2008-2018年北京市伤寒、副伤寒沙门菌病原学特征

目的了解北京市伤寒、副伤寒沙门菌流行特征、耐药及分子分型特点,为伤寒、副伤寒防制工作提供依据。方法通过对2008-2018年北京市肠道门诊监测系统收集到的65株伤寒、副伤寒沙门菌,采用最小抑菌浓度(minimal inhibition concentration,MIC)法进行16种抗生素药敏试验;采用脉冲场凝胶电泳PFGE方法进行分子分型研究。结果 65株菌包含4种血清型:伤寒沙门菌24株,占36.9%,甲型副伤寒沙门菌7株,占10.8%,乙型副伤寒沙门菌20株,占30.8%,丙型副伤寒沙门菌14株,占21.5%。随着年代的推移,会出现血清型的交替变迁,2013年以后,以伤寒和乙型副伤寒沙门菌为主。高发年龄组为0～10岁组和31～40岁年龄组。65株菌对阿莫西林-克拉维酸、强力霉素、阿奇霉素和亚胺培南4种抗生素全部敏感,对其他12种抗生素有不同程度的耐药。对磺胺异噁唑、萘啶酸、链霉素和氨苄西林等经典抗生素的耐药性有上升趋势,对头孢菌素和三代氟喹诺酮类环丙沙星不同血清型间耐药性存在差异,多重耐药率为10.8%(7/65)。58株伤寒、副伤寒沙门菌分成34种PFGE型别,带型分散。除2018年一起输入性伤寒暴发识别出9株菌为同一带型,其余每种带型菌株数1～3株不等,相似度为32.2%～100.0%。结论 2008-2018年,北京市伤寒、副伤寒沙门菌维持在较低水平,血清型正逐步转变成以伤寒和乙型副伤寒为主。不同血清型间抗生素耐药程度不同,临床应合理用药。PFGE型别多样,未出现优势克隆群。

2012-2019年北京市昌平区散发腹泻病例四种病毒监测结果分析

目的对北京市昌平区2012-2019年散发腹泻病例4种病毒监测结果进行分析,了解其流行特征。方法采集此期间辖区2家哨点医院肠道门诊散发腹泻病例便样本960份,提取核酸后用实时荧光RT-PCR方法检测A组轮状病毒、GⅠ/GⅡ组诺如病毒、星状病毒和肠道腺病毒,用描述性流行病学方法从时间、性别和年龄分布分析其流行特征。结果960份便样本的病毒总检出率为32.29%(310/960),GⅠ/GⅡ组诺如病毒、A组轮状病毒、星状病毒和肠道腺病毒检出率分别为18.96%(182/960)、10.63%(102/960)、1.98%(19/960)和0.73%(7/960);在不同年份、性别和年龄组中,均为GⅠ/GⅡ组诺如病毒检出率最高,A组轮状病毒次之;GⅠ/GⅡ组诺如病毒春季检出率最高(28.33%,68/240),冬季次之(22.50%,54/240);A组轮状病毒冬季检出率最高(25.42%,61/240),春季次之(9.58%,23/240)。结论GⅠ/GⅡ组诺如病毒和A组轮状病毒是北京市昌平区冬春季散发腹泻病例的主要病原。

北京市房山区腹泻患者空肠弯曲菌感染及菌株分型耐药特征

目的了解北京市房山区感染性腹泻患者空肠弯曲菌感染及分离株的病原学特征。方法2017年5—12月,收集2家医院腹泻患者的粪便标本,进行弯曲菌的分离、培养及鉴定。对分离的空肠弯曲菌进行11种抗生素的敏感性检测,并对菌株进行多位点序列分型。结果共检测标本286份,分离到弯曲菌31份,检出率为10.80%;经质谱鉴定28株为空肠弯曲菌,3株为结肠弯曲菌。空肠弯曲菌可分为23种不同的ST型,其中4株为ST22,2株为ST760,2株为ST6500,其他20株分别属于20种ST型别;研究发现3个新的ST型,分别为ST9253、ST9254和ST9255。28株空肠弯曲菌对萘啶酸、环丙沙星、四环素的耐药率达100.00%,对氟苯尼考的耐药率为39.29%,对红霉素、阿奇霉素、泰利霉素、克林霉素敏感。结论北京市房山区腹泻患者空肠弯曲菌感染率较高,对喹诺酮、氟喹诺酮类、四环素类药物耐药严重,对大环内酯类、酮内酯类和林可酰胺类药物敏感;菌株的ST型呈多样性分布。

