不同免疫增强剂对杆状病毒表达猪圆环病毒2型Cap蛋白免疫效果的影响

为了研究不同免疫增强剂对猪圆环病毒2型衣壳蛋白(PCV2-Cap)免疫效果的影响,本研究将BALB/c小鼠随机分为10组,分别为非免疫对照组(Control组),Cap蛋白免疫对照组(Cap组),佐剂疫苗免疫对照组(15A组),以及佐剂组(IL-2组、Poly I:C组、R848组、QuilA组、QS21组、MPLA组)、商品疫苗免疫对照组(Con-V组),选择6种不同的免疫增强剂(IL-2、PolyI:C、R848、Quil-A、QS21、MPLA)分别与等量PCV2-Cap蛋白(15μg/只)混合制备疫苗,免疫BALB/c小鼠,免疫后定期采血,采用相应试剂盒检测PCV2抗体和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12水平;免疫28 d,对所有小鼠以0.5 mL/只剂量腹腔注射PCV2 SX-07株(1×106.0TCID50/mL),攻毒后21 d采集全血,利用PCR方法检测PCV2病毒血症。结果显示,各佐剂疫苗免疫后对小鼠存在短暂的刺激,但能快速恢复正常,对小鼠安全性优于对照商品疫苗;抗体检测结果显示,首免后21 d,IL-2组、QuilA组和MPLA组小鼠抗体水平高于其他佐剂组,IL-2组、QuilA组均高于Cap组和15A组,且差异极显著(P<0.05),IL-2组、QuilA组和MPLA组高于Con-V组,但差异不显著(P>0.05);首免后28 d抗体检测结果显示,IL-2组、QuilA组、QS21组和MPLA组小鼠抗体水平高于Con-V组,但差异不显著(P>0.05),且所有佐剂组和Con-V组均高于Cap组,且差异均显著(P<0.05);细胞因子检测结果显示,MPLA组小鼠的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12等各细胞因子表达水平均显著高于其他组(P<0.05);QS21组TNF-α的表达水平最高;MPLA、QS21、IL-2、R848诱导小鼠特异性细胞免疫的能力高于商品佐剂和商品疫苗;病毒血症检测结果显示,Control组中小鼠PCV2攻毒后均为PCV2病毒血症阳性,Cap蛋白组中33.3%小鼠为阳性,15A组中16.7%为阳性,其他组均为阴性。综合以上研究结果首次表明,在6种选用的增强剂中,MPLA、IL-2和QS21既能够提高PCV2 Cap蛋白疫苗免疫后机体的抗体水平,又能显著提高免疫后的细胞免疫应答水平,为PCV2亚单位疫苗的新型佐剂后期开发和应用奠定实验基础。

猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值竞争ELISA检测方法的建立

为了建立猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值竞争ELISA检测方法,试验以猪肺炎支原体全菌体为包被抗原,以抗猪肺炎支原体高免血清为检测抗体,建立猪肺炎支原体竞争ELISA抗原检测方法,并验证方法的灵敏度、特异性,再根据量反应平行线测定法原理建立猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值检测方法,并考察方法的批内和批间重复性。结果表明:建立了猪肺炎支原体竞争ELISA反应体系,包被抗原浓度为32μg/mL,阳性血清稀释度为1∶25 000,阴性血清稀释度为1∶320;封闭液为5%脱脂奶粉,封闭时间为1.5 h;酶标二抗稀释度为1∶20 000,作用时间为1.5 h;TMB显色时间为室温15 min;试验成立条件为阳性血清OD;值0.7~2.0,阴性血清OD;值<0.3;该方法线性相关系数为0.995 5,线性范围为10~1 280μg/mL,与猪细小病毒、猪流感病毒、猪鼻支原体等8种异源蛋白无交叉反应。在猪肺炎支原体竞争ELISA抗原检测体系的基础上成功建立了灭活疫苗相对效力值检测方法,该法的批内变异系数<5%,批间变异系数<10%;该方法检测的相对效力值与动物免疫攻毒保护试验结果呈正相关。说明本试验所建立的猪肺炎支原体灭活疫苗相对效力值竞争ELISA检测方法可以用于测定猪肺炎支原体灭活疫苗免疫效力,替代动物试验检测。