细胞癌变的遗传模型研究回顾与展望

通过近几十年来对细胞癌变深入研究，人们逐渐认识到细胞癌变是正常细胞在生长、增殖与分化过程中失控而导致细胞的异常生长．正常细胞在内因和外因的作用下经过启动期（initiation）、促癌期（promotion）和进展期（progression）而最终在生物体内形成肿瘤．肿瘤的这种生长模式已在许多实验性系统中被充分证实，而且也较符合人体内癌前病变转变为真正肿瘤的临床观察[1]。虽然人们早就认识到肿瘤的形成有一个时间与空间的发展过程，但具体从细胞到癌变过程中所发生质量上的深刻变化，人们还知之甚少。随着分子生物学的发展，人们对细胞癌变的认识亦逐渐深入。

中国华北地区人群TAP1基因多态性与乙肝关联性的研究

目的 探讨华北地区人群TAP1基因SNPs与乙肝发生的关联。方法 提取中国华北地区 176例乙肝患者及该地区2 0 8例健康献血者外周血基因组DNA ,用PCR方法扩增TAP1基因包含Codon3 3 3、63 7片段 ,采用DNA直接测序法检测健康个体基因型 ,用RFLP明确乙肝患者基因型。并采用PHASE1 0软件构建这两个多态性位点的个体单倍体型。以非条件Logistic回归校正混杂因素 ,并进行多态性与乙肝风险关联性的统计学分析。结果 TAP1基因 2个多态性位点在华北地区人群中具有多态性 (均为A→G)。其中Codon63 7多态性位点在两组人群中的差异有高度显著性 (P <0 . 0 1) ,较之野生型A/A ,杂合型A/GOR =4 . 68(95 %CI =2 . 99～ 7 . 3 3 ) ,纯合型G/GOR =6 . 3 4(95 %CI =2 . 49～ 16 . 13 ) ;Codon3 3 3多态性位点在两组人群中无差异 (P >0 . 0 5 )。在这两个位点所构建的单倍体型中 ,我们研究发现含有AG单倍体的个体在两组人群中具有高度差异 (P <0 . 0 1) ,OR =19 . 85 (95 %CI =8 . 3 3～47 . 3 1)。结论 TAP1基因Codon63 7位点的多态性对于乙肝的发生有着显著的易患关联 ,其杂合、纯合形式分别增加乙肝患病风险4 . 68倍和 6 . 3 4倍。而具有AG单倍体的个体对于乙肝的发生具有更强的易感关联 。

乳腺疾病HPV感染率及其相关性研究

目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)16型在乳腺疾病中的感染率及其与乳腺疾病的相关性。方法:收集61例肿瘤组织、29例良性增生的乳腺组织的石蜡包埋切片,并从中提取出DNA。采用聚合酶链反应(PCR)以及原位杂交(ISH)的方法,从多角度、多方面的对各种乳腺疾病中HPV-16E6的存在及其在乳腺组织中的表达进行检测。结果:用PCR检出的肿瘤组织中HPV-16E6的阳性率为65.6%(40/61),良性增生组织中的阳性率为65.2%(15/23),癌旁组织的阳性率为37.04%(10/27),乳腺癌细胞株中的阳性率为66.7%(4/6);用ISH检出的肿瘤组织中HPV-16E6的阳性率为44.3%(27/61),良性增生组织中的阳性率为44.8%(13/29),癌旁组织中未发现HPV-16E6的表达。两种方法在检验中的相同率达到72.1%。结论:HPV-16E6在乳腺癌的发生过程中起到重要的作用。

中国北方两市部分人群IL-2、IL-4基因多态性与乙肝关联性的研究

目的:探讨北方地区人群IL2、IL4基因SNPs与乙肝发生的关联。方法:提取中国北方两市乙肝患者及健康对照外周血基因组DNA,用PCR方法扩增IL2基因包含突变位点330的片段以及IL4基因包含突变位点590的片段,采用RFLP明确健康个体乙肝患者基因型。采用PHASE10软件构建这3个多态性位点的个体单倍体型。以非条件Logitic回归校正混杂因素,并进行多态性与乙肝风险关联性的统计学分析。结果:2个多态性位点在北方两市部分人群中具有多态性。两组人群中330(IL2)多态性位点差异有统计学意义(P<0.05);590(IL4)多态性位点差异无统计学意义(P>0.05)。这两个位点所构建的单倍体型中,含有GT单倍体的个体在两组人群中具有高度差异(P<0.01)。结论:IL2基因330位点的多态性对于乙肝的发生有着显著的易患关联,其杂合、纯合形式分别增加乙肝患病风险1.67倍和3.81倍。具有GT单倍体的个体对于乙肝的发生同样具有易感关联,其增加乙肝患病风险约为1.94倍。

