干血斑用于HIV-1新发感染检测(限制性抗原亲和力法)研究

目的探讨干血斑样本用于1型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染检测(限制性抗原亲和力法)的可行性与最佳检测条件。方法用制备的三套系列稀释干血斑-血浆配对样本和来自临床的71对人群干血斑-血浆配对样本,使用国产HIV-1新发感染酶免检测试剂盒(限制性抗原亲和力法),同时对血浆样本与干血斑样本进行检测并分析等效性。其中滤纸片干血斑(DBS)样本(6mm斑)洗脱分别在500μL、600μL、800μL和1 000μL样本稀释液4℃过夜洗脱。结果三套系列稀释干血斑-血浆配对样本检测结果显示,500μL、600μL、800μL和1 000μL样本稀释液洗脱后的DBS样本与血浆样本的Pearson相关系数分别依次为0.955(R^2=0.912)、0.944(R^2=0.892)、0.948(R^2=0.899)、0.933(R^2=0.870);来自临床的71对人群干血斑-血浆配对样本检测结果显示,500μL、600μL、800μL和1 000μL样本稀释液洗脱后的DBS样本与血浆样本的Pearson相关系数分别依次为0.968(R^2=0.936)、0.965(R^2=0.932)、0.959(R^2=0.919)、0.879(R^2=0.773);其中以500μL样本稀释液4℃过夜洗脱后的DBS检测结果与血浆等效性最佳,71对临床配对样本的检测一致性为98.59%(70/71)。结论 DBS样本可用于HIV-1新发感染检测(限制性抗原亲和力法),且与血浆样本具有良好的等效性。

不同粒径的免疫磁珠对食源性致病菌捕获效率的影响

粒径是影响免疫磁珠捕获效率的关键因素。选取微米级(1μm)和亚微米级(300 nm)超顺磁珠,偶联沙门氏菌多克隆抗体制备免疫磁珠。通过流式细胞仪、分光光度计分别测定抗体偶联量和磁回收率。结果表明,与微米级免疫磁珠相比,亚微米级免疫磁珠抗体偶联量较高,在缓冲液中磁回收率较高,因此捕获率较高(300 nm:55%,1μm:41%);在牛奶中磁回收率较低,导致捕获率明显降低(300 nm:15%,1μm:26%)。因此,需根据待测样本的体积与黏度来确定免疫磁珠的粒径。

尿液HIV-1抗体快速检测(胶体金法)实验室能力验证质控品的制备与应用

目的研究制备尿液HIV-1抗体快速检测(金标法)实验室能力验证质控品,并应用于艾滋病检测实验室的能力验证工作,以评估实验室尿液HIV-1抗体快速检测(金标法)的能力,为进一步推广尿液HIV-1抗体自我检测提供依据。方法对10份HIV-1抗体阳性和5份HIV-1抗体阴性尿液样本用酶联免疫法和胶体金免疫层析试验筛选后,选择3份阳性和2份阴性样本,制备能力验证质控品5个批号;每批号质控品随机抽取10管(0.5mL/管)进行均一性评价;质控品在37℃下放置1~7天,进行稳定性评价;将能力验证质控品应用于20家实验室的能力验证中,收集分析检测结果,评价各实验室的尿液HIV-1抗体快速检测(金标法)的能力。结果质控品(编号194106-194110)均一性评价结果表明,酶联免疫法(OD值)与胶体金法(GOD值)CV%值分别为26.9%、4.3%、4.4%、19.8%、5.0%和0、11.2%、9.0%、0、9.5%,单因素方差分析检测值均无差异(P>0.05);质控品(编号194106-194110)37℃放置1~7天后的稳定性评价结果表明,酶联免疫法和胶体金法的定性检测结果均与预期结果一致,酶联免疫法(OD值)与胶体金法(GOD值)CV%值分别为40.2%、3.4%、2.3%、26.3%、2.2%和0、16.7%、9.3%、0、5.8%,OD值与GOD值的t检验分析中,3支样本无差异(P> 0.05),2支样本有差异(P <0.05);参加能力验证的20家实验室对5支HIV-1抗体质控品的快速检测(金标法)结果均与预期结果一致,得分均为100分。结论尿液HIV-1抗体(金标法)能力验证质控品具有良好的均一性和稳定性,且参加本次尿液HIV-1抗体快速检测(金标法)能力验证的实验室均具备准确检测能力。

美国CDC推荐HIV核酸检测策略与核酸定量检测替代策略

美国疾病控制和预防中心(CDC)2014年发布艾滋病病毒(HIV)核酸检测策略以来,已经在实验室应用,该策略简化了检测流程,使检测结果更加准确。但同时也存在诸多不便于临床推广普及的影响因素。随着核酸检测技术的应用与普及,在2019年艾滋病诊断大会上,美国CDC专家发表了HIV-1核酸定量检测替代策略的研究报告,临床验证了核酸定量检测替代策略的准确性、可行性与快速便利性,提高了HIV核酸定量检测结果在临床工作中的使用价值。

