动物性食品中替米考星酶联免疫检测方法的研究

通过对替米考星分子结构进行改造,制备替米考星半抗原及人工抗原,通过免疫动物得到替米考星的单克隆抗体。该抗体灵敏度为0.5μg/L,对泰乐菌素的交叉反应率小于1%。基于该抗体建立了替米考星间接竞争酶联免疫检测方法检测动物组织、肝脏、蜂蜜、鸡蛋、牛奶的检测限分别为0.5、10、1、5、5μg/kg,添加水平回收率为70%~110%,变异系数小于15%。

胶体金免疫层析法快速检测禽蛋中甲硝唑残留分析研究

应用胶体金免疫层析法快速检测禽蛋中的甲硝唑残留,研究该检测方法的灵敏度、准确性和特异性。结果显示,胶体金免疫层析试纸条肉眼判断禽蛋中甲硝唑的检出限为0.5μg/kg,假阳性率≤5%,假阴性率为0%;试纸条与其他8种硝基咪唑类药物有交叉反应,但甲硝唑的检出限最低;试纸条对实际样本的检测结果与液相色谱-质谱/质谱法基本一致。胶体金免疫层析法具有操作简单、检测速度快、成本低的优点,可用于现场大批量禽蛋样本中甲硝唑残留的初步筛选。

双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6种血清型沙门氏菌

为快速检测冷鲜肉中的沙门氏菌,筛选出1株产抗6种沙门氏菌单克隆抗体的细胞株,运用产生的抗体建立酶联免疫吸附检测方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。实验采用6种血清型致病沙门氏菌制备出混合抗原,对BALB/c小鼠及新西兰大白兔进行免疫,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备出抗沙门氏菌单克隆抗体以及多克隆抗体,并建立双抗夹心ELISA体系检测冷鲜肉中沙门氏菌。结果表明,成功筛选出1株能稳定分泌抗沙门氏菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株6E7,保藏编号为CGMCC 10313以及多克隆抗体,效价分别为1∶1.28×106和1∶8.0×105;将多抗作为包被抗体吸附于96孔酶标板上,并用辣根过氧化物酶标记单抗,建立双抗夹心ELISA体系;检测模拟污染肉样中沙门氏菌,其检测限为800 CFU/g;并与其他血清型沙门氏菌、志贺氏菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌均无交叉反应,特异性良好。

化学发光免疫分析技术在微生物检测中的应用

化学发光免疫分析技术凭借其化学发光的高灵敏性和免疫反应的高特异性在微生物快速检测中广泛应用。该文着重叙述了化学发光免疫分析技术核心检测体系在微生物检测中的研究进展,并对其涉及到的样品前处理和检测新方法进行了综述。化学发光免疫分析技术检测微生物用时短、成本低,但特异性识别方法和检测的灵敏度有待提升,新型的发光体系、发光放大方法、可替代抗体的识别分子以及相关的前处理技术是未来研究的重点。

一种多菌灵酶联免疫快速检测方法的建立

利用酶联免疫吸附法原理建立了一种能够定量测定果蔬、茶叶、烟叶中多菌灵残留量的方法。通过酸碱中和化学反应,制备多菌灵半抗原,再通过免疫小鼠筛选出抗多菌灵单克隆抗体,制得酶标羊抗鼠抗抗体,并将制备出的抗多菌灵单克隆抗体和酶标羊抗鼠抗抗体用于酶联酶联免疫试剂盒的研制。结果表明,在0.1~8.1μg/L的线性范围内,目标物多菌灵线性关系良好,相关系数(R2)可达到0.995。在300,600,1 200μg/kg 3个添加水平下试剂盒的回收率为76.0%~102.2%,相对标准偏差均小于10%。试剂盒检测烟叶、苹果、白菜、茶叶样本中的多菌灵,检测限依次为266.3,421.0,349.1,484.4μg/kg(n=20)。该方法属于快速检测方法,适用于果蔬、茶叶、烟叶中多菌灵残留量的测定。