农村已婚女性慢性宫颈炎患病危险因素研究

目的:探讨农村已婚女性慢性宫颈炎患病情况及危险因素。方法:采用整群抽样,选取2007～2009年河南省安阳地区农村已婚女性为调查对象,进行问卷调查、妇科检查及实验室检查。使用多因素非条件Logistic回归分析慢性宫颈炎患病的危险因素。结果:调查对象慢性宫颈炎患病率为7.91%。调整年龄、职业及文化程度后,危险因素包括:人工流产次数增加、初孕年龄在15～21岁及阴道炎患病。结论:应到正规医疗机构进行人工流产,并加强性卫生及晚育的宣教工作。

克栓酶抑瘤作用的实验研究

目的 实验研究克栓酶的抑瘤作用 ,以期扩展其药用范围 ,为治疗肿瘤增加药源。方法 采用双层琼脂培养 ,流式细胞检测 ,免疫组化图象分析 ,MTT ELISA等 ,以及荷瘤裸鼠整体实验方法观察对人肺癌细胞 (PG)与正常人胚内皮细胞增殖抑制作用。结果 证明克栓梅可抑制PG与人胚内皮细胞增殖 ,具有统计学意义。结论 克栓酶毒性低具有治疗肿瘤的潜能。在肿瘤综合治疗中如何合理联合配伍使用克栓酶值得进一步探讨。

与胃癌相关的癌基因Met及K-sam的研究进展

与胃癌相关的癌基因Ｍｅｔ及Ｋ┐ｓａｍ的研究进展张建明柯杨鄂征作者单位：北京医科大学临床肿瘤学院（北京１０００３４）北京市肿瘤防治研究所遗传室任何一个正常细胞的增殖，生长和分化都是促生长信号因子和抑制生长信号因子的相互平衡调节下进行的。其中任何一环节的...

人胃癌细胞系BGC—823不同转移能力的细胞克隆间的细胞微丝结构特征研究

用单细胞培养法,从人胃癌细胞系BGC-823中分离出10个克隆。通过裸鼠致瘤和转移检测,进一步筛选出具有较高转移性的C_1、C_6和低转移的C_5、C_8等4个细胞株。它们的生长能力虽无明显差异,但超微结构显示C_5和C_8细胞表面微绒毛少,而且长度不一,微丝长而粗,排列规则,组装程度较好;C_1和C_6细胞微绒毛多而密集,长度均一,微丝短而粗,呈点状或玫瑰状小体,组装程度差。此外,本研究显示肿瘤细胞内的微丝骨架组装状态,与转移能力似呈负相关。

DNA肿瘤病毒SV40的细胞转化特性

SV40是被广泛应用于肿瘤研究的DNA肿瘤病毒。本文简述了它的一般生物学特性,根据大量研究报道着重归纳了SV40在体外转化细胞的特性及其转化机制,并展望了SV40转化蛋白在癌变机理、细胞分化等研究中的进一步应用。

人乳头状瘤病毒16在食管癌不同人群中的检出率

背景与目的中国河南省安阳地区是食管癌高发区,有研究发现人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)的感染是安阳地区食管癌的重要发病因素。本文研究HPV16型在中国北方不同地区食管癌患者中的感染率及其表达水平,以进一步明确HPV16与食管癌发病的相关性。方法用地高辛标记的HPV16E6探针做原位杂交(insituhybridization,ISH),检测河南省安阳食管癌高发区的食管癌患者(43例)、北京肿瘤医院散发食管癌患者(43例)和内蒙古自治区蒙古族食管癌患者(33例)的食管癌组织中HPV16的感染情况。结果ISH检查结果显示安阳、北京、内蒙古3个地区食管癌患者HPV16感染率分别为81.4%(35/43)、69.8%(30/43)和63.6%(21/33);安阳食管癌患者HPV16感染水平明显高于北京(H=3.91,P<0.05)和内蒙古(H=4.22,P<0.05)的食管癌患者。安阳食管癌患者中HPV16表达呈阳性、强阳性的比例明显高于北京和内蒙古食管癌患者(H=3.95,P<0.05)。结论HPV16在不同地区的食管癌患者中均有较高感染率。安阳食管癌高发区的患者感染HPV16的程度较严重。

