。

人类白细胞抗原-G阳性的脐带间充质干细胞体外诱导调节性T细胞的实验研究

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-G阳性的脐带间充质干细胞在体外诱导调节性T细胞(Treg)产生的效果。方法从新生儿脐带中分离脐带间充质干细胞,采用脂质体转染的方式将PEGFP-N1-HLA-G质粒转染到脐带间充质干细胞中,设为PEGFP-N1-HLA-G组;转染空载体PEGFP-N1质粒的脐带间充质干细胞设为PEGFP-N1组;相同条件下,未加入空载体的脐带间充质干细胞设为空白对照组。采用流式细胞仪检测脐带间充质干细胞标志物;采用蛋白质免疫印迹法鉴定各组细胞HLA-G蛋白的表达;各组细胞与健康人外周血中CD4+T细胞混合培养24 h和48 h后,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的比例。结果脐带间充质干细胞CD45、CD34和HLA-DR呈阴性表达,CD29、CD44和CD105呈阳性表达;PEGFP-N1-HLA-G组可以表达HLA-G蛋白,与空白对照组和PEGFP-N1组比较差异均有统计学意义(均为P<0.01)。PEGFP-N1-HLA-G组细胞在与CD4+T细胞混合培养24 h后,CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的(15.3±1.9)%,在培养48 h后,CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的(14.3±2.1)%,与空白对照组和PEGFP-N1组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 HLA-G基因修饰后脐带间充质干细胞能够有效地在体外诱导CD4+CD25+Foxp3+Treg的产生。

肾移植免疫抑制剂研究进展

肾移植是终末期肾病的有效替代治疗方法,新型免疫抑制剂的应用极大提高了肾移植受者的存活率。新型免疫抑制剂的广泛应用促进了免疫抑制方案的改善和优化,术后急性排斥反应发生率不断降低和移植物短期存活率不断提高验证了免疫抑制剂发展的巨大成功。然而,其伴随的不良反应也逐渐显现。如何正确、高效、合理地应用免疫抑制剂是临床医师面临的新挑战。现从以T淋巴细胞为靶点的免疫抑制剂、以B淋巴细胞为靶点的免疫抑制剂、以补体为靶点的免疫抑制剂、以细胞因子为靶点的免疫抑制剂、以混合多克隆抗体为靶点的免疫抑制剂以及以多种细胞为靶点的免疫抑制剂的种类及机制等做一综述,从而为免疫抑制剂的选择应用提供理论基础。

肺移植免疫学相关基础与临床研究进展

器官移植受者的生存质量与免疫状态密切相关。与其他实体器官移植相比,肺移植受者的长期预后较差,其涉及的免疫学机制更为复杂,既有共性又有特性。因此,深入了解同种异体肺移植免疫应答过程中的免疫学机制对于改善肺移植受者的长期生存尤为重要。本文从肺脏免疫细胞组成的独特性、肺移植术后排斥反应特点、肺移植病原体感染的早期预警和鉴别诊断以及肺移植相关并发症等方面进行探讨,总结同种异体肺移植涉及免疫学相关的临床诊断和基础研究进展,旨在阐述肺移植的免疫学特点,为临床提高肺移植受者的长期生存率以及移植物失功的防治水平等提供理论依据。

急性肾损伤实验室诊断的研究进展

急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是指由外科手术、循环血量低灌注、药毒性、烧伤外伤等原因引起的肾脏功能迅速衰退,导致氨代谢产物体液堆积,电解质紊乱、酸碱平衡紊乱并引起全身各种并发症的急重临床综合征[1]。AKI的发生机制涉及多个方面,其中缺血、炎症、溶血、氧化应激、胆固醇栓塞和内源性或外源性毒素等多种病理状态均与其密切相关。近年来,AKI在临床的发病率逐年增高,且病死率高、预后差,严重威胁着人类健康,已经成为突出的社会公共卫生问题,我国也深受AKI治疗与预后的困扰。因此预测和诊断AKI成为学者们研究和关注的热点。本文就目前临床应用的几种AKI实验室诊断标志物的研究现状和应用前景进行综述。

固有免疫细胞在肺移植中的研究进展

肺移植是许多终末期肺病患者的唯一选择治疗手段,但是其成功率远低于其他实体器官。肺移植早期缺血/再灌注引发机体先天性免疫反应,导致原发性移植物失功(primary graft dysfunction,PGD)是重要的影响因素之一,且可能导致晚期的慢性同种异体肺移植物功能障碍(chronic lung allograft dysfunction,CLAD)[1]。另外,由于肺脏直接与外界环境相通,所以发生感染的风险较高,且环境中许多病原菌可激活机体的免疫系统,导致排斥反应的发生[2]。虽然外科手术技术和术后管理水平的进步及新型免疫抑制剂的不断应用.

