抗结核药物药效学非临床研究技术指南

研发新型抗结核药物极具挑战性,难度大,周期长,非临床研究的数据是开展临床试验的前提。全面充分的结核分枝杆菌体外和在动物体内的药效学评价是临床试验前的重要步骤和关键内容。本技术指南主要适用于治疗由结核分枝杆菌引起的肺结核病药物的研发,旨在为创新抗结核药物的临床前药效学研究提供参考。

应用Alamarblue检测细胞内药物抗结核分枝杆菌活性的研究

目的建立基于Alamarblue检测的结核分枝杆菌感染巨噬细胞模型，应用于氯苯吩嗪衍生物细胞内抗结核活性的测定，为新药筛选提供参数和依据。方法以不同菌量／细胞比例感染巨噬细胞不同时间，阳性药INH、RFP、EMB与感染细胞作用不同时间，CFU计数测定细胞内菌量，考察最适感染复数、感染时间与药物作用时间。以Alamarblue比色法测定一些常用抗结核药对感染细胞内菌量的影响，并与CFU计数测定结果比较，考察比色法的准确性与特异性，并以比色法测定氯苯吩嗪衍生物的细胞内抗结核活性，探讨其在新药筛选中的应用。结果最适感染复数为10：1，感染4h为宜，药物作用时问为3d。比色法与CFU计数测定药物细胞内抗菌活性的结果一致。所测的吩嗪类化合物显示出良好的细胞内抗菌活性。结论建立了Alamarblue比色法巨噬细胞筛选模型，可对细胞内药物抗结核活性作出快速、客观的评价。

抗结核药物贝达喹啉的耐药情况及其耐药机制研究进展

随着耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)和广泛耐药结核病(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)菌株的增多,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药性成为全球亟待解决的问题。贝达喹啉(bedaquiline,Bdq)作为近50年来首个明确用于MDR-TB治疗的新药,其耐药问题受到逐步关注。笔者对Bdq的耐药特征和耐药基因突变等研究进展进行综述,旨在更好指导临床用药,提高患者的治疗成功率,减少耐药的发生。

五种抗结核新药在小鼠体内的药代动力学/药效学初步研究

目的在BALB/c小鼠结核病模型中,研究普托马尼(pretomanid,PA-824)、德拉马尼(delamanid,Dlm)、氯法齐明(clofazimine,Cfz)、贝达喹啉(bedaquiline,Bdq)、PBTZ-169共5种抗结核药物在不同给药剂量下的药代动力学/药效学(pharmacokinetic/pharmacodynamics,PK/PD)。方法 BALB/c小鼠经气溶胶感染结核分枝杆菌标准株H37Rv,5种药物分为高中低3个剂量组灌胃给药。在给药4周和8周时,解剖小鼠,取脾、肺脏进行菌落单位(colony forming unit,CFU)计数以评价药物疗效,同时在4倍测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的含药培养板上,挑取单菌落并测定MIC值。在各给药组给予最后一个剂量3h后,通过眼眶采血,用液相色谱-质谱法测定血浆药物浓度。结果以各药物引起小鼠肺部CFU计数下降且与对照组差异有统计学意义为标准,得到最低有效剂量分别为PA-824 30mg/kg,Dlm 5mg/kg,Cfz 5mg/kg,Bdq 6.25mg/kg,PBTZ-16920mg/kg。自最低有效剂量起,各药物均使得小鼠肺CFU计数下降,其中Bdq与PA-824高剂量组小鼠肺CFU计数分别下降2.99和2.66log10值。5种药物给药8周时,在最低有效剂量下的血药浓度(C3h)分别为PA-824(7.60±1.28)μg/ml,Dlm(0.20±0.05)μg/ml,Cfz(0.26±0.02)μg/ml,Bdq(0.22±0.07)μg/ml,PBTZ-169(74.56±17.80)ng/ml。各药物高剂量时,Cmax/MIC大于特定数值,即PA-824 100mg/kg时,Cmax/MIC>147;Dlm10mg/kg时,Cmax/MIC>100;Cfz 20mg/kg时,Cmax/MIC>2;Bdq 25mg/kg时,Cmax/MIC>13.6;PBTZ-16920mg/kg时,Cmax/MIC>150,不易产生药物耐受性/表型抗性。结论 5种抗结核药物在有效剂量下,血药浓度随药物剂量增加而上升,CFU计数与给药剂量呈负相关,Cmax/MIC是与疗效呈良好相关性的PK/PD参数,可为这些药物的临床使用提供指导。