Fas、Fas配体和IFN-γ在胃癌中的表达

目的 :研究Fas、Fas配体 (FasL)和干扰素 γ(IFN γ)在胃癌中的表达规律及可能的意义。方法 :在石蜡包埋的 5 8例胃癌组织和其中相对应的 5 3例癌旁正常组织中 ,采用免疫组化方法检测Fas、FasL蛋白的表达 ,采用原位杂交方法检测IFN γmRNA的表达。结果 :胃癌组织中胃癌细胞和癌旁组织中胃上皮细胞Fas阳性率分别为19 .0 %和 6 4 .2 % ,胃癌组阳性率明显低于癌旁组 (χ2 =2 3.4 6 ;P =0 .0 0 )。胃癌组织中胃癌细胞和癌旁组织中胃上皮细胞FasL阳性率分别为 6 3.8%和 4 5 .3% ,胃癌组阳性率明显高于癌旁组 (χ2 =3.83;P =0 .0 5 )。癌旁组织中胃上皮细胞IFN γ阳性率为 4 9.1% ,而胃癌组织中未发现一例阳性。结论 :胃癌细胞Fas -FasL系统平衡失调 ,本研究中胃癌细胞不表达IFN γ ,可能与胃上皮细胞癌变及免疫逃逸有关。

XPD基因与胃癌易感性的相关性

背景与目的:DNA修复系统的变异与肿瘤发生密切相关。本研究拟探讨XPD多态性及单倍型与胃癌易感性的关联。方法:提取华北地区207例胃癌患者及212例健康献血者外周血基因组DNA,用扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应(amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction,ARMS-PCR)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)检测codon312和codon751位点的基因型。结果:codon312基因型GA、AA病例组分布频率显著高于对照组(P<0.01,OR=3.41,95%CI:2.06～4.79;P<0.01,OR=3.47,95%CI:1.39～8.68)。codon751多态性在两组间分布差异无统计学意义(P>0.05)。在单倍型AA(codon312A-codon751A)的分析中,病例组中杂合型(-/AA)及纯合型(AA/AA)的分布频率均较对照组明显增高(P<0.01,OR=2.81,95%CI:1.82～4.34;P=0.02,OR=3.92,95%CI:1.31～11.70)。但其他三种单倍型在两组间的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论:XPD基因codon312位点多态性与胃癌易感性明显相关,而单倍型AA(codon312A-codon751A)也是胃癌发生的易感因素。

细胞系中支原体检测及分型

目的:对细胞系中支原体的感染情况进行检测并分型。方法:利用支原体 16S^23S保守区域扩增来检出细胞系中支原体感染率,并利用 16S^23S保守区间的间隔区(spacer)长度不同进行巢式PCR扩增,结合测序达到分型的目的。结果:在检测的 22株细胞系中,有 77. 3% (17株)的细胞系有支原体感染,其中 5株有 2种或 2种以上支原体感染,在分布上以M.fermentans和M.hyorhinis支原体多见。结论:支原体在细胞系中的高感染率提示,在以细胞系作为模型的研究中,对支原体感染所造成的影响应有充分认识。检测及分型技术的建立为进一步研究不同型别支原体的致病力提供了可能。

9例家族性乳腺癌患者BRCA1基因序列突变分析

目的 :研究中国汉族家族性乳腺癌 (familiarbreastcancer ,FBC)患者BRCA1的突变情况。方法 :选取中国汉族 9个乳腺癌家系中各 1例乳腺癌患者 ,1例无肿瘤家族史的正常人 ,32例散发性乳腺癌患者和 33例正常献血者。从外周血淋巴细胞中提取DNA ,经PCR扩增后 ,以变性高效液相色谱 (denaturinghighperformanceliquidchromatography ,DHPLC)初筛BRCA1所有编码外显子及部分内含子的多态性 ,对异常峰型者直接测序。 结果 :在9例家族性乳腺癌患者中 ,1例患者在外显子 11上发现一处致病性突变 (3870delTGTC) ,该突变因缺失 4个碱基导致框架移位。 1例患者发现尚未见报道的密码子 86 7单个碱基替换导致编码氨基酸的变异 (E86 7R)。 8例患者在内含子 18(IVS18+6 5 )上检出已知的G→A变异 ,变异率为 88.9% (8/ 9)。该位点变异在散发性乳腺癌和一般人群中的检出率分别为 37.5 % (12 / 32 )和 33.3% (11/ 33)。该 8例患者同时检出密码子 871已知的错义变异(P871L)与内含子 9(IVS8 5 7delT)的变异 ,且有 1例患者在此 3处的变异为纯合变异。这 8例患者的检测结果提示 ,IVS18+6 5G→A、IVS8 5 7delT与 2 731C→T这 3个位点存在连锁。该连锁情况尚未见报道。 2例患者在密码子 14 36发现已知为多态的改变 (S14 36S)。 1例患?

