盐效应对DNA大分子构象的影响

用CD光谱监测了Micrococcus luteus DNA在不同MgCl_2浓度下[θ]值的变化,发现随着MgCl_2浓度的增加,在275nm处其[θ]值减少;而在220—250nm处,其负[θ]值加大.这个结果表明DNA大分子在空间上趋于缩拢.在同样条件下也用紫外光谱进行了监测,发现随着MgCl_2浓度的增加,在260nm处有明显的减色效应出现,这便又进一步印证了上述结果.而又用Batch-2107微量热计进行了热力学上的研究,结果表明在上述条件下,随着DNA大分子在空间上缩拢程度的加大,则伴有较高的释热值.这便从热力学的角度进一步佐证了这样的结果:随着MgCl_2浓度的增加,使溶液中的DNA大分子在空间上产生明显的缩拢现象.同时,所有上述测定结果都一致表明:这种DNA大分子构象变化过程是时间依赖的,约持续10分钟.

人血红细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTPP）的研究Ⅰ·PTPP在红细胞胞浆和膜中的分布及其影响因素

通过测定红细胞胞浆及膜中的ＰＴＰＰ活性，发现人正常血红细胞中胞浆ＰＴＰＰ活性约占红细胞ＰＴＰＰ总活性的７０－８０％，膜中只有约２０－３０％的ＰＴＰＰ活性。很多因素诸如：病变、ＰＨ值、温度、离子强度、细胞贮存时间以及药物等，对ＰＴＰＰ在胞浆与膜中的分布有影响。可以推测：膜上的ＰＴＰＰ能通过某种机制解离下来，进入胞浆；相反的过程，胞浆中的ＰＴＰＰ也能通过某种机制与膜结合。这种偶联与去偶联的具体机制及其生理功能还有待进一步探索。

人血红细胞酪氨酸蛋白磷酸酶（PTPP）的研究Ⅱ·胞浆PTPP的分离纯化及其主要性质

人血红细胞胞浆部分经（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ５２）柱层析，磷酸纤维素柱层析（Ｐ１１）得到部分纯化的ＰＴＰＰ，产率：５．７％，提纯１０７５倍。以（３２）￣Ｐ－Ｔｙｒ－Ｐｏｌｙ（Ｇ_４：Ｔ）作底物，测得其表征Ｋｍ约为０．５－０．８μｍｏｌ／Ｌ，该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为７．０－７．８及３７－４０℃。Ｚｎ￣（２＋）等二价金属离子及Ｎａ_３ＶＯ_４等酸根基团对其活性有明显的抑制作用；ＥＤＴＡ、甘油及ＤＴＴ、巯基乙醇等则对其有强烈激活作用；而氟化物、酒石酸等对ＰＴＰＰ活性基本无影响。此外，某些蛋白质、氨基酸、核苷酸及抗肿瘤药物等对ＰＴＰＰ活性也都有不同程度的影响。特别是一些ＰＫｓ及ＰＰｓ在体外对ＰＴＰＰ活性也具有不同的作用。

尼龙网固定化果胶酶的制备及其性质研究

用尼龙网作载体,经3-二甲氨基丙胺活化,用戊二醛将果胶酶固定化。所得固定化酶Km值与自然酶接近;对温度的稳定性有较大的提高,100℃保温30min才能使其失活。固定化酶在较宽的pH范围内能保持其正常活力,它对金属离子抑制剂的耐受性有较显著的提高,用0.5％果胶溶液作底物,重复使用10次后酶活力保留44％。固定化果胶酶与自然酶相比较,对不同果汁的澄清效果不同。固定化果胶酶在无保护剂存在的条件下,室温放置四个月活力不减少。

人血红细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTPP）的研究──Ⅲ．胞浆PTPP与红细胞膜的结合及其结合后的主要性质

用部分纯化的胞浆ＰＴＰＰ分别与去ＰＴＰＰ活性的红细胞血影（ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ）和内向外翻红细胞膜（ｄＰＴＰＰ－ＩＯＶ）结合，结果发现：胞浆ＰＴＰＰ不仅能与红细胞膜结合，而且与ｄＰＴＰＰ－ＩＯＶ的结合能力强于与ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ的结合。很多因素，诸如：温度，ｐＨ，离子强度，结合时间及某些试剂等不仅对ＰＴＰＰ与膜的结合有影响，且对ＰＴＰＰ与ｄＰＴＰＰ－１０Ｖ结合的影响比与ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ结合的影响更为显著。当胞浆ＰＴＰＰ与红细胞膜结合后，其性质发生变化，这主要表现在稳定性增强；Ｋｍ减小；Ｚｎ￣（２＋）、ＶＯ等的抑制作用及ＥＤＴＡ、甘油等的激活作用都明显减弱，甚至向相反的作用转化。此外，红细胞膜的磷酸化／脱磷酸化对ＰＴＰＰ的结合有影响，这暗示磷醚化作用对此可能具有调节意义。