基于免疫学展开多学科研究生培养模式的探索与实践

解放军总医院第八医学中心呼吸与危重症医学部研究所适临改革调整学科转型之际,依托北京市器官移植与免疫调节重点实验平台,构建以免疫学为核心的多学科研究生联合培养模式,从个体化研究生培养背景、教学模式、能力培养等方面进行分析,探索多个临床学科研究生共同培养的实践模式,以期培养具有系统和整体论的医学思维人才,更好地展开临床工作。

流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值

目的探讨流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值。方法根据术后影像学和实验室检查结果,将51例首次肾移植受体分为细菌组33例、真菌组9例、BK病毒组9例;另选择肾移植术后稳定的受体28例作为稳定组。采用流式细胞术分析各组受体外周血淋巴细胞亚群比例和绝对计数。比较各组肾移植受体的肾功能、外周血淋巴细胞亚群的比例及绝对计数;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析淋巴细胞亚群比例和绝对计数在肾移植术后感染性疾病中的诊断价值。结果与稳定组相比,细菌组、真菌组和BK病毒组血清肌酐(Scr)水平和血尿素氮(BUN)水平均有不同程度升高,差异均有统计学意义(P=0.035、0.007、0.024;0.037、0.006、0.032)。与稳定组比较,细菌组和真菌组CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例均下降(P=0.036、0.015);真菌组CD4+/CD8+T细胞比例明显下降(P=0.004)。与细菌组相比,真菌组和BK病毒组的CD3+CD8+T细胞比例均升高(P=0.013、0.008),CD3+CD4+T细胞比例均降低(P=0.003、0.010),CD4+/CD8+T细胞比例均明显下降(P=0.003、0.005)。与稳定组比较,细菌组、真菌组、BK病毒组CD3+T细胞数量、CD3+CD8+T细胞数量、CD16+CD56+NK细胞数量均明显降低(P=0.025、0.002、0.003;0.015、0.005、0.006;0.001、0.001、0.031);真菌组和BK病毒组CD3+CD4+T细胞数量降低(P=0.001、0.003);BK病毒组CD19+B细胞数量明显降低(P=0.019)。与细菌组比较,真菌组CD3+CD4+T细胞数量明显降低(P=0.023)。ROC曲线分析显示,CD3+CD4+T细胞和CD16+CD56+NK细胞数量诊断真菌感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8492和0.8889;CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD19+B细胞数量诊断BK病毒感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8472、0.8452和0.8115。结论采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群可以评估患者机体免疫功能状态,绝对计数能够直观地判断免疫程度,两者结合对于肾移植受者感染性疾病的诊断和鉴别诊断具有指导意义。

肾移植受者血清同型半胱氨酸水平的变化

目的观察肾移植受者移植前后血清同型半胱氨酸(Hcy)水平的变化,评估其与移植物功能之间的关系。方法横断面回顾性研究选择2013年1月至2014年6月间在解放军第309医院全军器官移植研究所接受首次同种异体肾移植手术且肾功能恢复稳定33例受者为移植组,经临床检查确诊为慢性肾衰竭(CRF)的患者65例为CRF组,30名健康体检人员作为对照组。比较各组血清Hcy、血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平。连续监测移植组在肾移植术前及术后3、7、14、21 d的血清Hcy和Scr水平,比较肾移植前后血清Hcy水平的变化与肾功能之间的关系。结果 CRF组患者的血清Hcy水平为(25±10)μmol/L,明显高于对照组的(9±4)μmol/L和移植组稳定期的(15±9)μmol/L,移植组的血清Hcy水平亦明显高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。CRF组、移植组和对照组的Scr水平分别为(708±302)μmol/L、(98±23)μmol/L、(72±18)μmol/L,CRF组的Scr水平明显高于移植组和对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。CRF组、移植组和对照组的BUN水平分别为(18.1±5.9)mmol/L、(10.9±5.3)mmol/L、(4.9±1.3)mmol/L,CRF组的BUN水平明显高于移植组和对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.001),移植组BUN水平亦高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。移植组患者肾移植术后随着肾功能好转,Scr和血清Hcy水平逐渐降低,其中术后14 d血清Hcy水平降至最低(15±5)μmol/L,与术前的(25±10)μmol/L相比,差异有统计学意义(P<0.05)。术后14 d内,移植组肾移植受者的血清Hcy水平与Scr水平呈正相关(r=0.761,P<0.05)。结论肾移植受者的血清Hcy水平与移植肾功能相关,联合检测血清Hcy与肾功能指标对预防高Hcy血症和早期评估移植物功能有一定指导意义。