胶体金免疫层析法定量检测烟叶中霜霉威残留

【背景和目的】利用胶体金免疫层析技术研制霜霉威定量检测试纸条,并探究其在烟叶样品中的应用。【方法】将霜霉威单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制备金标抗体,优化试纸条反应材料,构建霜霉威免疫层析定量试纸条,验证该试纸条的检出限、定量限、准确性和特异性。【结果】(1)所研制的霜霉威定量试纸条的检测范围为1.25~20 mg/kg,检出限和定量限分别为1.187 mg/kg和3.147 mg/kg;加标回收率84.7%~116.7%,相对标准偏差5.3%~10.9%。(2)可特异性识别霜霉威,对烟草中常用杀菌剂无交叉反应。(3)试纸条检测结果与高效液相色谱-串联质谱法检测结果的相对误差在4.3%~20.1%,R^(2)=0.9898。【结论】该试纸条具有操作方便、检测时间短、准确性高、特异性强的优点,可作为霜霉威残留现场检测的有效手段。

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丙溴磷

为实现蔬菜中丙溴磷的现场快速检测,采用免疫层析技术对丙溴磷残留的胶体金快速检测试纸条的制备开展研究。用胶体金颗粒标记丙溴磷单克隆抗体作为检测探针,以硝酸纤维素膜为固相载体,包被丙溴磷半抗原-卵清蛋白偶联物为检测线、羊抗鼠IgG为质控线,建立丙溴磷的胶体金快速检测试纸条。结果表明,该试纸条的检出限为0.10 mg/kg、灵敏度96%、特异性93%、假阴性率4%、假阳性率7%、相对准确度94.5%,重复性较好。胶体金试纸条操作简便、检测速度快、成本低,适用于蔬菜中丙溴磷残留的现场筛查和检测。

一种异丙威胶体金免疫快速检测试纸条的研制

农产品的农药残留检测方法较多,异丙威作为速效性农药,应用较为广泛,但是检测异丙威的快速检测方法极少。该研究通过制备异丙威半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中异丙威的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试纸条对蔬菜、水果等农产品中异丙威的最低检出限为10μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与甲草胺、亚胺菌、乙霉威和异丁草胺等药物无交叉反应,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。该试纸条检测快速、便捷,能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。

一种苯醚氰菊酯胶体金免疫快速检测试纸条的研制

通过制备苯醚氰菊酯半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中苯醚氰菊酯的胶体金免疫层析试纸条,检测限为1μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求,该试纸条能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。

一种多氯联苯胶体金免疫快速检测试纸条的研制

该研究制备了多氯联苯(PCB118)半抗原,基于该半抗原研制出一种能够检测饲料中多氯联苯的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试剂条检测限为10μg/kg,检测时间约为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与多氯联苯PCB52、PCB101、PCB28、PCB138、PCB153、PCB180等药物无交叉反应,特异性较好,12个月内稳定性指标均符合要求,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》对快速检测产品的要求,该试纸条适用于基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。

流式细胞仪在检测食品中微生物的应用研究

流式细胞仪（flow cytometer）是流式细胞术的商品化应用,它作为新型高科技仪器,已应用于临床医学、微生物学、海洋、渔业、酿酒、畜牧、体育科学、农业、林业、化工等领域,本文着重介绍了目前流式细胞仪在检测食品中微生物的应用研究。流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）是一项细胞分析技术,不仅能够快速定量分析和分选液流系统中单个细胞或其它生物微粒。

用于3种农药残留快速检测的荧光免疫芯片研发及其应用

基于时间分辨荧光免疫层析技术和生物芯片技术,研发农药残留快速检测荧光免疫芯片,并探究其在果蔬加工副产品类饲料中的应用。以时间分辨荧光微球标记单克隆抗体,在竞争抑制反应原理基础上研制荧光免疫芯片。结果表明,研制的免疫芯片对果蔬中克百威、毒死蜱、灭蝇胺的检测限分别为0.02 mg/kg、0.5 mg/kg、0.5 mg/kg,假阳性率、假阴性率均为0%;对常见的其他10种农药无交叉反应。本研究开发的免疫芯片具有操作简便、检测速度快、准确性高等优点,适用于基层实验室的大批量样本检测及现场快速检测。农药的广泛应用会不可避免地残留在饲料中,致使其进入动物体内,降低动物的生长性能,严重者可危害动物健康甚至导致动物死亡,且残留在动物产品中的农药危害人类健康。

