抗原刺激后外周血单个核细胞γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌感染和结核病诊断中的意义

目的探讨3种结核分枝杆菌抗原刺激后外周血单个核细胞(PBMC)γ干扰素(IFNγ)释放反应对结核性感染和结核病的诊断意义。方法获取活动性结核病患者(结核组,57例)、肺癌患者(肺癌组,29例)和健康人(健康对照组,27名)外周血单个核细胞。分别将结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)、结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6000蛋白(ESAT6)和38000抗原与PBMC共培养5d,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养上清液中IFNγ浓度。比较3种抗原PBMCIFNγ释放水平和PPD皮试(TST)结果。结果(1)健康对照组TST反应与BCG接种史及排菌患者接触密切程度经Logistic回归分析显示均呈正相关(P=0.047和P=0.041);以ESAT6为抗原的PBMCIFNγ释放水平与结核病患者接触密切程度相关(P=0.005),而与BCG接种史无明显相关性。(2)3组间TST结果差异无显著性。(3)以38000抗原刺激后IFNγ释放水平为观察指标,经受试者操作特性(ROC)曲线分析获得最佳域值为1000pg/ml,以此判断38000抗原刺激后IFNγ释放水平诊断结核病敏感性为64.9%,特异性为89.3%,准确性为77.0%,阳性预测值为86.0%,阴性预测值为71.0%。结论ESAT6抗原的IFNγ释放反应对结核分枝杆菌感染的诊断意义优于TST,38000抗原刺激后IFNγ释放反应对结核病的临床诊断有辅助意义。

mRNA定量法用于结核分枝杆菌利福平敏感性分析的研究

目的 评价应用mRNA定量法进行结核分枝杆菌利福平敏感性分析的可行性和应用价值。方法 定量检测结核分枝杆菌85B mRNA,分别以mRNA拷贝数百分比(使用利福平药物后mRNA拷贝数占用药前的百分比)为1％和10％作为耐药临界指标分析53株结核分枝杆菌临床分离株对利福平的敏感性,并与绝对浓度法作比较,其中29株为利福平耐药株、24株为利福平敏感株。结果 53株结核分枝杆菌临床分离株mRNA定量法检测:在利福平浓度为1μg/ml的条件下分别以1％和10％为耐药临界比例时,与绝对浓度法相比准确性分别为70％、81％,敏感性分别为:100％、100％,特异性分别为33％、58％;在利福平浓度为2μg/ml的条件下分别以1％和10％为耐药临界比例时,与绝对浓度法相比准确性分别为85%、93％,敏感性分别为100％、97％,特异性分别为67％、88％,在利福平浓度为4μg/ml的条件下分别以1％和10％为耐药临界比例时在与绝对浓度法相比准确性分别为93%、93％,敏感性分别为93％、93％,特异性分别为92％、92％。结论 mRNA定量法用于结核分枝杆菌药物敏感性分析具有快速、可定量等优点,建议mRNA定量法测定利福平敏感性采用临界药物浓度为2 μg/ml、耐药临界比例为10％。

噬菌体生物扩增法、DNA序列分析及单链构象多态性分析检测结核分枝杆菌耐药性

目的 探讨和评价噬菌体生物扩增技术 (phageamplifiedbiologicallyassay,PhaB)用于检测结核分枝杆菌耐药性的应用价值。方法 本研究共选取了 91株利福平 (RFP)耐药株 (其中 82株为耐多药结核分枝杆菌 )、4 2株RFP敏感株、75株氧氟沙星 (OFLX)耐药株、4 0株OFLX敏感株 ,应用PhaB、DNA序列分析法和聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP) 3种检测方法 ,同时对同一菌株应用该 3种方法进行耐药性检测 ,以资分析与评价PhaB法的临床应用价值。结果 以绝对浓度法药敏试验结果为标准 ,检测RFP的药物敏感性 ,PhaB法的准确性为 93% ,敏感性为 92 % ,特异性为95 % ;DNA序列分析法的准确性为 93% ,敏感性为 90 % ,特异性为 10 0 % ;PCR SSCP法的准确性为90 % ,敏感性为 86 % ,特异性为 10 0 %。检测OFLX(OFLX)的药物敏感性 ,PhaB的准确性为 95 % ,敏感性为 95 % ,特异性为 95 % ;DNA序列分析法的准确性为 80 % ,敏感性为 71% ,特异性为 98% ;而PCR SSCP法的准确性为 75 % ,敏感性为 6 3% ,特异性为 98%。结论 PhaB法是一种操作简便、快速、敏感、与绝对浓度法符合率高的结核分枝杆菌耐药性检测方法 ,在 4 8～ 96h内可获得试验结果 ,具有良好的临床应用前景。