北京地区散发性戊型病毒性肝炎238例临床研究

目的探讨北京地区散发性戊型病毒性肝炎的临床特征,为临床诊治提供参考。方法回顾2007年11月至2009年7月在首都医科大学附属北京佑安医院住院的238例戊型病毒性肝炎患者的临床及实验室特点,分析散发性戊型病毒性肝炎的临床特征和实验室特点。结果 238例戊型病毒性肝炎患者分布于不同的年龄段,其中40～49岁、50～59岁及60岁以上年龄段戊型肝炎患者显著多于39岁以下年龄段,老年患者占27.3%,未见学龄及学龄前儿童;黄疸型221例(占92.9%),无黄疸型17例(占7.1%);单纯戊型肝炎病毒感染209例(占88%),重叠感染29例(占12%),均为乙、戊型肝炎病毒重叠感染。戊型病毒性肝炎ALT显著增高,41.6%的患者大于1000IU/L,20%以上的患者出现PTA低于正常范围,6(2.5%)例患者的PTA低于40%。老年戊型病毒性肝炎患者肝脏合成及储存指标均低于其他年龄组患者,血清白蛋白和胆碱酯酶下降明显。结论散发性戊型病毒性肝炎患者临床特征及生化指标符合急性肝损伤的表现,以急性黄疸型肝炎为主,也有病情较重患者,不能忽视。尤其是老年戊型肝炎患者,在治疗肝病期间一定要注意并发症的治疗。

慢性肝病患者肝组织巨噬细胞功能变化研究新进展

目的巨噬细胞对于维持内环境稳态和修复组织损伤有着至关重要的作用。肝组织巨噬细胞又可以进一步分为具有自我更新能力的库普夫细胞和单核细胞衍生的巨噬细胞。一方面,巨噬细胞可以抵抗病毒感染和药物等不利因素的损害,促进肝组织完整性的修复;另一方面,它又能促进肝炎和肝硬化等疾病的进展。本文重点讨论肝组织巨噬细胞的分类和功能变化方面的最新研究进展。

非酒精性脂肪性肝炎的药物和生物标志物发展中的挑战和机遇:美国肝病研究协会-美国食品药品管理局联合工作组的调查和建议

2015年Hepatology发表了美国肝病研究协会（AASLD）与美国食品药品监督管理局（FDA）联合工作组完成的《非酒精性脂肪性肝炎的药物和生物标志物发展中的挑战和机遇》

中药抗肝纤维化实验研究进展

肝纤维化是由病毒性肝炎、酒精中毒等多种病因导致的慢性肝脏疾病的共同病理过程,可进展为肝硬化,乃至肝癌,严重威胁人类健康。中药在抑制肝纤维化进展和促进肝纤维化逆转方面有着“多成分-多靶点-多途径”的作用特点,具备独特的临床疗效。近年来,中药抗肝纤维化的实验研究取得了较大的进展,许多具有良好抗肝纤维化作用的中药复方和单味药及其有效成分被发现,并从细胞、分子水平等方面揭示了其潜在的作用机制。为进一步阐明中药抗肝纤维化实验研究进展,本文从中药抗肝纤维化实验动物模型、中药抗肝纤维化作用机理、从动物实验到临床试验的中药研究三方面,系统阐述了其近5年的研究进展,为科研人员及临床医师开展中药抗肝纤维化药物研发和应用提供参考。

肝细胞癌诊断与治疗研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界范围内的第5大常见肿瘤,且男性肿瘤病死率居第3位。病毒性肝炎、肥胖和代谢综合征是HCC发病的明确危险因素。本文关注最新数据和推荐指南,回顾性分析HCC的诊断和治疗方法。HCC早期诊断依赖于动态加强的典型放射影像,肝移植、手术切除和射频消融是HCC的治愈性疗法,而索拉非尼和经动脉化疗性栓塞多推荐用于晚期HCC,由肝脏病学、外科学、放射学、肿瘤学和病理学专家组成的多学科综合治疗是未来HCC治疗的发展方向。