一种滴滴涕胶体金免疫快速检测试纸条的研制

本文通过制备滴滴涕半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果、饲料、牛奶中滴滴涕的胶体金免疫层析试纸条,检测限为5μg/kg,检测时间为15min,假阳性率和假阴性率均为零,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。同时,该试纸条可用于基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义,且未见免疫方法相关文献报道,具有创新性。

一种甲氨基阿维菌素胶体金免疫快速检测试纸条的研制

本文通过制备甲氨基阿维菌素半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中甲氨基阿维菌素的胶体金免疫层析试纸条,检测限为5μg/kg,检测时间为15min,假阳性率和假阴性率均为零,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。此外,该试纸条适用于基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义,且未见免疫方法相关文献报道,故具有创新性。

一种杂色曲霉素胶体金免疫快速检测试纸条的研制

通过制备杂色曲霉素半抗原,研制出一种能够检测饲料中杂色曲霉素的胶体金免疫层析试纸条,检测限为1μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。试纸条能够在基层实验室的大批量样本检测中得到应用,具有实际意义,并且未见胶体金免疫层析法的相关文献报道,具有创新性。

快速检测生鲜肉中三种食源性致病菌

为同时快速检测生鲜肉中鼠伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌和福氏志贺氏菌3种食源性致病菌,降低检测成本,制备了特异性单克隆抗体和多克隆抗体,研制出能够同时检测以上3种致病菌的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,本试验成功筛选出3株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2E3、2E7和2E8,3种单克隆抗体效价均在128×10^6以上,3种多克隆抗体效价均在200×10^6以上。制备的胶体金免疫层析试纸条对鼠伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌和福氏志贺氏菌3种食源性致病菌的特异性良好,灵敏度均为1×10^4CFU/g。

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法。[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应，得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原，再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体，并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒。[结果]试验表明，该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2．34μg／kg，IC50（50％抑制浓度）为4．8μg／L，回收率为60．5％～79．7％，试剂盒的标准曲线范围为0～80μg／L，批内、批间的相对标准偏差均小于10％，三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1％，4℃下能够保存12个月，稳定性较好。[结论]研究可为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考。

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究（英文）

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法。[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应，得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原，再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶的单克隆抗体，并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒。[结果]该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34μg／kg，IC50（50％抑制浓度）为4．8μg／L，回收率为60．5％～79．7％，试剂盒的标准曲线范围为0～80μg/L，批内、批间的相对标准偏差均小于10％。三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1％。4℃下能够保存12个月，稳定性较好。[结论]研究结果为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考依据。

五氯酚钠胶体金快速检测试纸条的研制

[目的]研制五氯酚钠胶体金快速检测试纸条。[方法]利用胶体金免疫层析技术,研制一种快速检测猪肉、鸡肉、鱼、虾、水质中五氯酚钠的试纸条。[结果]经测试,该试纸条对猪肉、鸡肉、鱼、虾的检测限为1μg/kg,对水质的检测限为2μg/kg,检测时间为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。[结论]该方法准确、可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。

蔬菜、茶叶中克百威酶联免疫检测方法的建立

为建立快速检测蔬菜、茶叶中克百威残留的酶联免疫方法,合成克百威半抗原,并与载体蛋白偶联合成人工抗原,然后免疫制备其单克隆抗体,在筛选克百威单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线为y=-2.054x+0.667 3,相关系数(r)为0.998 5,半数抑制浓度(IC_(50))为2.3μg/L,对蔬菜、茶叶样本的检测限分别为10、5μg/kg,加标回收率为79.2%~102.7%,样本重复检测的变异系数为5.5%~11.5%。结果表明,建立的酶联免疫检测方法具有较好的特异性、准确性和重复稳定性,可用于蔬菜、茶叶中克百威残留的检测。