用限制性内切酶制备T载体

目的 :介绍一种制备T载体的方法。方法 :用限制性内切酶XcmⅠ酶切 ,在两端产生T末端 ,制备的T载体可直接用来克隆用TaqDNA聚合酶产生带A末端的PCR产物。 结果 :PCR产物直接和T载体连接 ,用常规氯化钙法制备的感受态菌转化 ,对转化子提取质粒进行酶切鉴定 ,证明阳性率达 80 %。结论 :制备T载体过程简单 ,质量稳定 ,产量高 。

胃癌细胞系Lewis抗原表达和体外诱发免疫应答反应

目的 :探讨由于幽门螺旋杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori)和人胃黏膜上皮表达相同的Lewis抗原 ,在宿主抗H .pylori的免疫应答中 ,发生自身免疫反应的可能性。 方法 :采用流式细胞术和乳酸脱氢酶 (lactatedehy drogenase,LDH)释放试验 ,在检测 3种胃癌细胞系Lewis血型抗原表达状况的基础上 ,进行体外抗原抗体结合诱发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性效应实验。结果 :KATOⅢ、80 3和 82 3细胞系均有Lewis抗原的表达 ,但各自的表型和量不同。在体外诱发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性效应中 ,除 80 3细胞系anti H .pylori和anti Leb 组外 ,其余 3种细胞系各种抗体组均有不同水平的LDH的释放。结论 :初步提示Lewis抗原抗体结合诱发自身免疫反应存在的可能性 。

河南滑县农村地区成人乙型肝炎表面抗原检出率及相关因素分析

目的：描述河南省滑县农村地区乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigens, HBsAg）流行特征并探索其危险因素，为当地乙型肝炎防控工作提供科学依据。方法：依托安阳食管癌队列研究现场，采用整群抽样选取河南省滑县5个行政村25~65岁居民作为研究对象，分别进行问卷调查及血清学检测。采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析。结果：在接受调查的5 104名（参检率92.05%）居民中，HBsAg总体检出率为5.17%，男性高于女性（6.54% vs. 3.87%，P〈0.001），且男、女性均在25~29岁及55~59岁两个年龄组出现感染高峰。此外，非在婚状态（OR=1.80, 95% CI： 1.00~3.25）及每周性交频率高（Ptrend=0.049）也是HBsAg阳性的危险因素。结论：河南省滑县农村地区成人乙型肝炎流行情况总体略低于同期全国平均水平，但25~29岁及55~59岁男性人群及性活跃人群为当地乙型肝炎感染的高危人群，应有针对性地对其开展预防接种及相关健康教育工作，从而进一步降低该人群中乙型肝炎总体流行水平。

化学致癌剂与癌基因和抑癌基因

化学致癌剂与癌基因和抑癌基因王冰，柯杨北京医科大学临床肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所细胞遗传室（北京１０００３４）目前认为，人类肿瘤的形成与多种因素有关，其中化学致癌因素最为重要。对于化学致癌机理的探讨，经历了从动物肿瘤模型的建立、离体细胞的恶性转化，...

肿瘤基因组测序研究进展

肿瘤基因组体细胞突变、遗传变异和表观遗传的改变可导致基因序列、结构、拷贝数以及表达改变,是肿瘤发生的主要原因。过去10年,人类基因组计划的完成和测序技术的飞速发展,极大地促进了肿瘤基因组测序研究,发现了大量与肿瘤相关的基因组改变。本文主要综述了近10年来肿瘤基因组测序研究的进展,包括新一代测序技术在肿瘤研究中的应用情况。