外源性三磷酸腺苷对人胃腺癌SGC-7901细胞的生物学效应

本文报道外源性三磷酸腺苷(ATP)对人胃腺癌SGC-7901细胞系增殖的抑制效应。在SGC-7901细胞的培养基质内加入ATP后,细胞生长明显受阻抑,4天以后,抑制率可达80%以上;癌细胞质膜上的3′,5′环腺苷酸磷酸二酯酶(cAMP-PDEase)活性明显下降,而细胞内的cAMP和纤维粘连蛋白的免疫荧光强度却明显增强。癌细胞多呈梭形,微绒毛减少,表面较光滑,呈现癌细胞向正常方向逆转的表型特征。本文还就ATP作用的机理进行了讨论。

采用FRAP技术研究细胞膜分子侧向运动在细胞癌变和“逆转”中的调控机理

细胞膜领域的研究,自70年代以后一个根本性变革就是从静态研究转向动态性研究。细胞膜分子的二维运动不仅仅是细胞二维信息传递的决定者,而且潜有代谢通道,能量通道等。膜分子的运动状态,借助动力学分析可探讨在细胞生长、分化过程的膜结构、膜功能的关系。

三种细胞系(人胚肺与小儿包皮成纤维及人胃癌细胞)膜表面ConA受体的再分布和侧向扩散的研究

利用荧光染色和荧光漂白后恢复FRAP技术观察人胚肺成纤维细胞,小儿包皮成纤维细胞和人胃腺癌细胞膜表面Con A受体复合物的分布及其侧向运动.结果表明:它们的分布呈均匀连续性,极为相似.但它们的侧向运动速率各异.两种成纤维细胞差异较小,而人胃癌细胞的侧向扩散系数显著地不同于两种成纤维细胞.因此把凝集素受体的分布与运动行为表达结合起来分析,能更好地认识细胞在生长、分化或恶变过程中膜性状的差异性与共性.

癌基因表达与膜分子侧向运动和cAMP转运的相关性(环核苷酸对癌细胞作用)

Ehrlich癌细胞在cAMP诱导下,于接种后5-7天癌基因c-myc、c-fos、c-H-ras、c-sis的表达强烈被抑制.与此同时癌细胞膜对cAMP转运增强.膜蛋白分子扩散系数[D]值下降,均以接种后7天最为显著P<0.01.可动分子百分比提高.这反映出癌细胞的分化变异.但至接种后9天,上述癌基因重新表达,膜蛋白分子扩散系数上升,cAMP转运下降,这可能是导致接种后11天癌细胞增殖急剧上升,细胞内cAMP水平下降的原因.说明Ehrlich细胞在去恶化及恶化过程中,癌基因表达变异.膜蛋白分子运动和癌细胞多种表型之间密切相关.

丁酸钠对人胃腺癌MGC-803细胞核仁纤维中心和银染蛋白的影响

用透射电镜观察到MGC-803细胞的核仁是网织型的,在网眼内分布有电子密度低的纤维中心。MGC-803细胞经丁酸钠作用后,其核仁的类型发生了改变,多呈环型的,核仁的中央有一个大的纤维中心;纤维中心和银染颗粒的大小和数目明显减低;用图像分析仪测得核仁银染蛋白所占面积与核总面积的比值也明显降低。结果提示:丁酸钠可能通过抑制rRNA合成和rDNA转录活性调控MGC-803细胞的增殖。

cAMP对人胃腺癌细胞系SGC-7901的影响——微绒毛和Na^(+)—K^(+)—ATP酶活性变化的电镜观察

本实验通过外源性cAMP和茶碱对人胃腺癌细胞系SGC-7901的连续作用,观察到外源性cAMP和茶碱对该细胞株的增殖,具有明显的抑制作用。在透射电镜和扫描电镜下,均可见到细胞表面较光滑,微绒毛减少或消失。同时见到细胞膜表面上的Na^(+)—K^(+)—ATP酶活性受到抑制。本文讨论了外源性cAMP对人胃腺癌SGC-7901细胞系增殖的抑制作用,以及膜表面微绒毛和Na^(+)—K^(+)—ATP酶活性变化的关系。

一种高效率细胞同步化方法的改良与运用

本实验改良了Rao的高压N_2O气阻断方法,获取高同步率和收获率的4个周期时相细胞,并进行了测定分析。将指数生长的细胞用过量TdR(2.5mmol/L)预处理后,放在新设计的高压罐内,并直接将罐放入恒温箱内,经高压N_2O气处理,细胞被阻断在有丝分裂中期。收集M期细胞在37℃下孵育释放2小时,细胞即可进入G_1期;在中G_1期再次用过量TdR处理与释放,于不同时间分别收集S期与G_2期细胞。各时相细胞通过膜表面ConA受体再分布也表现进显著的时相差异性。每个时相细胞均能继续贴壁生长,活力高,适于各种相关实验研究。