体外光分离置换疗法对皮肤移植小鼠IL-12p70和Th1/Th2类细胞因子产生的影响

目的探讨输注体外光分离置换疗法处理的脾淋巴细胞对皮肤移植小鼠白细胞介素(IL)-12p70和辅助性T细胞(Th)1/Th2类细胞因子产生的影响。方法以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体,建立小鼠皮肤移植模型。分离C57BL/6和BALB/c小鼠脾淋巴细胞(CSP、BSP),制备经8-甲氧基补骨脂素联合长波紫外线(PUVA)处理的小鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP)。根据受体静脉输注的成分将实验动物随机分为5组(每组12只):PUVA-BSP组、PUVA-CSP组、BSP组、CSP组及磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,每组受体分别于术前7 d、手术当日和术后7 d按组别从尾静脉注入PUVA-BSP、PUVA-CSP、BSP、CSP或PBS。观察经PUVA处理脾淋巴细胞凋亡情况,检测受体小鼠外周血中IL-12p70和Th1/Th2类细胞因子产生的情况。结果移植术后,PUVA-BSP组和PUVA-CSP组小鼠外周血的IL-12p70表达水平明显低于BSP组、CSP组和PBS对照组(均为P<0.01);PUVA-BSP组和PUVA-CSP组的Th1类细胞因子IL-2、干扰素(IFN)-γ表达水平均明显低于BSP组、CSP组和PBS对照组(均为P<0.01);PUVA-BSP组和PUVA-CSP组的Th2类细胞因子IL-10表达水平明显高于BSP组、CSP组和PBS对照组(均为P<0.01)。结论输注足够数量的PUVA-SP可诱导受体体内低表达IL-12p70,并且诱导产生Th2免疫偏移。

趋化性细胞因子在肾移植排斥反应中的临床应用价值

目的探讨趋化性细胞因子在肾移植排斥反应中的临床应用价值。方法选取2011年1-12月在解放军第309医院全军器官移植研究所进行同种异体肾移植术的患者21例[分为急性排斥反应(AR)组(n=11)、功能稳定组(F组,n=10)]和健康志愿者10例(C组,n=10)。分别于术前1d,术后第1、7、14、28天以及排斥反应发生时应用流式微球捕获技术(CBA)检测患者血浆中单核趋化蛋白-1(MCP-1)、调节激活正常T细胞表达分泌因子(RNATES)、中性粒细胞激活蛋白-1(NAP-1/IL-8)、IFN-γ诱生单核因子(MIG)和IFN-γ诱导蛋白-10(IP-10)的表达情况;并采用Spearman相关分析趋化细胞因子与肌酐水平的相关性。结果与健康志愿组相比,肾移植患者术前MCP-1、MIG、IP-10水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);IL-8和RANTES无明显差异(P>0.05)。AR发生时,AR组患者的MCP-1、IL-8、MIG、IP-10与F组比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而两组RANTES差异无统计学意义(P>0.05)。趋化性细胞因子与肌酐的相关性分析发现,IL-8和MIG与肌酐均呈正相关[r分别为0.4896、0.6245(P<0.01)],MCP-1、RNATES、IP-10与肌酐无显著相关性(P>0.05)。结论趋化性细胞因子在肾移植排斥反应中发挥重要作用,肾移植术后应监测其变化情况。

肾移植术后淋巴细胞亚群的变化与移植肾功能恢复状况分析

目的分析肾移植术后淋巴细胞亚群的变化与移植肾功能恢复状况的关系。方法收集2013年9月—2014年3月收治的40例术后2周未发生感染或排斥反应的肾移植受者,术后7 d血肌酐值仍>400μmol/L的病例为延迟恢复组(n=12),其余为功能稳定组(n=28)。分别采术前、术后3、7、14 d静脉血,监测T、B淋巴细胞亚群百分比及绝对计数。结果 T、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK)百分比及绝对计数在功能稳定组与延迟恢复组中有不完全相同的变化趋势;CD4+/CD8+比值变化也不明显。与功能稳定组相比,延迟恢复组术后3 d外周血CD3+百分比明显下降,NK百分比明显升高(P<0.05);术后7 d CD3+和CD4+百分比及绝对计数均明显下降(P<0.05);术后14 d CD4+和CD4+/CD8+比值明显下降(P<0.05)。结论监测肾移植受者T、B淋巴细胞亚群百分比及绝对计数有助于指导免疫抑制药物的合理应用。