抗特发性肺纤维化药物吡非尼酮和舒非尼酮在小鼠结核病模型肺损伤中的保护作用研究

目的在小鼠结核病模型中评价抗特发性肺纤维化上市药物吡非尼酮(Pirfenidone,PFD)和临床药物舒非尼酮(SC1011)对肺损伤的保护作用。方法建立C57BL/6小鼠结核病模型。1×10^(7)CFU/ml H37Rv菌悬液通过气溶胶感染75只C57BL/6小鼠,随机数字表法分为未处理组(n=9)、异烟肼H+利福平R+吡嗪酰胺Z(HRZ)治疗组(n=22)、PFD+HRZ治疗组(n=22)和SC1011+HRZ治疗组(n=22)。感染6周后开始给药治疗,分别于给药4、8周取各治疗组7只小鼠进行称重、处死、解剖、观察肺脏和脾脏病变;HE染色、Masson染色,评估肺损伤和肺纤维化程度;ELISA法评估治疗4周各治疗组小鼠血清中IFN-γ/TNF-α含量。碱水解法测定肺组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;同时通过CFU计数,评估各治疗组小鼠肺脾内的载菌量及停药12周后脾、肺组织的复发情况。结果8周PFD+HRZ治疗组、SC1011+HRZ治疗组、HRZ治疗组肺组织HYP含量分别为(630±58)、(635±17)、(840±70)μg/mg(P<0.05);8周肺组织Masson染色蓝染区域面积即阳性面积比例分别为16.65%±1.82%、10.01%±2.16%、21.36%±3.21%(F=27.11,P<0.001);8周HE染色肺损伤评分分别为(5.00±0.50)、(5.00±0.47)、(6.89±0.99)分(F=19.81,P<0.001)。4周ELISA实验结果显示SC1011+HRZ治疗组血清中TNF-α、IFN-γ水平均低于HRZ治疗组(均P<0.05)。PFD+HRZ、SC1011+HRZ治疗组肺损伤程度以及肺纤维化程度均低于HRZ治疗组(均P<0.001)。PFD+HRZ、SC1011+HRZ、HRZ三个治疗组治疗4周小鼠肺组织中活菌数量均低于未处理组[(1.82±0.10)、(1.91±0.05)、(1.79±0.17)比(5.27±0.07)lg(CFU+1)/ml,均P<0.05],并且各治疗组均在给药8周达到小鼠脾脏无菌化。停药12周后,SC1011+HRZ治疗组的肺部感染复发情况低于HRZ治疗组(3/7比5/7,P>0.05);SC1011+HRZ治疗组的脾脏感染复发情况低于HRZ治疗组(1/7比5/7,P>0.05)。PFD+HRZ治疗组的肺部感染的复发情况高于HRZ治疗组(6/7比5/7,P>0.05)。结论在C57BL/6小鼠结核病模型中,PFD/SC1011与HRZ联用可以减轻肺损伤和降低肺结核继发性纤维化。SC1011与HRZ联用时对MTB的近期治疗效果不显著,但在远期治疗上可能降低其复发率,尤其在降低小鼠脾脏的复发率上作用明显。

豚鼠结核病模型在抗结核新药评价中的应用

目的通过气溶胶感染构建豚鼠结核病模型,探讨其在新药评价中的应用。方法豚鼠以气溶胶方式感染结核杆菌,3周后随机分成不治疗组、异烟肼(isoniazid,INH)、莫西沙星(Moxifloxacin,Mfx)、氯法齐明(Clofazimine,Cfz)、JYS-1和JYS-两组进行药物治疗。治疗4周后解剖动物,观察体重、脏器重量指数、肺脏组织病理学检查及脾和肺活菌计数。结果 INH、Mfx组的脾重指数、脾和肺荷菌量显著低于不治疗组(P<0.05),肺部病变明显比空白组轻,而Cfz、JYS-1、JYS-2组各观察指标仅略优于不治疗组(P>0.05)。结论通过气溶胶感染成功制备了豚鼠结核病模型,可对抗结核药物活性作出客观评价。