北京市不同来源非伤寒沙门菌的分子分型和耐药性分析

目的分析北京市不同来源非伤寒沙门菌的分子流行病学特征及耐药情况。方法对腹泻患者粪便和食品中分离的53株非伤寒沙门菌进行血清分型,并对所有菌株进行PFGE分型和抗生素敏感性检测。结果腹泻患者粪便来源和食品来源沙门菌的血清型分布不同,食品中分离到6株鼠伤寒沙门菌单项变种1,4,[5],12:i:-。53株非伤寒沙门菌通过PFGE分型分为31个不同的带型,每个带型包含1~10株菌,同一血清型菌株PFGE带型聚集成簇。抗生素敏感性结果显示,79.25%的菌株对至少一种抗生素耐药,其中多重耐药菌株14株。耐药率高的前三种抗生素分别是:萘啶酸60.38%、四环素35.85%、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑18.88%。两种来源的印第安纳沙门菌的耐药情况严重。结论北京市不同来源非伤寒沙门菌的耐药情况比严重,多重耐药菌株的PFGE带型多样,加强耐药监测和分子分型网络化、合理使用抗生素意义重大。

北京市市售花蛤诺如病毒和轮状病毒检出情况及基因特征分析

目的了解北京市市售花蛤诺如病毒和轮状病毒检出情况,分析其基因特征。方法2014年11月-2015年10月,采集北京市三个水产品销售市场新鲜花蛤各24件。用两种方法对花蛤鳃和肠内容物进行病毒浓缩,提取核酸后用实时荧光RT-PCR法检测诺如病毒GI/GII组和A组轮状病毒核酸。用半巢式RT-PCR方法,扩增诺如病毒阳性样本衣壳蛋白VP1区基因,对PCR阳性产物进行测序,用诺如病毒分型工具进行基因亚型鉴定,用MEGA软件最大似然法构建进化树。结果72件花蛤中未检出A组轮状病毒,诺如病毒检出率为34.7%(25/72),GII组、GI组和GI/GII组混合检出率分别为27.8%(20/72)、4.2%(3/72)和2.8%(2/72)。11月诺如病毒检出率最高,为100.0%(6/6);三个水产销售市场诺如病毒检出率分别为25.0%(6/24)、50.0%(12/24)和29.2%(7/24)。10件测序成功,其中6株为GII.17,GII.6、GII.2、GI.3a和GI.4各1株。这些毒株与腹泻患者和外环境参考毒株相似性为97.9%~100.0%。结论北京市市售花蛤存在诺如病毒污染,而且与腹泻患者和外环境参考毒株高度同源,应加强花蛤及销售人群和环境的诺如病毒监测。

北京市房山区腹泻病例分离副溶血性弧菌的分子流行病学特征

目的了解2016年北京市房山区腹泻病例副溶血性弧菌分离株的血清型、毒力基因、耐药性及PFGE分子分型特征。方法依照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副容血性弧菌检验》进行副溶血性弧菌生化鉴定,使用玻片血清凝集法进行血清分型,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)测定毒力基因,微量肉汤稀释法进行药敏试验,脉冲场凝胶电泳进行分子分型及聚类分析。结果在检出的20株副溶血性弧菌中,O3:K6血清型占60%。所有菌株均携带tlh、tdh基因,trh基因的携带率为10%,tdh^+trh^-为优势基因型。抗生素敏感性结果显示,90%的菌株对至少1种抗生素耐药,其中多重耐药菌株5株。耐药率高的前3种抗生素分别是:头孢唑林(85%)、庆大霉素(75%)、氨苄西林(30%)。PFGE分型共得到10种带型,5株菌的PFGE带型一致,为优势带型。副溶血弧菌的血清型和PFGE带型之间具有高度的一致性。结论本地区副溶血性弧菌以tdh^+,trh^-的O3:K6型别为主,对头孢唑林、庆大霉素、氨苄西林等早期用药耐药率高,应慎重使用。