逆转肿瘤上皮间质化药理研究进展

上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程,是肿瘤侵袭和转移过程的重要启动步骤,与恶性肿瘤的进展和预后密切相关,EMT已经成为抗肿瘤药理研究的重要靶点。该文从药理筛选模型、靶向药物、细胞毒类药物、天然药物几个方面综述近几年来有关逆转肿瘤EMT药理方面的研究,对于研发能够逆转恶性肿瘤EMT的抗肿瘤药物具有重要指导意义。

ASPP2蛋白的结构特征和生物学功能研究进展

p53凋亡刺激蛋白2抗体（ASPP2）又被称为53BP2L,是p53结合蛋白家族的一个促凋亡成员。临床研究显示ASPP2在人类癌症组织中常常表达下调,这种表达受抑与肿瘤的发生进展以及不良预后密切相关。

乙肝病毒核心启动子区和前C区突变与肝细胞自噬的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核心启动子区和前C区突变与肝细胞自噬的关系。方法构建前C区和C启动子区突变的1.3mer HBV质粒G1613A、A 1762T/G1764A、,G1896A;HepG2细胞分别转染GFP-LC3质粒和突变的HBV质粒。免疫荧光染色法检测HBV感染的细胞LC3荧光颗粒表达水平,免疫印迹法分析内源性LC3表达水平,实时定量PCR检测转染后细胞内自噬相关基因Atg5、Atg7和Beclin-1 mRNA的转录水平。结果免疫荧光显示,转染HBV G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A质粒的细胞LC3荧光颗粒表达水平分别为(12.5±0.2)%、(11.7±0.2)%、(8.5±0.2)%,低于转染野生型HBV质粒的细胞[(14.5±0.2)%],差异有统计学意义(P﹤0.05)。实时定量PCR显示,自噬相关基因Atg5 mRNA在转染HBV G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A质粒的细胞中的转录水平均明显低于野生型HBV(P﹤0.01),Atg7和Beclin-1在转染G1896A HBV质粒细胞中的基因转录水平低于野生型HBV转染的细胞,且Beclin-1的降低具有统计学意义(P<0.05)。结论 HBV前C区和C启动子区G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A突变能够降低HBV感染的肝细胞自噬。

病原感染在自身免疫性肝病发生发展中的作用

自身免疫性肝病(AILD)的病因和发病机制研究一直是领域内的研究热点。病原体感染可参与诱发机体的自身免疫反应,常常成为免疫性疾病的关键致病因素。本文基于文献数据和作者临床经验,将从分子模拟机制等方面对病原感染在AILD的发生和发展中的作用及其影响进行简单介绍,以助更深入地了解AILD的发病机制。

血浆高尔基体糖蛋白73和血小板计数在不同阶段HBV相关肝病中的表达及意义

目的分析不同阶段HBV相关肝病患者外周血高尔基体糖蛋白73(GP73)水平和血小板(PLT)计数,了解二者对不同发病阶段HBV相关肝病的检测意义。方法收集2010年5月-2013年8月于北京佑安医院就诊的36例慢性乙型肝炎(CHB)、32例肝硬化和147例肝硬化后肝细胞癌(HCC)患者外周血标本,利用ELISA检测GP73水平,用全自动血细胞分析仪检测PLT。计量资料多组间比较用单因素方差分析,计数资料组间比较采用χ2检验,相关性分析用一元线性回归。结果在CHB、肝硬化、肝硬化基础上的HCC早早期、早期、进展期和晚期患者外周血浆中GP73水平和PLT均呈现出相同的变化趋势,HCC早早期患者的GP73水平[(80.5±49.8)ng/ml]和PLT计数[(84.4±40.0)×109/L]均显著低于CHB[(135.5±95.8)ng/ml,(174.4±49.9)×109/L]、HCC进展期[(133.8±71.1)ng/ml,(122.0±70.50)×109/L]和HCC晚期[(192.2±98.1)ng/ml,(176.2±86.3)×109/L],且差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论 GP73水平和PLT计数在HBV相关肝病的不同阶段呈现动态变化,联合动态检测GP73水平和PLT计数更有利于对早期HCC的鉴别诊断以及HCC预后的判断。