豚鼠结核病模型在抗结核新药评价中的应用

目的通过气溶胶感染构建豚鼠结核病模型，探讨其在新药评价中的应用。方法豚鼠以气溶胶方式感染结核杆菌，3周后随机分成不治疗组、异烟肼（isoniazid，INH）、莫西沙星（Moxifloxacin，Mfx）、氯法齐明（Clofazimine，cfz）、JYS—1和JYS-2两组进行药物治疗。治疗4周后解剖动物，观察体重、脏器重量指数、肺脏组织病理学检查及脾和肺活菌计数。结果INH、Mfx组的脾重指数、脾和肺荷菌量显著低于不治疗组（P〈0．05），肺部病变明显比空白组轻，而Cfz、JYS-1、JYS-2组各观察指标仅略优于不治疗组（P〉0．05）。结论通过气溶胶感染成功制备了豚鼠结核病模型，可对抗结核药物活性作出客观评价。

254例耐药肺结核患者克拉霉素耐药情况及影响因素分析

目的分析耐药肺结核患者克拉霉素耐药情况及相关危险因素,为其临床应用提供依据。方法收集2017年1月至2018年1月在首都医科大学附属北京胸科医院确诊为耐药肺结核的254例患者的临床资料和药物敏感性试验(简称"药敏试验")结果进行回顾性分析。采用比例法对克拉霉素等16种抗结核药物进行药敏试验检测。采用logistic回归法分析克拉霉素耐药的临床相关危险因素。结果 (1)254例耐药肺结核患者中,17例耐多药/广泛耐药患者对克拉霉素耐药,耐药率为6.69%(17/254),低于其余15种抗结核药物[12.60%(32/254)~95.67%(243/254)]。(2)对克拉霉素耐药的耐多药/广泛耐药患者,对莫西沙星(47.06%,8/17)、氯法齐明(70.59%,12/17)、乙胺丁醇(82.35%,14/17)、阿米卡星(52.94%,9/17)、对氨基水杨酸(76.47%,13/17)、对氨基水杨酸异烟肼(88.24%,15/17)、卷曲霉素(76.47%,13/17)的耐药率均高于对克拉霉素敏感的患者[莫西沙星(11.32%,24/212)、氯法齐明(9.91%,21/212)、乙胺丁醇(41.51%,88/212)、阿米卡星(21.70%,46/212)、对氨基水杨酸(35.85%,76/212)、对氨基水杨酸异烟肼(52.83%,112/212)、卷曲霉素(28.77%,61/212)],差异均有统计学意义(χ~2值分别为16.721、46.987、10.628、6.793、10.930、7.986、16.370,P值均<0.05)。(3)logistic回归分析显示耐药的药品数目>7个[OR(95%CI)=9.328(2.058~42.290)]是克拉霉素耐药的危险因素。结论耐药肺结核患者克拉霉素的耐药率低于其他常用抗结核药物,多发生在耐多药/广泛耐药患者,耐药的药品数目>7个是患者对克拉霉素产生耐药的主要危险因素。

254例耐药肺结核患者克拉霉素耐药情况及影响因素分析

目的分析耐药肺结核患者克拉霉素耐药情况及相关危险因素,为其临床应用提供依据。方法收集2017年1月至2018年1月在首都医科大学附属北京胸科医院确诊为耐药肺结核的254例患者的临床资料和药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果进行回顾性分析。采用比例法对克拉霉索等16种抗结核药物进行药敏试验检测。采用logistie回归法分析克拉霉素耐药的临床相关危险因素。结果(1)254例耐药肺结核患者中,17例耐多药1广泛耐药患者对克拉霉素耐药,耐药率为6.69%(17/254),低于其余15种抗结核药物[12.60%(32/254)-95.67%(243/254)]。(2)对克拉霉素耐药的耐多药/广泛耐药患者.对莫西沙星(47.06%,8/17).氯法齐明(70.59%,12/17).乙胺丁醇(82.35%,14/17).阿米卡星(52.94%,9/17).对氨基水杨酸(76.47%,13/17).对氨基水杨酸异烟肼(88.24%,15/17).卷曲霉索(76.47%,13/17)的耐药率均高于对克拉霉素敏感的患者[莫西沙星(132%6.24/212).氯法齐明(9.91%,21/212).乙胺丁醇(41.51%.88212).阿米卡星(21.70%,46/212).对氨基水杨酸(35.85%,76/212).对氨基水杨酸异烟肼(52.83%,112/212).卷曲霉素(28.77%,61/212)],差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为16.721.46.987、10.628、6.793.10.930.7.986、16.370,P值均<0.05)%(3)logistic回归分析显示耐药的药品数目>7个[OR(95%CI)-9.328(2.058~42.290)]是克拉霉素耐药的危险因素。结论耐药肺结核患者克拉霉素的耐药率低于其他常用抗结核药物,多发生在耐多药1广泛耐药患者,耐药的药品数目>7个是患者对克拉霉素产生耐药的主要危险因素。

