胡枝子属ISSR-PCR反应体系的建立与优化

在利用ISSR技术对胡枝子属种质资源遗传多样性进行研究的实验过程中,对影响PCR扩增效果的一些因素如DNA的提取、模板DNA质量浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等指标进行筛选和优化,筛选优化出可用于胡枝子属ISSR-PCR分析较适宜的PCR反应条件:Taq酶1.0 U,2μL的10×Buffer(200 mM Tris-HC l;200 mM KC l;100 mM(NH4)2SO4;15 mM MgC l2),模板DNA 40 ng,dNTP 0.2 m mol/L,引物0.2μmol/L.

沙冬青根瘤菌的抗逆性

沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）是西北荒漠地区珍稀常绿阔叶灌木，综合沙冬青分布区内气候、土壤和水分等因子，选取宁夏中卫县沙坡头、内蒙古磴口县、内蒙古阿拉善左旗、内蒙古乌拉特后旗作为样区，于2004年4月中下旬沙冬青的花期调查和收集根瘤，并结合地理环境对分离得到的根瘤菌进行抗逆性初步分析。调查发现根瘤的生成及其在宿主植物上的着生部位、大小、形状、颜色等因生境条件的不同而有所差异，水分是其主要的影响因子；分离得到根瘤菌17株，对其耐盐性、耐酸碱性、生长温度范围和抗生素抗性进行了研究。结果表明，64．7％的菌株可以在含3％NaCl的YMA培养基上生长；94.1％的菌株可以在pH5～11的范围内生长；全部菌株在60℃处理10min后仍能生长；不同菌株对不同抗生素表现出不同的抗性，ZW4和WH4^1对各抗生素表现出较强的抗性。分离自磴口县的根瘤菌普遍表现出较强的抗酸碱和抗高温的能力，这是对其环境的适应。本研究证明沙冬青根瘤菌具有较强的抗逆性，但菌株间存在差异，这可能是对沙冬青分布区多种景观生态类型的适应。同时测定了几种伴生植物中间锦鸡儿（Caragana intermedia）、猫头刺（Oxytropis aciphylla）和柠条（Caragana corshinskii）根瘤菌的抗逆性，与沙冬青根瘤菌表现出一定的相似性，具较强的抗逆性，说明生态环境对豆科植物。根瘤菌共生体有重要的影响。沙冬青的高抗性可能与沙冬青根瘤菌的高抗性有关。沙冬青与其根瘤菌的共生关系有利于其植物群落的发育和多样性的维系。

9种胡枝子亲缘关系的ISSR分析

利用ISSR-PCR方法对9种胡枝子的种间变异进行了研究,从60条引物中筛选出12条能扩增出清晰带型并具多态性的引物,共扩增出202个DNA片段,其中198个片段呈现多态性,占总扩增片段的98%。依据扩增结果进行遗传距离分析,构建了系统树。结果表明:9种胡枝子可以聚为4类,与形态学分类结果并不完全一致。