钙调神经磷酸酶及其二亚基免疫性质和功能的研究

钙调神经磷酸酶(Calcineurin, CaN)是目前所知唯一活性受钙、钙调素调控的磷蛋白磷酸酶。其含量占脑内蛋白总量的1％,必定有其重要的生理意义,但至今为止,它的生理功能仍很不清楚。本文试图用免疫学方法,对CaN的生理功能进行初步探索。

大鼠出生后脑内钙调神经磷酸酶的研究

本文用BA-ELISA.immunoblotting及酶活力测定等方法,研究了大鼠脑中钙调神经磷酸酶在大鼠出生后的变化情况。结果表明,钙调神经磷酸酶的含量在大鼠出生后第二周和第三周显著增加,其活力也在出生后第二周达到顶峰。钙调神经磷酸酶这种有规律的变化与脑中突触形成在时间上是一致的,暗示钙调神经磷酸酶可能参与突触功能的调节。

蛋白质磷酸化和脱磷酸化对DNA拓扑异构酶Ⅰ活力调节的研究

本文以小鼠正常肝和H_(22a)腹水型肝癌细胞为材料,从中分离出纯度较高的拓扑异构酶Ⅰ和细胞质酪氨酸蛋白激酶(TPK)来研究磷酸化和脱磷酸化对拓扑异构酶Ⅰ活力的调节。结果表明TPK能活化拓扑异构酶Ⅰ。另外还发现PKA和碱性磷酸酶(CIP)能分别活化和抑制拓扑异构酶Ⅰ。

小鼠正常肝、再生肝和腹水型肝癌H22a细胞酪氨酸蛋白磷酸酶的比较研究

小鼠肝在再生过程中,胞浆酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)活力比正常肝有明显升高,并且伴有时相变化,,手术后24—48h活力达到最高,而H22a细胞各组分的活力都比正常肝低。PTPP在正常肝细胞的溶酶体中分布最高;再生肝中则在细胞核、胞浆和微粒体中更集中;在H22a细胞中,PTPP的活力分布趋于平均化。再生肝和H22a细胞胞浆中都缺少正常肝的a、b两个PTPP活力峰,其它五个主要PTPP峰与正常肝无根本的差别。

缺血与正常小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的比较研究

以小鼠断头脑缺血为模型，研究缺血小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的改变。对缺血１ｍｉｎ、５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ及对照小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的研究表明，有些磷蛋白如１４５ｋＤ、８４ｋＤ、５９ｋＤ和５０ｋＤ的磷酸化随缺血时间延长而减弱，还有些磷蛋白如１１９ｋＤ、１０５ｋＤ、７８ｋＤ和５５ｋＤ的磷酸化随缺血时间延长而增加。对磷酸化程度变化显著的缺血１５ｍｉｎ小鼠脑内胞浆及膜上ＰＫＡ、ＰＫＣ、Ｃａ^（２＋）／ＣａＭＰＫ底物的磷酸化进行了研究，发现胞浆组分中与钙相关的ＰＫＣ、Ｃａ^（２＋）／ＣａＭＰＫ底物磷酸化在缺血鼠脑中明显减弱。同时研究了脑内唯一依赖于Ｃａ^（２＋）／ＣａＭ的钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ，ＣａＮ）底物的变化，发现缺血小鼠脑内ＣａＮ的某些底物磷酸化降低。

小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶的纯化和性质研究

以^(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr(4:1)为底物,用于研究小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)的分离纯化和性质。再生肝胞浆经60％饱和度硫酸铵盐析,二次DEAE纤维素层析,Sephadex G-200柱层析和Poly Glu,Tyr-Sepha-rose 4B亲和层析后,得到的PTPP分子量为67000,纯度提高1123倍,活性回收率为28％,对^(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr有很高的活力,对^(32)P(Ser/Thr)-Casein(酪蛋白)和PNPP(对硝基苯酚磷酸盐)没有作用,其最适pH为6.8～7.1,对热不稳定。EDTA对酶有激活作用,Zn^(2+)、PNPP、P-Tyr、多胺化合物、焦磷酸根、钼酸根、柠檬酸根对酶有明显的抑制作用。酶对Na_3VO_4不敏感。碱性蛋白质组蛋白、鱼精蛋白对酶活力有抑制作用,酸性蛋白质酪蛋白和酸性多糖物质肝素对酶活力有激活作用,且后者能减弱前者的抑制作用。

蛋白质酪氨酸脱磷酸化和信号传导

蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTPP)能特异地催化蛋白质酪氨酸残基的脱磷酸化反应.它是一个由很多结构相关的酶组成的家族.比较氨基酸的序列发现 PTPP-1B和跨膜蛋白 CD45 的胞内区有结构相似性.现已证明 CD45 确实具有内在 PTPP活性.通过研究 CD45 在淋巴 T 细胞中的功能,揭示了一个新的信号传导机制.蛋白质酪氨酸残基的脱磷酸化在这一信号传导途径中起着关键性作用.