抗结核新药吡法齐明组合用药的体外及小鼠体内抗结核活性研究

目的评价吡法齐明(pyrifazimine,TBI-166)与抗耐药结核病A组药物贝达喹啉(bedaquiline,BDQ)、莫西沙星(moxifloxacin,MFX)及新型抗结核药物德拉马尼(delamanid,DLM)、SQ109、Q203、PBTZ169两药组合在体外及小鼠体内的抗结核活性,为TBI-166联合用药提供依据。方法本研究自2020年9月至2021年7月。应用棋盘法测定TBI-166与BDQ、MFX、DLM、SQ109、PBTZ169两药组合的相互作用,时间杀菌曲线法评估具有部分协同作用的两药组合的抗结核活性;BALB/c小鼠急性结核病模型评价两药联用组(TBI-166+BDQ、TBI-166+SQ109、TBI-166+PBTZ169、TBI-166+Q203)与单药组(TBI-166、BDQ、SQ109、PBTZ169、Q203)治疗4和8周的抗结核活性,采用独立样本t检验进行数据分析。结果 TBI-166与抗结核药物联用后,最低药物浓度(MIC)降至应用单药的6.25%~25.00%,TBI-166分别与BDQ、SQ109、PBTZ169两药联用后,部分抑制浓度指数(FICI)值分别为0.56、0.75、0.75;时间杀菌实验显示TBI-166分别与BDQ、SQ109、PBTZ169两药组合作用于结核分枝杆菌14 d后与单药应用时相比活菌量减少了至少3 log10 CFU/ml;在小鼠实验中发现BDQ、SQ109和PBTZ169分别与TBI-166组合后与单药组相比肺组织活菌量较少,其中TBI-166+BDQ组小鼠在治疗4周后肺组织培养阴性,小鼠肺内活菌数比BDQ单药组低1.49 log10CFU(P<0.01)。结论体外及小鼠体内实验揭示TBI-166分别与BDQ、SQ109、PBTZ169联用后均具有协同抗结核活性。

基于血清阴离子间隙、白蛋白及APACHEⅡ评分预测重症肺结核患者预后的模型构建与评价

目的:分析基于血清阴离子间隙(AG)、白蛋白(Alb)及急性生理和慢性健康评估Ⅱ(APACHEⅡ)评分构建的预测模型对重症肺结核(PTB)患者的价值。方法:选取2020年10月~2023年1月我院收治的60例重症PTB患者纳入重症PTB组,根据院内生存状态分为死亡组21例和存活组39例,另选取同期我院60名体检健康者纳入对照组。检测血清Alb,AG水平,并计算APACHEⅡ评分。采用多因素Logistic回归模型分析重症PTB患者预后影响因素并基于影响因素构建预测模型。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清AG、Alb、APACHEⅡ评分和预测模型对重症PTB患者预后的预测价值。结果:与对照组比较,重症PTB组血清AG水平升高,Alb水平降低(P<0.05)。60例重症PTB患者院内死亡率为35.00%(21/60)。多因素Logistic回归模型分析显示,AG升高、APACHEⅡ评分增加为重症PTB患者预后的独立危险因素,Alb升高为独立保护因素(P<0.05)。重症PTB患者预后预测模型方程Ln (P/1-P)=-0.173+0.105×AG-0.057×Alb+0.057×APACHEⅡ评分,Hosmer-Lemeshow检验(P>0.05)。ROC曲线分析显示,预测模型预测重症PTB患者预后的曲线下面积(AUC)为0.859,大于血清AG、Alb、APACHEⅡ评分单独预测。结论:血清AG、Alb及APACHEⅡ评分与重症PTB患者预后独立相关,基于血清AG、Alb及APACHEⅡ评分构建的预测模型对重症PTB患者预后预测价值较高。