三磷酸腺苷对人胃癌细胞系MGC－803影响的电镜观察

用透射电镜和扫描电镜方法观察了三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对人胃癌细胞系ＭＧＣ－８０３的影响，结果表明，ＡＴＰ能使ＭＧＣ－８０３细胞的核仁由网状向环状改变，微丝的组装得到改善，细胞表面微绒毛减少。提示ＭＧＣ－８０３细胞的恶性表型在ＡＴＰ作用下可向正常方向逆转。

人胃癌细胞系和成纤维细胞的 Con A 受体分布的变异

本文采用 Con A-过氧化物酶光镜和电镜细胞化学方法观察了体外培养的人胃癌细胞(MGC80-3)和成纤维细胞质膜的 Con A 受体分布特点,未经固定的 MGC80-3细胞,Con A 受体复合物呈斑块样不规则分布,而成纤维细胞呈均匀弥散分布。本文还观察了细胞不同的周期时相和生长状态,以及不同的外界因素影响下 Con A 受体复合物的分布变异特点,并对 Con A 受体复合物在胃癌细胞质膜上不规则分布的原因进行了讨论。

小白鼠艾氏腹水癌细胞Mg^(++)-ATP酶的细胞化学观察(光学及电子显微镜)

本实验采用Wachstein-Meisel显示ATP酶的方法,对小白鼠艾氏腹水癌细胞的Mg^(++)-ATP酶进行光学及电子显微镜下的细胞化学观察,见到Mg^(++)-ATP酶集中分布在癌细胞的质膜表面和线粒体内,线粒体内存在的Mg^(++)-ATP酶对戊二醛极为敏感,一经戊二醛固定后,线粒体内存在的Mg^(++)-ATP酶反应消失。但质膜上Mg^(++)-ATP酶的沉淀反应却不受戊二醛的影响,固定后仍可见到强的沉淀反应。L-半胱氨酸可加强质膜上和线粒体内ATP活性酶所产生的阳性反应,而经NaF,PCMB处理后,其阳性的沉淀反应消失。

在膜蛋白分子侧向运动中细胞骨架的作用

本实验采用体外培养的人胃癌细胞,利用免疫荧光技术和FRAP技术研究细胞骨架和膜表面ConA受体复合物的侧向扩散运动.实验分成5组:①用CB处理细胞5小时;②CB处理5小时后,除去药物,换正常培养液培养1小时;③用秋水仙素处理5小时;④秋水仙素处理细胞5小时后,除去药物,换正常培养液培养2小时;⑤对照组.经CB处理细胞后,胞质微丝减少或消失,但是膜ConA受体复合物的侧向扩散运动增加〔D〕=1.05×10^(-1)cm^2/sec,当除去CB后,微丝重新出现,膜ConA受体复合物的侧向扩散运动又减慢〔D〕=0.81×10^(-1)cm^2/sec,与对照组相似.而无论是用秋水仙素处理细胞,还是撤药后微管收复,都不能看到膜表面ConA受体复合物侧向扩散运动的变化.以上结果表明:影响膜表面ConA受体复合物的侧向扩散运动主要在于微丝的作动.

cAMP对癌细胞增殖周期的影响和膜表面ConA受体分布相关性

用流式光度计、放射自显影和荧光标记等方法研究了体内艾氏腹水癌(EAC)细胞经cA-MP诱导后,在其增殖过程中细胞周期和细胞膜表面ConA受体复合物分布之间的相关性。结果表明:接种后5—9天实验组S期细胞增加45.3％,同时ConA受体复合物分布呈帽状的比率和LI(~3H-TdR掺入)均大于对照组。但G_2+M期细胞的比率及MI却小于对照组,后者呈断续簇状分布的细胞比率大于实验组。至接种后11天,实验组细胞继续簇状分布的比率急剧增加,达6.18倍。这时S期细胞比率和LI均下降,而G_2+M期细胞反而大于对照组。

