肺癌血清肿瘤标志物研究进展

肺癌是当前全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。大部分患者确诊时已为晚期，失去了最佳治疗时机。近年来，虽然不断有新型的化疗药物被发现，但是肺癌5年存活率没有明显的提高。不能早期发现和诊断肺癌是导致肺癌疗效差及高死亡率的主要原因，故提高肺癌预后的关键是早期诊断。

应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原

背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多,为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物,本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物淘选和SEREX筛选。PCR扩增阳性克隆插入片段后测序,结果与GeneBank数据库中已知基因进行同源性比较,分析其生物学特性。结果用非小细胞肺癌血清对噬菌体展示文库进行筛选,共获得31个阳性克隆,测序后发现其代表15个基因,其中12个与已知cDNA序列同源,与肺癌或其它肿瘤的发生、发展关系密切;另外3个未发现有同源基因,可能是新基因。结论应用SEREX技术发现15个肺癌相关抗原和3个肺癌相关抗原的候选基因,为进一步的深入研究打下良好的基础。

c-Met/ErbB3/PI3K信号通路在肺癌EGFR-TKI获得性耐药中的研究进展

0引言目前小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）包括吉非替尼（Gefitinib）和厄洛替尼（Erlotinb）,作为二线药物在非小细胞肺癌的临床治疗中取得了明显疗效。但在临床使用中,EG-FR-TKI敏感病人在用药6~8月后部分出现了疾病进展即获得性耐药,获得性耐药的发生使小分子酪氨酸激酶抑制剂的应用受到了极大的限制[1]。

PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌的关系

背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科手术中获取40例非小细胞肺癌组织及30例癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测癌及癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平。结果非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(40±59)%、(61±23)%、(77±32)%、(43±21)%,癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(16±40)%、(23±16)%、(10±12)%、(20±17)%,非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。联合应用4个基因表达作为NSCLC诊断标志,诊断的敏感性达到87.5%,特异性为90%。结论非小细胞肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径相关基因表达水平明显上调,说明该通路在非小细胞肺癌中被激活。联合检测VEGF、PI3K、Akt、mTOR的表达水平改变可能作为NSCLC的诊断标志。

mTOR和PTEN在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

背景与目的mTOR是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶。它通过活化下游的相关的效应蛋白发挥作用。在信号转导通路中PTEN基因可通过对该信号途径的负调控而抑制mTOR的活化。本研究通过分析mTOR信号转导途径中mTOR和PTEN基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达和临床意义。方法外科手术中获取65例NSCLC组织及30例癌旁组织,RT-PCR技术检测NSCLC组织及癌旁组织中mTOR和PTEN基因的表达水平。结果mTOR在NSCLC组织中表达量(0.23±0.16)显著高于癌旁组(0.12±0.09)(P<0.01),PTEN在NSCLC组织中表达量(0.19±0.28)显著低于癌旁组(0.53±0.28)(P<0.01)。mTOR和PTEN与病人的性别、年龄、病理类型、淋巴结转移情况无关,与病人的肿瘤大小有关。结论mTOR在NSCLC中被激活,PTEN在NSCLC组织表达缺失或减少,mTOR通路的激活和PTEN表达缺失在NSCLC发生发展中起到一定的作用。

非小细胞肺癌患者中Survivin抗体的临床意义及诊断价值

背景与目的在世界范围内,恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因,且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入,肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。本研究旨在探讨Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中可能的临床应用价值。方法采用RT-PCR方法获得Survivin cDNA,构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin,亲和层析方法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,建立基于Survivin融合蛋白的间接ELISA方法,对89例健康志愿者、215例非小细胞肺癌患者以及20例肺部良性疾病患者的血清样本进行检测。结果重组Survivin融合蛋白在BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,间接ELISA方法检测Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中的阳性率为19.5%,特异性为88.9%,Survivin自身抗体与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、远处转移间存在相关性(P<0.05),Survivin自身抗体与CEA在非小细胞肺癌患者中联合检测的阳性率明显高于CEA与NSE、SCC、CYFRA、ProGRP联合检测的阳性率,这大大提高了非小细胞肺癌检测的敏感性。结论本研究成功构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin,并建立检测Sur-vivin自身抗体的间接ELISA方法,Survivin自身抗体与肺癌肿瘤大小、远处转移间的相关性及在非小细胞肺癌患者联合检测中的重要作用,为Survivin自身抗体在肺癌中的临床应用提供了线索和依据。

吸烟肺癌患者尿中烟草特有亚硝胺4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶)-1-丁酮代谢产物的测定

背景与目的国外研究表明不论以何种方式用烟草特有亚硝胺4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶)-1-丁酮[4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone,NNK]处理小鼠均能特异地诱发小鼠肺癌,且多为肺腺癌,NNK是公认的吸烟者患肺癌的一个病因。本研究的目的是通过测定吸烟者尿中NNK的代谢产物4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶)-1-丁醇[4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol,NNAL]及其解毒产物4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶-N-氧化物)-1-丁醇[4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl-N-oxide)-1-butanol,NNAL-Gluc]的含量及NNAL-Gluc/NNAL比值来了解NNK特异的致肺癌性。方法用高压液相色谱仪(HPLC)和气相色谱-双极质谱联用仪(GC-MS/MS)对10例吸烟肺癌患者、8例健康吸烟者和4例健康不吸烟者的24h尿样进行分析。结果不吸烟者的尿中未测到NNAL和NNAL-Gluc,健康吸烟者尿中平均NNAL-Gluc/NNAL比值为4.95,吸烟肺癌患者为0.5。结论建立了在吸烟者尿中测定NNK代谢产物NNAL及NNAL-Gluc的方法。初步研究显示健康吸烟者对NNK的解毒能力明显大于吸烟肺癌患者,为在吸烟人群中筛选肺癌高危人群提供了检测手段。