流式微球分析技术联合检测Cys C、NGAL方法的建立及其在肾移植术后CMV感染患者中的应用

目的建立流式微球分析技术联合检测胱抑素(Cys)C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的方法,并初步研究两者在肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染患者血清中的含量变化。方法实验方法的建立包括检测微球包被的效果和稳定性,优化Cys C和NGAL的检测含量范围,确定生物素化抗体浓度,确定PE-链霉亲和素浓度,绘制标准曲线图确定相关系数。采用该法检测对照组(10名健康人)、CMV阴性组(10例肾移植术后CMV-pp65阴性患者)和CMV阳性组(20例肾移植术后CMV-pp65阳性患者)的血清Cys C和NGAL含量。结果成功建立流式微球分析技术联合检测Cys C和NGAL的方法。对照组、CMV阴性组和CMV阳性组的血清NGAL含量分别为8 759(1 465)pg/ml、10 472(856)pg/ml、12 817(4 533)pg/ml,依次升高且差异有统计学意义(P<0.001)。3组间Cys C比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验建立流式微球分析技术联合检测Cys C和NGAL标准曲线的方法相关性和重复性良好,并初步验证NGAL含量在肾移植术后CMV感染中明显升高,提示肾移植术后CMV活动性感染可能对肾小管造成急性损伤。

肾移植受者红细胞CD35、CD58、CD59表达变化

目的观察肾移植受者移植前后外周血红细胞膜表面CD35、CD58、CD59的表达情况。方法选择2013年1月—2015年1月肾移植受者25例及健康体检者25例,采用流式细胞术对肾移植术前、术后3、7、14 d外周血红细胞膜表面免疫分子CD35、CD58、CD59进行检测,观察红细胞免疫功能的变化情况。结果肾移植受者术前CD35、CD59表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.01),CD35术后14 d明显低于术前,CD58术后3 d高于术前和术后14 d(P<0.05)。结论肾移植受者术前红细胞免疫功能低下,术后有所改善。红细胞免疫参与肾移植受者机体免疫功能的调节。

巨细胞病毒感染肾移植受者红细胞表面分子CD35、CD58、CD59表达的变化

目的探讨巨细胞病毒(CMV)感染肾移植受者红细胞膜表面分子CD35、CD58、CD59表达的变化规律及其意义。方法选择同种异体肾移植术的受者82例,根据外周血CMV-pp65抗原检测定性结果将其分为CMV阴性组(21例)和CMV阳性组(61例),再根据CMV-pp65(+)白细胞计数结果将活动性CMV阳性组分为低活动性感染亚组(55例)和高活动性感染亚组(6例);另外选取健康成人志愿者作为健康对照组(30名)。采用流式细胞术检测CMV-pp65抗原和红细胞膜表面分子CD35、CD58、CD59的表达情况。结果与健康对照组比较,CMV阳性组的肾移植受者红细胞表面分子CD35、CD58、CD59表达水平降低,CMV阴性组的CD35和CD59表达水平降低(均为P<0.05);与CMV阴性组比较,CMV阳性组的红细胞表面分子CD58和CD59表达水平明显降低(均为P<0.05)。高活动性感染亚组的红细胞表面分子CD35和CD59表达水平均低于低活动性感染亚组(均为P<0.05)。结论肾移植术后CMV活动性感染的程度越严重,患者红细胞表面免疫分子CD35、CD58、CD59的表达越低,提示红细胞免疫功能紊乱可能参与了CMV活动性感染。

预存DSA强阳性患者二次肾移植诊治经验

预存供体特异性抗体(DSA)阳性是肾移植的禁忌证。预存DSA增加排斥反应发生率,使致敏患者存活率降低,直接影响肾移植结果。本文总结1例预存DSA强阳性患者,在二次肾移植前采用血浆置换、利妥昔单抗输注、持续抗胸腺细胞球蛋白滴注,并大剂量静脉注射免疫球蛋白等联合用药方案,抗HLAⅡ类抗体滴度显著降低。术后动态监测该受者群体反应性抗体(PRA)和DSA水平,早期发现排斥反应,及时采用地塞米松冲击、抗胸腺细胞球蛋白、大剂量静脉注射免疫球蛋白治疗排斥反应,取得良好效果,患者DSA消失。术后随访5个月,移植肾功能良好。

肾移植术后1个月内因毛霉菌感染致移植肾切除1例报告

毛霉菌为条件致病菌,具有嗜血管的特性,极易侵犯血管,易引起血栓和周围组织坏死及移植肾动脉破裂出血,因此,单纯性移植肾毛霉菌感染是一种严重的疾病,预后极差,病死率高达80%。肾移植术后肾动脉毛霉菌感染比较少见,我院2017年有1例肾移植术后1个月内因毛霉菌感染致移植肾切除的病例,现报道如下。

易误诊为胃恶性肿瘤的亲属肾移植术后人巨细胞病毒性胃炎1例

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)属疱疹病毒科,直径约为200 nm,是最大的动物病毒之一。HCMV 感染非常普遍,多呈亚临床非显性感染或潜伏感染,当机体免疫力降低时,潜伏状态的HCMV 活化而致病[1]。HCMV 可以感染胃肠黏膜引起巨细胞病毒性胃炎,临床病理特征为胃黏膜变性、坏死和淋巴细胞浸润,肾移植术后HCMV胃炎少见。本文报道2018 年1 例亲属肾移植术后HCMV 胃炎的病例。