肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段在大肠杆菌中的表达及应用研究

目的：克隆、表达和鉴定肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,MP）P1蛋白羧基端基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段并测序的基础上,将基因序列克隆到表达载体pET32a（＋）上,构建了重组表达质粒pET32a（＋）/P1（3520~4563bp）,转化大肠杆rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用ELISA和Western blotting方法检测其抗原性。重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,蛋白质纯度达95%以上。ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。并成功获得两株高效价单克隆抗体。结论：本研究成功克隆和表达了肺炎支原体P1蛋白羧基端基因序列,制备了抗肺炎支原体P1蛋白单克隆抗体,为肺炎支原体诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。