基层实验室HCV抗体检测能力验证评估

目的为了了解县级以上检测实验室HCV抗体检测能力,研发制备HCV抗体能力验证质控品,开展基层实验室HCV抗体检测能力的室间比对与评估工作。方法研发制备均一稳定的HCV抗体检测质控样品,组织全国县级以上75家HCV抗体检测实验室开展能力验证,各实验室按照要求在规定时间内完成质控品检测并按时回报结果,以全部回馈结果确定质控品预期结果,以检测水平评价标准差系数(SDI)评估各实验室检测能力。结果质控品190906~190910均一性与稳定性检验均符合要求;完成能力验证结果回报的70家实验室中,30家(42.86%)得分100分,39家(55.71%)得分80分,1家(1.43%)得分20分;使用间接ELISA法和化学发光法检测质控品的结果在不同实验室间差异较大[变异系数(CV)分别为33.92%、117.65%、125.77%、125.00%、32.09%和67.56%、129.15%、35.53%、133.72%、73.80%];间接ELISA法、化学发光法和胶体金法对弱阳性190908的检测准确性偏低(分别为47.50%、50.00%、27.27%);SDI值显示部分实验室可能存在系统误差和随机误差。结论本研究制备的HCV抗体能力验证质控品能够在能力验证工作中稳定有效地发挥作用,参加此次能力验证的实验室普遍具有HCV抗体检测能力,部分实验室可能存在系统误差和随机误差问题。

HIV-2感染的实验室检测与诊断

本文综述了国内外2型艾滋病病毒(HIV-2)感染的实验室检测与诊断,简介了美国HIV-2核酸检测临床应用,表明HIV-2核酸检测不仅能有效排除临床上很多不确定结果,还能有效解决抗原抗体检测中的假反应性和漏检问题。HIV-2核酸定量检测不仅是检测与治疗监测的重要手段,同时能够为临床提供HIV-2感染诊断依据。国内目前尚缺乏针对HIV-2检测的试剂与诊断策略,急需加强对HIV-2诊断试剂与策略的关注与研究。

HIV抗体快速检测替代策略的初步探究

目的通过比较分析4种不同艾滋病病毒(HIV)抗体快速检测试剂组合下的检测结果,探讨云南省快速检测替代策略替代常规策略进行HIV感染诊断的可行性。方法将医疗机构经一种快速检测试剂初筛为HIV阳性的135份样本送至建水县疾病预防控制中心,平行使用常规检测策略与快速替代检测策略,进行初筛复检和确证检测。结果135份快速初筛阳性样本,经两种快速检测试剂进行的复检阳性率95.56%(129/135),酶联免疫吸附试验(ELISA)复检的阳性率为93.33%(126/135);两种快速检测试剂的初筛策略与一种ELISA试剂所检出的阳性一致率为99.21%(125/126);以蛋白印迹试验(WB)确证检测结果为"金标准",4种快速检测的替代确证策略的阳性确证率为95.35%(123/129),与WB的一致率100%;如果使用3种金标试剂阳性,报告确证阳性出现2例假阳性;如果使用2种金标试剂阳性,报告确证阳性时出现2例假阳性;如果使用1种金标试剂阳性,报告确证阳性时出现1例假阳性。结论使用两种金标替代ELISA进行初筛复检不会造成反应性样本漏检,使用四种快速检测替代策略可以替代WB进行确证,建议使用快速检测试剂于常规基层艾滋病检测。

干血斑用于HIV抗体确证（重组免疫印迹法）方法建立与初步应用

目的研究建立干血斑(DBS)样本用于艾滋病病毒(HIV)抗体确证(重组免疫印迹法)的方法,为确证试验提供更加广泛的适用样本。方法制备系列稀释20~210 DBS与配对血浆样本,利用实验室优化的DBS洗脱条件(300μL含0.5‰Tween 20的PBS室温洗脱6小时),研究来自两个公司的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体检测试剂盒(免疫印迹法/重组免疫印迹法)的检测限,选择其中等效性更好且价格低廉的国产(重组免疫印迹法)试剂进一步研究。结果通过310份(110份HIV抗体阳性和200份HIV抗体阴性)已知DBS与血浆配对样本和1 304份临床DBS样本进行该方法验证与应用,两种不同试剂对于血浆样本的检测限均为20~27,但对于来自相同个体的对应DBS样本检测限不同(分别为20~25和20~26);应用与血浆样本等效的国产(重组免疫印迹法)试剂进行方法验证结果表明,阳性样本一致率为100.0%(110/110),阴性样本一致率为98.5%(197/200),总一致率99.0%(307/310),Kappa值0.98(P<0.001);敏感性100.0%(110/110),特异性98.5%(197/200);应用国产(重组免疫印迹法)试剂对1 304份临床DBS样本中HIV抗体初筛阳性132份DBS样本同时进行实验室DBS确证与临床随访确证,实验室DBS确证结果与临床随访确证结果完全一致,确证阳性130份,排除初筛假阳性样本2份。结论 DBS样本用于HIV抗体确证(重组免疫印迹法)与血浆样本等效,具有良好敏感性与特异性,可有效排除初筛假阳性样本。