流式细胞术分析慢性髓性白血病细胞酪氨酸磷酸化水平

目的：探讨慢性髓性白血病（CML）患者骨髓细胞酪氨酸磷酸化水平（p-Tyr），探讨甲磺酸伊马替尼（商品名：格列卫）治疗对p-Tyr水平的作用和影响。方法：对38例CML患者（其中16例接受格列卫治疗）及5例健康对照者的骨髓细胞进行细胞膜CD45和细胞质内PTyr（PY99）荧光标记，应用流式细胞术（FCM）分析不同病期CML各群细胞p-Tyr水平。结果：①未经甲磺酸伊马替尼治疗的慢性期（CP）、加速期（AP）患者骨髓各群细胞p-Tyr水平高于健康对照者，而CP与AP之间p-Tyr水平差异无统计学意义；②CP患者应用甲磺酸伊马替尼治疗〉12个月者的骨髓细胞p-Tyr水平低于用药〈12个月者；AP期用药≥40个月者的幼稚细胞群p-Tyr水平亦低于用药〈12个月者；③随CML病程延长，幼稚细胞群p-Tyr水平增高，但无明显影响；年龄对p-Tyr水平无明显影响。结论：①应用FCM测定细胞p-Tyr水平可作为快速、敏感的方法检测BCR-ABL（＋）细胞；②CML各期细胞的p-Tyr水平均高于正常对照；③甲磺酸伊马替尼对慢性期白血病细胞p-Tyr水平的降低程度随用药时间延长而增强。

八色流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病微小残留病方法的建立

目的建立八色流式细胞术（8c—FCM）检测急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）微小残留病（MRD）的方法，并进行初步验证。方法采用CD19／侧向角散色光（SSC）、CD45／10和CD34（或cTdT）联合设门，两管八色抗体组合检测B—ALL的MRD。将B—ALL细胞株Nalm－6细胞掺入正常人骨髓细胞中，使Nalm--6细胞占有核细胞比例为10．00％、1．00％、0．10％、0．01％和0．005％，采用已建立的8c—FCM，进行回收试验和重复性试验，评价检测方法的准确度和精密度。检测抗体标记Nalm-6后保存不同时间的荧光强度变化，评价各荧光抗体的稳定性。检测并分析39份骨髓细胞免疫表型，包括对照者9例，初发或复发B-ALL患者9例，B—ALL化疗或骨髓移植（BMT）后缓解期病例21例，评价8c—FCM方法检测正常骨髓B淋巴系细胞群和B—ALL细胞的免疫表型结果，以及对B—ALL的MRD检测结果，并探讨其与现用四色流式细胞术（4c．FCM）的可比性。结果建立了以CD19、CIM5、CD10为主的两管八色抗体组合检测MRD的方法；当掺人的细胞株占有核细胞比例≥0．10％时，变异系数（CV）〈2．5％，平均回收率为95．81％；当获取10。个细胞，Nalm-6细胞比例10．00％-0．01％时，检测到的Nalm-6细胞占骨髓有核细胞比例与实测值呈线性相关（r=0．99，P〈0．05），该法检测骨髓中Nalm-6细胞的灵敏度达到0．01％。Nalm-6细胞株标记抗体后随时间延长略有降低，但24h内平均荧光强度减低〈10％。应用该方法检测骨髓中CD19阳性的B淋巴系细胞，对照组呈现4个连续发育阶段，可分为4期：I期CD45low／CD10stro／CD20-／CD38stro／CD34＋或eTdT＋，Ⅱ期CD45-／CD10＋／CD20-／CD38stro／CD34＋或cTdT＋，Ⅲ期CD45＋／CD10＋／CD20-／CD38stro／CD34-或cTdT-，Ⅳ期CD45stro／CD10-／CD20＋／CD38low／CD34-或cTdT-。初发和复发B-ALL患者骨髓中自血病细胞与对照组相比，均存在抗原表达异常；8e—FCM检测B—ALL缓解组，有5例存在MRD，主要抗原表达与4c—FCM检测结果一致，5例MRD细胞的范围为0．02％-5．42％。结论本研究所建立的两管8c—FCM新方法检测骨髓中自血病细胞的重复性好、准确度高，可鉴别骨髓正常B淋巴系细胞群、B—ALL治疗缓解后骨髓造血重建的B系前体细胞与MRD细胞群；和4c-FCM比较，两管8c—FCM新方法的标本用量少，检测速度快，能够有效诊断B—ALL的MRD。

原发中枢神经系统自然杀伤/T细胞脑膜淋巴瘤一例临床分析

目的 探讨原发中枢神经系统自然杀伤/T（NK/T）细胞脑膜淋巴瘤的临床特点和诊断方法.方法 报道1例原发中枢神经系统NK/T细胞脑膜淋巴瘤患者,并结合文献总结其临床特征.结果 患者青年男性,急性起病,表现为视物成双、头痛、呕吐,口角歪斜,短期内出现全身疼痛、四肢无力,腰穿白细胞和蛋白显著升高,脑脊液细胞学曙红亚甲基蓝Ⅱ和迈-格-姬染色可见大量异型淋巴细胞,核异型性明显,可见核分裂相;免疫细胞化学染色可见多数淋巴样细胞Ki-67阳性,提示为增殖活跃的淋巴瘤.脑脊液流式细胞学：97.98%的细胞表达细胞膜型CD3、CD7、CD56、CD2和CD5,部分表达CDs,免疫分型为恶性NK/T细胞;头颅MRI＋强化提示双侧三叉神经增粗,软脑膜强化,增粗的三叉神经轻度强化;骨髓检查未见异常,胸腹CT及强化未见异常.依据患者的病史、体格检查、临床检测和疾病经过,诊断为原发中枢神经系统NK/T细胞脑膜淋巴瘤.结论 原发中枢神经系统NK/T细胞脑膜淋巴瘤是罕见的中枢神经系统淋巴瘤,具有特殊的免疫分型,临床表现为恶性进展的高颅压、脑神经和脊神经受累,脑脊液细胞学和流式细胞分型对确定诊断起关键作用,放化疗效果欠佳,预后差.