非小细胞肺癌患者中Survivin抗体的临床意义及诊断价值

背景与目的在世界范围内，恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因，且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入，肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。本研究旨在探讨Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中可能的临床应用价值。方法采用RT-PCR方法获得SurvivincDNA，构建原核表达载体pET30a（＋）／Survivin，亲和层析方法纯化蛋白，SDS—PAGE电冰及Westernblot鉴定，建立基于Survivin融合蛋白的间接ELISA方法，对89例健康志愿者、215例非小细胞肺癌患者以及20例肺部良性疾病患者的血清样本进行检测。结果重组Survivin融合蛋白在BL21（DE3）中以包涵体形式高效表达，间接ELISA方法检测Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中的阳性率为19．5％，特异性为88．9％，Survivin自身抗体与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、远处转移间存在相关性（P〈0．05），Survivin自身抗体与CEA在非小细胞肺癌患者中联合检测的阳性率明显高于CEA与NSE、SCC、CYFRA、ProGRP联合检测的阳性率，这大大提高了非小细胞肺癌检测的敏感性。结论本研究成功构建原核表达载体pET30a（＋）／Survivin，并建立检测Survivin自身抗体的间接ELISA方法，Survivin自身抗体与肺癌肿瘤大小、远处转移间的相关性及在非小细胞肺癌患者联合检测中的重要作用，为Survivin自身抗体在肺癌中的临床应用提供了线索和依据。

5F11-DOX结合物对人肺腺癌细胞体内外抑制作用的研究

目的 研究单克隆抗体-化疗药物结合物5F11-DOX对人肺腺癌A2细胞体内外的抑制作用及其可能的作用机制。方法 戊二醛法制备5F11-DOX结合物；集落形成试验观察结合物对肿瘤细胞的体外杀伤作用；荧光显微镜观察DOX在肿瘤细胞中的分布；免疫组化检测抗体在细胞的结合部位及分布；裸鼠皮下或腹腔内人肺癌A2细胞异种移植瘤，尾静脉给药，比较不同剂量的5F11-DOX结合物与游离DOX对A2细胞异种移植瘤的疗效。结果 浓度为0．04ug/d的5F11-DOX即可在体外杀死全部人肺腺癌A2细胞，5F11-DOX结合物比游离DOX的作用提高了10倍(P<0．05)。荧光镜检发现在DOX浓度为3ug／ml作用3小时，去除药物，继续培养24小时后，5F11-DOX组的DOX荧光比游离DOX组的强。显示结合物组的DOX在细胞内的保留时间比游离DOX组的更长。免疫组化染色检测发现5F11-DOX孵育后5F11定位于细胞膜与胞浆中，而荧光镜检发现．DOX分布于细胞浆及核内。提示5F11-DOX复合物主要通过抗体的靶向性将药物带到靶细胞的膜表面并内化进入细胞，而后结合物在细胞内解离，DOX分布于胞浆及核内，杀伤癌细胞。结合物大分子进入细胞内，从而影响DOX药物从细胞内泵出。裸鼠皮下及腹腔内异种移植瘤治疗试验显示5F11-DOX组裸鼠的移植瘤明显小于对照组和同剂量游离DOX组(P<0．05)；5F11-DOX疗效相当于4-8倍之游离DOX的疗效。瘤体的病理切片HE染色显示，5F11-DOX结合物组癌巢中央和周围均有大片的瘤组织溶解。结论 5F11-DOX结合物对人肺癌A2细胞瘤的杀伤作用显著高于游离的DOX，体外杀伤作用约提高10倍左右，体内对A2细胞异种移植瘤的疗效比游离DOX组提高4-8倍。

抗人肺腺癌单抗5F-11噬菌体抗体库的构建及表达

目的 构建抗人肺癌单抗 5F 11的噬菌体显示文库。方法 利用RT PCR方法从 5F 11杂交瘤细胞扩增抗体轻重链可变区基因 ,用连接子连接成为ScFv基因后克隆至噬菌体载体pCANTAB5E。以肺腺癌细胞系A2 为抗原进行 4轮筛选 ,得到富集的次级噬菌体表达文库。结果 制备了库容为 8× 10 7pfu/ml的噬菌体展示文库。随机抽取未经筛选的克隆进行酶切 ,酶切图谱呈多样性 ,富集后的酶切图谱则显示特异构型的噬菌体得到富集。检测 30个噬菌体克隆上清 ,其中 2 3个与A2 细胞有较强反应。结论 本研究获得了抗人肺腺癌单抗 5F 11的单链抗体 ,为拓展抗体的应用创造了条件。