一种同时纯化钙谓神经磷酸酶和钙调素的有效方法

本文报导了一种能同时纯化钙调神经磷酸酶和钙调素的有效方法。牛脑粗提液经DE-52纤维素层析分段洗脱:0.5mol/L NaCl缓冲液洗脱峰经phenyl-sepharose亲和柱和G75 sephadex制得电泳纯钙调素。0.18mol/L KCl缓冲液洗脱峰经Affigel-Blue层析,硫酸铵盐析,钙调素亲和层析,G-200 Sephadex凝胶过滤制得电泳纯钙调神经磷酸酶。

钙调神经磷酸酶在胍变性过程中活力及构象变化的比较

钙调神经磷酸酶（ＣａＮ）在盐酸胍溶液中的内源荧光、远紫外ＣＤ谱及剩余活力的变化提示：ＣａＮ的酶活力在胍浓度为０．５ｍｏｌ／Ｌ左右可完全丧失，同时伴有内源荧光强度的下降，３３３ｎｍ最大发射峰的红移（提示了色氨酸和酪氨酸残基的暴露）。比较不同胍浓度下牛脑ＣａＮ的失活与整体构象变化，表明酶的失活先于整体构象变化。在０．６ｍｏｌ／Ｌ胍溶液中，内源荧光变化的动力学过程只能测出一相，而酶失活的动力学过程为快、慢两相，快相动力学速度常数比整体构象变化速度常数大１－２个数量级，慢相失活速度常数与整体构象变化速度常数相近。提示低浓度胍可引起该酶的完全失活，活性部位的空间构象比整个酶分子的构象更易受到变性剂的扰乱。

HL－60细胞诱导分化过程中TPK和PTPP活力的时空改变

对ＲＡ、ＨＨＴ和ＷＰ_（８５２）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中胞浆和膜溶脱部分中的ＴＰＫ和ＰＴＰＰ活力变化进行了研究．结果表明，在诱导早期，ＴＰＫ的活力就有明显的波动变化；随着诱导时间的延长，胞浆部分ＴＰＫ活力下降，膜溶脱部分的ＴＰＫ活力则升高．诱导后，胞浆部分和膜溶脱部分的ＰＴＰＰ活力均明显升高。与ＴＰＫ活力变化相比较，ＰＴＰＰ变化幅度比ＴＰＫ的大。

两种分化诱导剂对HL－60细胞诱导分化过程中酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响

研究了两种诱导分化剂星状孢子素（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）及金雀异黄素（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）在诱导人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０细胞）的过程中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）及酪氨酸蛋白磷酸酶（ＰＴＰＰ）的活力变化。结果表明，两种分化诱导剂对胞浆及膜两部分的ＴＰＫ活力均有不同程度的抑制，而对这两部分的ＰＴＰＰ活力则有不同程度的激活作用，说明分化诱导剂可使ＨＬ－６０细胞内的酪氨酸的磷酸化水平提高，揭示了诱导分化与酪氨酸磷酸化及脱磷酸化之间的关系，为寻找新的抗癌药物提供了帮助。

几种药物对HL-60细胞的诱导分化作用及其过程中蛋白激酶C活力分布的变化

本文就HHT、RA、WB_(852)对HL-60细胞的诱导分化作用及此过程中PKC活力在细胞胞浆部分及膜溶脱部分的变化进行研究。结果表明,在适当的用药浓度下,从细胞生长抑制情况、形态学观察及NBT还原能力测定判断,三种药物对HL-60细胞有明显的诱导分化作用。PKC活力分布变化的研究结果表明,用药组细胞胞浆部分酶活力有不同程度的下降,尤在用药早期(约6h以前)下降显著;而膜部分PKC活力则表现上升、或下降,或活力相差不大的结果。暗示在信息传递过程中起核心作用的PKC对不同的胞外刺激可能采取不同的应答方式。PKC的作用可能主要发生在信息传递的早期。

酪氨酸蛋白磷酸酶

本文介绍了酪氨酸蛋白磷酸酶的研究现状。对各种组织中纯化的多种酪氨酸蛋白磷酸酶的性质研究,发现在大多数组织和细胞中存在多种形式的该酶,它们可分成三大类,但各种形式的酶之间的相互关系尚不清楚。酪氨酸蛋白磷酸酶在细胞的生长、分化、转化及信号传递过程中可能起重要作用。

维甲酸与星状孢子素联合分化诱导HL-60细胞过程中酪氨酸蛋白质磷酸化系统的变化

以人早幼粒白血病细胞株（HL-60）为材料，对维甲酸与星状孢子素联合诱导HL-60细胞过程中胞浆和膜部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了研究．结果表明，诱导后2～24h范围内，TPK活力出现波动，随时间延长（24～27h），胞浆部分TPK活力下降，膜溶脱部分TPK活力上升；PTPP活力明显升高且上升幅度比TPK大得多．利用抗P-tyr-BSA抗体分析底物含量变化的结果与相应时相的TPK和PTPP活力变化趋势一致．

钙调神经磷酸酶

钙调神经磷酸酶是70年代末80年代初发现的一种直接依赖于钙和钙调素的磷蛋白磷酸酶。它大量存在于脑内,分子量80k,由催化亚基A和调节亚基B1:1组成。钙调神经磷酸酶是个多底物的磷蛋白磷酸酶,它的活性还受Mn^(2+),Ni^(2+)等多种金属离子的调节。