2015-2019年北京市西城区人源性单核细胞增生李斯特菌的分子特征分析

目的研究北京市西城区人源性单核细胞增生李斯特菌(Lm)的血清学分型和分子特征。方法对2015—2019年北京市西城区40株Lm临床分离株进行多重PCR血清学分型、脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)和多位点序列分型(MLST)。结果40例病例中,14例患者为妊娠感染相关病例,其中7例为新生儿感染,均治愈,无死亡病例。非妊娠感染相关病例中3例死亡。40株Lm共分为3种血清群,其中1/2a,3a为优势血清型。40株菌株分为26个型别,GX6A16.BJ0003型别为优势带型(9株)。GX6A16.BJ0003型别自2015—2019年连续5年均有检出,并存在2例死亡病例。GX6A16.BJ0014型别的2例病例均为妊娠感染相关病例。40株菌株被分为13个序列类型(STs),最常见的为ST8、ST87、ST5。结论2015—2019年北京市西城区人源性Lm以1/2a,3a为主要血清群,GX6A16.BJ0003型别和ST8为北京市西城区人源性Lm主要PFGE型别和MLST型别,存在同一克隆的菌株持续流行情况,应提高对高危型别的监测。

北京市2010-2020年多重耐药肯塔基沙门菌流行特征分析

目的了解北京市肯塔基沙门菌临床分离株的流行情况、耐药水平及分子特征。方法对2010-2020年分离的22株肯塔基沙门菌采用微量肉汤稀释法进行抗生素药物敏感性检测;全基因组测序进行多位点序列分型、基因组岛和耐药基因识别。采用PFGE分析菌株的分子流行病学特征。结果22株菌对8~22种抗生素耐药,尤其是对环丙沙星、阿奇霉素和头孢菌素类等都表现为超高水平的多重耐药。21株菌超广谱β-内酰胺酶表型阳性。全基因组序列分析显示,22株肯塔基沙门菌均为ST198,携带SGI1-K基因组岛。所有菌株均有耐药基因tetA、sul1、qacE,喹诺酮耐药决定区gyrA基因存在2个突变位点(S83F、D87 N)、parC基因存在3个突变位点(T57S、S80I、T255S)。β-内酰胺类相关耐药基因(blaCTX-M-55、blaCTX-M-14b、blaTEM-141、blaTEM-206、blaTEM-209、blaTEM-214、blaTEM-1B)、氨基糖甙类耐药相关基因[aac(3)-Id、aac(3)-IId、aac(6')-Iaa、aadA7、aadA17、aph(3')-Ia、aph(3'')-Ib、aph(6)-Id、rmtB]以及floR、dfrA14、mphA和qnrS1等基因在不同年代菌株间存在明显差异。PFGE图谱分析显示,22株菌株之间相似性>85%,与全球广泛传播的ST198-X1流行株高度同源,在传播扩散过程中,耐药谱和PFGE图谱都发生了变化,分为两大聚类簇。结论北京市流行的肯塔基沙门菌为多重耐药的ST198-X1-SGI-1K国际流行株,自2016年以来保持低水平流行,引起散发感染病例和聚集性腹泻事件。对氟喹诺酮类、ESBL和阿奇霉素等耐药严重,应加强多重耐药肯塔基沙门菌的监测。