外源性AFP对肝癌细胞增殖和抗凋亡的作用研究

目的探讨外源性甲胎蛋白(AFP)对体外培养的肝癌细胞系的生物学功能及意义。方法该实验选用了HepG2(AFP阳性)和HLE(AFP阴性)两种常见的肝癌细胞系,再加入不同浓度的外源性AFP处理24 h后,用MTT检测细胞的增殖情况;在这两种细胞系中加入凋亡诱导剂ATRA处理的同时加入外源性AFP,检测AFP对于细胞的抗凋亡能力的影响。结果在HepG2和HLE细胞中,加入不同浓度的外源性AFP后,MTT结果显示AFP可以明显促进肝癌细胞的增殖;而加入凋亡诱导剂ATRA之后,FCM结果显示细胞凋亡明显增加,加入外源性AFP后,细胞凋亡的情况明显好转,外源性AFP可以增强肝癌细胞的抗凋亡能力。结论外源性AFP不仅可以促进肝癌细胞系的增殖,同时还可以增强肝癌细胞的抗凋亡能力。

葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶siRNA对7702肝细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨糖鞘脂合成代谢在肝细胞增殖中的可能作用机制。方法体外培养肝细胞株7702细胞,利用UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)si RNA转染肝细胞。采用MTT法检测细胞增殖,采用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax和Caspase 3基因水平,采用Western blot法检测肝细胞Caspase 3蛋白表达情况。结果 UGCG si RNA干扰组细胞糖化神经酰胺合成酶基因水平比对照组明显下调(P<0.05);干扰糖化神经酰胺合成酶基因表达后,转染组细胞Bcl-2 m RNA水平显著下降(P<0.05),Bax m RNA水平显著升高,Caspase 3 m RNA及其蛋白表达水平均上调(P值均<0.05)。结论糖化神经酰胺合成酶的缺乏引起的鞘脂代谢改变可能参与肝细胞的增殖的过程中,这可能与BCL2/BAX调节的细胞信号通路有关。

自噬功能研究进展

近年来，自噬功能越来越成为除细胞凋亡之外备受关注和研究的领域。自噬不仅被证实是一种细胞自我死亡的方式，同时也是一种细胞的自我保护机制，在肿瘤、老化和神经退化等细胞增殖和凋亡发生紊乱的疾病中发挥着重要的作用。根据细胞内底物进入溶酶体腔的方式不同，自噬可分为分子伴侣介导的自噬、小分子自噬和大分子自噬3种方式，

人ASPP2重组腺病毒质量控制研究

目的对人ASPP2重组腺病毒制剂进行质量分析,并针对其关键质量特性建立质控方法。方法采用PCR法对重组腺病毒的载体结构特征基因E2B和目的基因ASPP2进行扩增,琼脂糖电泳进行分子量鉴定;采用UV-SDS法测定重组腺病毒的病毒颗粒数;采用组织培养半数感染剂量法(TCID50)测定重组腺病毒的感染滴度;采用Western blot法对重组腺病毒感染靶细胞后目的蛋白ASPP2的表达情况进行检测;通过MTT实验观察重组腺病毒对肝癌细胞的生物学效应;采用A549细胞进行重组腺病毒的复制型病毒检测。结果腺病毒载体E2B基因和目的基因ASPP2的鉴定结果与理论值相符;重组腺病毒的病毒颗粒数为每毫升5.6×10^(12)VP,病毒滴度为每毫升2×10^(11)IU,比活性为3.5%;病毒感染靶细胞24 h后可检测出ASPP2蛋白的表达;重组腺病毒对肝癌细胞具有生长抑制作用;复制型腺病毒(RCA)水平小于1 RCA/3.0×10^(10)VP,符合中国食品药品监督管理局(SFDA)的标准。结论建立了人ASPP2重组腺病毒的关键特征的质量控制方法,为该重组腺病毒质量标准的建立及相关应用奠定了基础。