EAC细胞在3＇5＇－cAMP诱导下PKA－RⅡ移位入核与癌基因表达的动力学变化

Ｅｈｒｌｉｃｈ细胞在ｃＡＭＰ加茶碱的诱导下，于接种后５－７天，伴随着胞质内ｃＡＭＰ蛋白结合率上升的同时，依赖于ｃＡＭＰ的蛋白激酶Ⅱ型酶调节亚基（ＰＫＡ－ＲⅡ）从胞质向核移位，其表达强度在胞质和核内持续升高，此时癌基ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ，ｃ－Ｈ－ｒａｓ，ｃ－ｓｉｓ表达抑制。ｃＡＭＰ蛋白结合率与ＰＫＡ－ＲⅡ的移位入核呈显著的正相关，二者与癌基因表达抑制是显著的负相关，它们均从第７天最为显著。在癌龄晚期（按种后９－１１天），当胞质内ｃＡＭＰ蛋白结合率下降（与对照组比较）时，ＰＫＡ－ＲⅡ则停止移位入核，癌基因又重新表达，如果用ｃＡＭＰ抑制剂人为阻断接种后第７天的癌细胞内ＰＫＡ信号通路时，ＰＫＡ－ＲＨ则停止移位入核，而癌基因仍呈强烈表达。对上述各结果之间的关系进行了分析与讨论。

外源性3’,5’环腺苷酸对肝癌-H22腹水型癌细胞Mg^(++),(Na^(+)-K^(+))-ATP酶、磷酸二酯酶影响的观察

本实验通过外源性3′,5′环腺苷酸和茶碱对小白鼠肝癌-H_(22)腹水型癌细胞的连续作用,观察到癌细胞的增殖受到明显抑制,伴随有癌细胞膜表面Mg^(++)-ATP酶、(Na^(+)-K^(+))-ATP酶以及磷酸二酯酶活性明显下降;酶活性变化与膜表面微绒毛的变化,有一定平行关系。

外源性3′,5′,环腺苷酸对人胃腺癌细胞系的影响

本实验通过外源性3′,5′环腺苷酸(cAMP)对人胃腺癌SGC-7901细胞系的连续作用,观察到癌细胞的增殖受到明显抑制的同时,膜表面环腺苷酸-磷酸二酶(cAMP-PDEase)的活性及Mg^(++)-ATPase活性均明显下降,而细胞内cAMP免疫荧光强度则明显增强,进一步证实了细胞内cAMP水平与细胞的生长、分化,及膜表面ATPase、cAMP-PDEase的活性有密切的关系。

两种人胃癌细胞M期与间期时相质膜表面Con A受体复合物分布及侧向运动

利用荧光标记和荧光漂白恢复方法研究了两种人胃腺癌细胞M期与间期时梠中,细胞膜表面ConA受体复合物分子的分布与侧向运动.结果表明:MGC80-3细胞M期时相与SGC7901细胞间期时相膜表面ConA受体复合物分布近似,其侧向运动方式呈扩散型;SGC 7901 M期时相细胞膜表面ConA受体复合物的分布与MGC80-3细胞间期时和相基本类似,其侧向运动主要是流动型.凡是受体复合物是流动型运动的细胞.其膜上可动分子的百分比都寓于扩散型运为的细胞,P值小于0.01.

复方中药和3′,5′环腺苷酸(cAMP)对小鼠艾氏腹水癌细胞的抑制效果与癌细胞内cAMP含量及cAMP-PDE活性变化关系

本工作用复方白蛇酒及外源性cAMP对小鼠艾氏腹水癌进行比较实验,通过实验观察到该复方制剂和外源性3’,5’-cAMP对小鼠艾氏腹水癌细胞的增殖均有显著的抑制作用,癌细胞增殖受到抑制的同时,癌细胞内3’,5’-cAMP含量显著提高;控制cAMP水平的3’,5’-cAMP磷酸二酯酶(PDE)活性受到抑制。该复方之所以能提高癌细胞内cAMP水平可能是由于细胞内3’,5’-cAMP-PDE.活性受到抑制所致。本工作进一步将该复方组分的两部份(六味中草药和蟾蜍酒)与原复方白蛇洒分别进行实验比较,观察到前两组癌细胞内3’,5’-cAMP水平和3’,5’-cAMP-PDE的活性均未看到显著变化,本工作可为中医临床用药和疗效机理提供一定的理论依据。

大鼠杂交瘤技术及抗HIV、HBsAg大鼠单克隆抗体的制备

在目前制备单克隆抗体的三个主要体系:小鼠、大鼠和人杂交瘤体系中,大鼠系统具有某些特有的优点。本文以制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎表面抗原的大鼠单克隆抗体为例,较详细的介绍了大鼠杂交瘤的特点及大鼠单克隆抗体制备技术。