2013-2019年北京市昌平区霍乱弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的了解2013—2019年北京市昌平区霍乱弧菌表型及其分子特征。方法采用常规培养方法对2013—2019年北京市昌平区疑似霍乱标本进行检测。对分离鉴定的O1群小川型霍乱弧菌,用NotⅠ和SfiⅠ两种内切酶进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)、用荧光PCR和普通PCR进行9种毒力基因检测,用微量肉汤稀释法进行21种药物敏感试验。结果 2013—2019年北京市昌平区共分离到29株O1群小川型霍乱弧菌,其中散发病例中分离到10株,一起聚集性疫情中分离到19株。29株菌经NotⅠ和SfiⅠ双酶切后可分成3种PFGE谱型(CP-01~03),3种PFGE谱型间的相似系数为78.50%~100.00%,以CP-02为主(27/29,93.10%)。所有菌株均不携带ctxAB基因,携带toxR和hlyA基因,其他毒力基因ompU、tcpA、tcpI、rtxC、zot和ace的携带率分别为89.66%、82.76%、82.76%、44.83%、6.90%和6.90%。29株菌药敏结果,除头孢唑啉(0.00%)和链霉素(3.45%)敏感率极低外,对其他19种抗菌素为敏感(82.76%~100.00%)。结论 2013—2019年北京市昌平区的O1群小川型霍乱弧菌为非产毒株,以PFGE谱型CP-02为主,毒力基因toxR和hlyA携带率高,对多数抗生素敏感,提示在防控工作中应关注此类菌株并制定相应的方针政策,减少疫情的发生。

产超广谱β-内酰胺酶霍乱弧菌耐药表型和基因型初步研究

目的初步研究北京市朝阳区产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases, ESBLs)霍乱弧菌耐药表型和基因型。方法复苏2012—2019年北京市朝阳区保存的37株霍乱弧菌,应用肉汤微量稀释法进行产ESBLs菌株的鉴定及21种药物敏感试验,应用荧光PCR检测菌株的10种耐药基因:SHV、TEM-1/TEM-2、TCX-M1、TCX-M2、TCX-M8、TCX-M9、TCX-M25、OXA1、OXA2和OXA10。结果试验菌株中,产ESBLs菌株检出率为8.11%(3/37),检出的3株菌株的10种耐药基因均为阴性;ESBLs耐药基因携带率为16.22%(6/37),这6株菌株均为非产ESBLs霍乱弧菌,其中TEM1/TEM2携带率为16.22%(6/37),OXA2携带率为10.81%(4/37)。37株霍乱弧菌对21种抗生素耐药率为2.70%~94.59%,对多西环素不耐药;多重耐药率为35.13%(13/37),最多耐11种药物。结论霍乱弧菌中产ESBLs菌株与ESBLs耐药基因菌株一致性差;北京地区霍乱弧菌耐药严重且多重耐药趋势明显;应加强霍乱弧菌耐药机制、耐药表型与基因型关系的研究。

一起霍乱疫情分离株的耐药性和分子流行病学分析

目的对2017年北京市房山区一起霍乱疫情的O1群霍乱弧菌的分子流行病学特征和耐药性进行分析。方法采集患者和有关人员及外环境(包括食物)样本109件,用实时荧光PCR检测碱性蛋白胨水增菌液中O1/O139群霍乱弧菌特异性基因;同时按常规法分离培养鉴定;对鉴定的阳性菌株用实时荧光PCR检测霍乱弧菌CTX基因,用微量肉汤稀释法进行20种药物敏感试验,用Not I和SfiⅠ限制性内切酶进行脉冲场凝胶电泳实验和聚类分析。结果109件样本增菌液O1群霍乱弧菌特异性基因阳性率19.27%(21/109,患者、密切接触者中家属和就餐地厨师肛拭子各1件阳性,就餐地后厨外环境样本18件阳性);常规培养鉴定O1群小川型霍乱弧菌阳性率5.50%(6/109,患者和就餐地厨师肛拭子各检出1株,就餐地后厨外环境涂抹检出4株);6株O1群小川型霍乱弧菌,霍乱CTX基因均阴性,对20种抗生素中12种100%敏感,对头孢唑林100%耐药,PFGE分子分型条带具有一致性。结论该起霍乱疫情的病原为O1群小川型非产毒株;PFGE分子分型溯源表明疫情与厨师有关;应关注霍乱疫情菌株的耐药监测。