HIV-1感染者中枢神经系统的病毒学特征研究

目的探讨HIV-1感染者中枢神经系统(CNS)的病毒学特征。方法通过克隆测序分析病毒亚型,观察CNS中HIV-1变异性和离散率;依据V3环11/25法则并结合10例有偿献血HIV-1感染者尸检脑组织标本免疫荧光试验分析中枢神经HIV-1复合受体的使用。结果有偿献血人群感染的HIV-1显示B和B′亚型特征,脑脊液(CSF)和外周血序列有嵌合现象;CSF C2-V5区序列变异性明显低于外周血,两者的离散率差异无统计学意义;依据11/25法则分析V3环序列可见中枢神经HIV-1大多数使用CCR5复合受体。结论 CNS HIV-1病毒变异性明显小于外周血;CNS HIV-1具有CCR5嗜性。

癌基因Ras及其常见突变与P53协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的研究

目的探讨P53与Ras及常见Ras突变协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的影响。方法 P53-/-的结肠癌细胞(HCT116 P53-/-)中分别单转染Ras野生型、Ras V12、Ras N17质粒,另外3组细胞分别转染以上质粒后感染P53腺病毒。用奥沙利铂处理12 h后分别用钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)染色、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、免疫印迹(WB)检测各组凋亡水平。结果 Calcein-AM/PI染色显示,Ras V12转染组凋亡率[(16.8±1.7)%]显著高于Ras[(8.3±1.5)%,P<0.01]和Ras N17转染组[(4.4±1.6)%,P<0.01],Ras N17转染组凋亡率最低(P=0.016);P53腺病毒处理3组凋亡率均显著增高,仍以Ras V12转染组凋亡率[(25.9±2.2)%]为最高,Ras N17转染组最低[(7.6±1.2)%]。Real-time PCR和WB显示,P53存在与不存在条件下,Ras V12转染组Bax m RNA和蛋白表达均显著高于Ras和Ras N17转染组;Bcl-2水平则与Bax水平相反(P均<0.05)。结论 Ras突变体Ras V12过表达能够引起奥沙利铂作用下细胞凋亡的增加,而突变体RAS N17能够降低细胞凋亡;P53与Ras有协同作用,能够提高Ras的促细胞凋亡作用,提高细胞对奥沙利铂化疗药的敏感性。

山奈酚对HepG2细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨山奈酚对人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响及其机制。方法以不同浓度山奈酚作用于HepG2细胞,在不同时间采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞存活率;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力定量测定试剂盒检测细胞上清液LDH的活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹法(western blot,WB)检测细胞凋亡途径各标志物mRNA的相对表达量及蛋白表达水平。结果山奈酚作用于HepG2细胞24 h后,5、10、25、50和100μmol/L山奈酚组细胞存活率分别为(102.3±1.9)%、(96.1±5.3)%、(86.7±10.3)%、(79.8±8.4)%和(60.2±2.9)%,其中,50μmol/L和100μmol/L山奈酚组细胞存活率与溶剂对照组的(99.6±0.6)%比较,差异有统计学意义(P=0.015,P<0.001);100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞3、6、12、24 h后细胞存活率分别为(99.8±4.1)%、(92.6±7.3)%、(80.2±8.0)%和(62.5±2.7)%,其中12 h和24 h山奈酚组与溶剂对照组的(99.6±0.4)%比较,差异有统计学意义(P=0.015,P<0.001)。5、10、25、50、100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞24 h后,细胞上清液中LDH活力单位分别为(198.6±28.8)、(370.0±10.2)、(395.2±16.5)、(444.5±45.1)、(475.9±33.3)U,其中,10、25、50和100μmol/L山奈酚组与溶剂对照组的(216.7±32.4)U比较,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.001,P=0.002,P=0.001);100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞3、6、12和24 h后,细胞上清液中LDH活力单位分别为(236.3±47.4)、(238.7±52.0)、(311.6±50.3)、(425.4±28.4)U,与溶剂对照组的(162.3±31.9)U比较,12 h和24 h山奈酚组LDH活性明显升高,差异有统计学意义(P=0.012,P=0.000)。5、10、25、50、100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞24 h后均可诱导凋亡发生,凋亡率分别为(3.6±0.5)%、(4.7±0.3)%、(5.3±0.7)%、(10.4±0.8)%和(16.4±0.3)%,随着山奈酚浓度的升高,凋亡率随之增加,各浓度山奈酚组细胞凋亡率显著高于溶剂对照组的(1.0±0.4)%,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.000,P=0.001,P<0.001,P<0.001);100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞3、6、12、24 h后,细胞凋亡率分别为(4.8±0.4)%、(7.9±0.4)%、(11.4±0.5)%和(16.5±1.0)%,且各组细胞凋亡率均显著高于溶剂对照组的(0.4±0.1)%,差异有统计学意义(P均<0.001)。山奈酚作用于HepG2细胞后,Bax、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein 94,GRP94)、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、裂解的活化转录因子6(cleaved activating transcription factor 6,cleaved ATF6)、肌醇需求酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)m RNA的相对表达量及裂解caspase3、caspase4蛋白表达水平随着山奈酚浓度的升高及作用时间的延长逐渐增加;各组Bcl-2 mRNA的相对表达量与溶剂对照组相比,差异无统计学意义。结论山奈酚可以通过线粒体途径和内质网应激途径诱导HepG2细胞凋亡,可能具有潜在的抗肝癌活性。

