降低木质素、提高抗逆性的无标记植物表达载体的构建

采用高保真酶用PCR方法从pMD18-BADH载体上扩增出目的基因BADH,替换pBI121质粒中的gus基因,构建pBI121-BADH植物表达载体。经过2对引物检测,证明pBI121-BADH载体构建正确。又从pBI121-BADH质粒中扩增出35s-BADH-nos片段,所用引物加上了Nhe I和Cla I接头,扩增片段经回收后插入到pUCm-T载体中测序。测序表明,所扩增的35s-BADH-nos片段与模版同源性为100%。将测序正确的质粒pUCm-35s-BADH-nos用Nhe I和Cla I酶切后连接到进行了相同酶切的pBI121-xylA载体上,用35s-BADH-nos片段取代pBI121-xylA载体上的npt II基因片段,构建pBI121-xylA-BADH双元植物表达载体,该载体经PCR检测和酶切检测,与预期结果相同。最后,用Pme I、Cla I从pBI121-xylA-BADH上切出片段35s-BADH-nos,将其连接到进行了相同酶切的pt4CL1-p载体上,使35s-BADH-nos片段取代pt4CL1-p载体上的npt II基因片段,构建了无选择标记的反义4CL-BADH植物双元表达载体。