反相高效液相色谱法测定豆制品中碱性橙2

目的着重考察豆制品中碱性橙2的样品前处理方法,建立有效的高效液相色谱检测方法。方法样品经水—乙酸—乙酸铵—乙腈超声萃取,-20°C冷冻后离心去除提取液中少量油脂等杂质,酸化后以混合型阳离子交换固相萃取柱净化;0.4%乙酸—20 mmol/L乙酸铵水溶液—乙腈为流动相,梯度洗脱,C_(18)色谱柱分离,外标法定量。结果方法检出限为0.13 mg/kg,定量限为0.4 mg/kg;腐竹中添加水平分别为0.5、5.0和10.0 mg/kg的平均回收率为77.8%~83.6%,相对标准偏差为3.0%~3.5%(n=6)。结论该前处理方法能够有效提取、净化豆制品中碱性橙2,适用于液相色谱检测。

胶束电动毛细管色谱法测定牛奶中脱氢乙酸

目的建立快速、准确测定牛奶中脱氢乙酸含量的胶束电动毛细管色谱法。方法以内径50μm、总长度为30.2 cm(有效长度:20 cm)未涂层熔融石英毛细管为分离柱,以15 mmol/L硼砂+60 mmol/L H_3BO_3+100 mmol/L十二烷基硫酸钠为分离缓冲溶液;分离电压:13 k V;进样压力及时间:0.5 psi、4 s;操作温度25℃;检测波长:228 nm。结果脱氢乙酸质量浓度在1.5~200 mg/L内线性良好,线性相关系数r为0.999 9,检出限和定量限分别为0.5 mg/L(S/N=3)和1.5 mg/L(S/N=10)。平均回收率在95.2%~98.6%之间,相应相对标准偏差(RSD)在2.6%~3.4%之间。结论该法准确度高、前处理简单、试剂消耗少,非常适合于牛奶中脱氢乙酸的常规检测。

两种微量肉汤稀释法药敏板用于沙门菌药敏检测结果比较

目的比较和评价2种品牌微量肉汤稀释法药敏板用于沙门菌药敏检测的可重复性和一致性。方法选择6株不同血清型的沙门菌,同一检测人员使用两种药敏板测试13种药物的最小抑菌浓度(MIC),分别重复2次,观察两种药敏板实验结果的可重复性和一致性。结果在2种药敏板的可重复性评价中,2种药敏板分别有17.95%和5.12%的实验孔存在差异,均只相差一个梯度值;2种药敏板MIC出现差异的实验孔在定性判断上无差异。在实验结果一致性评价中,2种药敏板中16.67%的实验孔存在差异,有差异结果的实验孔均只相差一个梯度值;在定性判断方面,未出现"敏感"和"耐药"的差异。结论 2种MIC药敏板用于沙门菌药敏检测的可重复性和一致性好,其实验结果可以进行综合分析,但是需要考虑MIC一个梯度的实验误差。

硫柳汞对秀丽隐杆线虫神经行为及生长发育的影响

目的通过研究硫柳汞对秀丽隐杆线虫(简称线虫)幼虫神经行为及生长发育的影响,初步探讨硫柳汞对线虫的神经发育毒性。方法采用L1期线虫,以0~140μmol/L或0~5μmol/L硫柳汞分别暴露48 h,检测其半数致死浓度(LC50),分别考察其对线虫运动行为、感知行为、摄食行为及生长发育(体长、体宽)的影响。结果与溶剂对照组比较,线虫幼虫暴露于硫柳汞48 h后,其运动行为(头部摆动和身体弯曲)、感知行为(趋向和趋避)和摄食行为(咽泵震动)均有显著改变(P<0.05)。此外,硫柳汞显著抑制线虫的生长发育,并且这种抑制作用具有剂量-效应关系。结论硫柳汞对线虫幼虫神经行为及生长发育产生不良影响,其毒性机制有待深入研究。