慢性乙型肝炎患者外周血调节性B细胞与乙肝病毒DNA定量的相关性

细胞免疫应答在乙型肝炎病毒（HBV）感染后的清除过程中发挥了重要的作用．但是研究发现,慢性乙型肝炎患者体内特异性T细胞对HBV呈现了免疫低反应性，其确切机制仍不清楚。传统观点认为B细胞主要发挥体液免疫应答和抗原提呈作用。实际上．B细胞也具有免疫负调节作用。最近的研究证实，调节性B细胞（Bregs）自身免疫性疾病、炎症性疾病和癌症中具有致病作用。

肝癌组织中c-myc基因突变的研究

目的检测肝细胞癌中c-myc的DNA苏氨酸58(T58)和丝氨酸62(S62)的突变情况,以揭示肝癌发生发展的机制。方法应用聚合酶链反应(PCR)方法,检测89例肝癌组织及癌旁组织中c-myc基因的T58和S62的突变情况。结果在89例肝癌组织及癌旁组织中未见c-myc的T58或S62及周围氨基酸突变,但发现c-myc的DNA水平与原发性肝细胞癌(HCC)的病理分级存在一定关系,低分化组(87.5%,21/24)、中分化组(74.4%,29/39)及高分化组(53.8%,14/26)与c-myc阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 c-myc基因的表达与HCC的病理分级存在一定关系,其在肝癌组织的高表达不是由于T58或S62的突变导致c-myc稳定性增高所致,亦有其他的因素参与其中。

肝硬化大量腹水的整体护理研究

肝硬化是肝病和消化科常见病、多发病。由于我国乙型肝炎病毒感染率较高,乙肝肝硬化发病率较高。近些年丙肝肝硬化、酒精性肝硬化以及自身免疫性肝硬化患病率也有上升趋势。由低蛋白血症、门静脉高压等多种因素所致的大量腹水是肝硬化严重并发症之一,病程长,治疗难度大。认真、细致的护理工作对于促进患者康复,减少并发症发生具有非常重要的作用。作为全国肝病专科医院之一的首都医科大学附属北京佑安医院(以下简称"我院"),具有一定的肝硬化大量腹水治疗护理经验,本文将我院肝病消化中心多年治疗肝硬化大量腹水过程中的护理经验总结如下:首先要给患者创造良好的休息环境,保证患者得到充分休息,根据病情针对性地让患者采取适当的休息体位;其次加强心理疏导;再次注意患者的饮食和饮水量的调节,改变患者酗酒及滥用保健品和相关药品的不良习惯;最后要认真、严格记录患者的每日尿量、腹围和体重,注意生命体征监测,并加强皮肤护理和防治脐疝。