骨关节结核相关的基础研究

骨关节结核是一古老疾病，在5000年前古埃及木乃伊中就发现了它所造成的骨破坏。Hippocrates最早记录了此病的一些临床特征。公元1779年，Percival Pott对脊柱结核引起的脊柱畸形和截瘫进行了阐述。因而在西方，此病又称为Pott’s病。

结核分枝杆菌复苏促进因子基因克隆及其蛋白质的表达

目的通过对结核分枝杆菌复苏促进因子基因的克隆、融合蛋白的表达、纯化，以获得高活性的结核分枝杆菌复苏促进因子蛋白质。为临床标本结核分枝杆菌复苏培养及功能研究提供物质基础。方法通过PCR扩增结核分枝杆菌H37Rv的5个复苏因子基因，经内切酶酶切、胶回收，将片段亚克隆到T载体中，转化至DH5α。以PCR鉴定的阳性菌落转至LB中培养，菌液进行质粒提取、酶切、胶回收，回收片段再克隆至表达载体pET30a中，转化至DH5α中。PCR阳性菌落转至LB中培养，测序确定插入片段的正确性，菌液提取质粒，并再转化至BL21（DE3）中。经PCR鉴定阳性的菌液通过适当的IPTG浓度诱导，适宜温度和时间下，诱导蛋白表达，经SDS—PAGE电泳分析，Western blot检测目的蛋白，在最佳条件下大量表达目的蛋白，并纯化。结果获得有活性的高纯度复苏促进因子蛋白，纯度〉90％。结论复苏促进因子蛋白的成功表达为下一步摸索临床标本结核分枝杆菌复苏培养最佳方案及复苏基因的功能研究打下良好基础。

结核分枝杆菌rv3873基因原核表达载体的构建、表达和纯化

目的构建结核分枝杆菌（M.tb）rv3873基因原核表达载体并进行表达。方法用PCR扩增MTB rv3873基因，并克隆入pGEM-T Easy质粒。测序正确后，再亚克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：rv3873重组体。结果以重组体分别转化DH5α和BL21（DE3）菌后，经0．4mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导，pET30a（＋）：rv3873表达出分子量为47000左右的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示，IPTG诱导4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中，表达量占全菌蛋白质的50％，Western blot证实其具有良好的抗原性。经Ni—NTA柱纯化，获得纯度为90％的重组蛋白。结论成功地构建原核表达载体pET30a（＋）：rv3873，并获得PPE68重组蛋白，为辅助诊断结核菌的感染奠定了基础。

结核分枝杆菌的复苏因子

1998年Mukamolova在细菌因子一文中首先提出了复苏因子（Resuscitation promoting factor Rpf）的新概念，并证实复苏因子是由有活性的微球菌分泌的一种蛋白质．它在皮摩尔级浓度就能有效地促进休眠的非生长同源菌的复苏和生长。Mukamolova同时也证实微球菌复苏因子类似基因广泛地存在于富含G＋C的革兰氏阳性菌中（如链霉菌：分枝杆菌；棒状杆菌），并找到了结核分枝杆菌复苏因子家族（RpfA、RpfB、RpfC、RpfD、RpfE）。

结核分枝杆菌复苏因子基因克隆及其蛋白质的表达

结核病仍然是严重危害人类健康的重大公共卫生问题。如何提高临床标本结核杆菌培养阳性率、缩短培养时间是提高结核病诊疗和控制水平的关键。

根据静态压力-容量曲线指导开胸手术病人保护性单肺通气的效果

目的评价根据静态压力．容积曲线（P-V曲线）设置开胸手术病人的呼气末正压（PEEP）行单肺通气（OLV）的效果。方法择期行肺叶切除术病人120例，性别不限，年龄20。60岁，体重40～80kg，ASA分级Ⅱ或Ⅲ级。双肺通气（TLV）3min后，描绘准静态P-V曲线，确定P-V曲线低位拐点对应的压力（Pu，）。采用随机数字表法，将病人随机分为5组（n=24）：对照组（C组）和不同保护性OLV方式组（P1-4组）。C组PEEP为0，VT为10ml／kg；P1组PEEP为0，VT为6ml／ks；P2组PEEP为PLIP-2cmH20，VT为6ml／kg；P3组PEEP为PLIP，VT为6ml／kg；P4组PEEP为PLIP＋2cmH20，VT为6ml／kg。分别于TLV和OLV呼吸力学指标平稳后，记录气道峰压、气道平台压、气道阻力和肺顺应性。分别于麻醉诱导前、TLV20min和OLV20min时，取动脉血样，进行血气分析，计算肺内分流率。分别于OLV开始时和OLV结束时采集动脉血样，采用酶联免疫吸附法测定血浆IL-6和TNF-α的浓度。结果与C组比较，P4组TLV和OLV呼吸力学指标平稳后气道峰压和气道平台压升高，气道阻力降低，OLV结束时血浆IL-6浓度降低，P1组、P2组、B组和P4组PaCO2升高（P〈0．05或0．01）；P1组、P1组和B组各呼吸力学指标、血气分析指标和血浆IL-6和，TNF-α的浓度比较差异无统计学意义（P〉0．05）。与P1组、P2组和P1组比较，P4组气道峰压和气道平台压升高，OLV结束时血浆IL-6浓度降低（P〈0．05或0．01）。结论V，为6ml／kg，根据PuP＋2emH2O确定PEEP，有助于改善开胸手术病人的氧合，抑制炎性反应，是保护性OLV的有效手段。