钠抗镉对水生物毒性及吸收动力学的研究

测定Cd以及Cd在NaCl存在时对水蚯蚓（T.Tubifex）的毒性,并用^(109)Cd^(2+)标记测定水蚯蚓对Cd^(2+)吸收速度。实验发现随着Na^+变化Cd半致死量LC_(50)也发生变化,当Na^+浓度增加到8.0×10^(-2)mol·L^(-1)时,在48h时,毒性下降了21倍;在低于1.0×10^(-3)mol·L^(-1)NaCl时,水蚯蚓对Cd^(2+)吸收速度没有明显的变化,可当NaCl浓度大于1.0×10^(-2)mol·L(-1)时有明显下降（P<0.05）。用Lineweave-Burk法处理实验数据得到最大吸收速度V_max和米氏常数K_m,当Na^+提高时V_max基本保持为常数(5.5-7.5)×10^(-7)mol·g^(-1)·h^(-1),而K_m成倍增加,这表明Cd^（2+）和Na^+竞争相同的转移通道进入动物体内,从而导致影响Cd对水蚯蚓的毒性。

黄桂颗粒的质量标准研究

目的建立黄桂颗粒的质量标准。方法采用TLC对芍药苷、桂皮醛进行鉴别,采用HPLC测定黄芪甲苷的含量。结果薄层色谱鉴别分离度好,专属性强;黄芪甲苷对照品在125～1000ng呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.9%,RSD为1.37%。结论该法简单方便、准确,重现性好,可用于黄桂颗粒的质量控制。

用基于重组抗原的捕获酶联免疫试验检测HIV-1新发感染

目的探讨基于重组抗原的捕获酶联免疫试验(RCEIA)检测HIV-1新发感染的可行性。方法使用来自队列研究的HIV-1抗体阳转系列样品,包括来自40名HIV-1感染者的140份血浆样品,用RCEIA试验检测,获得吸光度(OD)值和标准化吸光度(ODn)值。作折线图观察ODn值与阳转时间的关系;用SPSS 22.0软件作ROC曲线,获得RCEIA试验的临界值(cutoff值)与平均新发感染期(MDRI);作散点图比较RCEIA试验与BED HIV-1捕获酶联免疫试验(BED试验)检测结果的相关性。结果14板RCEIA试验的检测结果显示,校准品和3份阳性对照OD值的变异系数为7.0%~8.9%,阳性对照ODn值的变异系数为3.1%~7.7%。针对HIV-1阳转系列样品,反映特异性IgG占总IgG比例的RCEIA试验的ODn值随阳转时间的推移呈上升趋势,但存在个体差异。初步得到RCEIA试验的最佳cutoff值为0.8,平均新发感染期为197天,假新发感染比例与BED试验的差异无统计学意义(P=1.000)。RCEIA试验与BED试验检测结果ODn值的相关性较好(r=0.907)。结论基于重组抗原的RCEIA操作稳定性好,可以在群体水平区分HIV-1新发感染与长期感染,其最佳cutoff值及用于HIV-1新发感染率估算的技术参数(平均新发感染期和假新发感染率)有待通过增加样品量进一步测算。

HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验重组抗原的研究

目的构建、表达1型艾滋病病毒(HIV-1)重组蛋白,并尝试用于HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验。方法设计、合成1种HIV-1重组蛋白(编号HIV-Ag-R03)的核酸序列,将它与pET30a-trx载体骨架连接、构建重组质粒。将重组质粒转化BL21(DE3)细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导表达蛋白质。用重组蛋白包被酶标板,检测48份血浆样品(其中HIV-1抗体阳性、HIV阴性各24份),分析蛋白质的抗原性。将HIV-Ag-R03标记辣根过氧化物酶(HRP)后,取代BED捕获酶联免疫试验(BED CEIA)试剂盒中的BED肽及后续组分,比较2种方法检测18份HIV-1阳性样品的结果相关性。结果成功构建了HIV-Ag-R03的重组质粒,核酸序列确认无误。获得了包涵体表达的蛋白质,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析大小与预测值一致。使用包被HIV-Ag-R03的间接酶联免疫试验检测48份1∶101稀释血浆样品,结果HIV-1抗体阳性样品的吸光度(OD)值(1.513±0.991)显著高于HIV阴性样品的OD值(0.022±0.008),差异有统计学意义(t=7.336,P<0.01)。用HIV-Ag-R03-HRP取代BED CEIA试剂盒中的BED肽及后续组分,调试HIV-Ag-R03-HRP的最佳稀释度为1∶2 500,18份HIV-1阳性样品的检测结果ODn值与BED CEIA的ODn值相关性好(r=0.939,P<0.01)。结论获得了1种具有抗原性的重组蛋白并成功标记HRP,建立了检测HIV-1新发感染的新模式。