海藻糖-6-磷酸合成酶转基因烟草提高耐盐性的研究

海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-pho sphate synthase,TPS)是海藻糖合成途径中的一个关键酶,近些年来受到广泛关注,以往的研究多数集中于细菌和真菌等,而对植物体内TPS基因的研究较少。为此,我们首先通过RT-PCR(reverse tran-scription PCR)克隆得到了拟南芥的TPS基因,进而将其构建到原核高效表达载体pET30a(+)上并在大肠杆菌BL21中进行高效诱导表达。在确认该基因能够在体外正常表达之后,将其构建到植物表达载体上并转入烟草体内,通过实时荧光定量PCR检测,证明在转基因个体中目的基因已经在受体基因组上完成整合,并且在其中的2个个体中实现了正常转录。在对目标个体进行海藻糖含量的测定以及抗逆性实验后发现,S5个体具有良好的表现,其体内海藻糖的含量明显高于其它个体,并具有较强的耐受盐胁迫的能力。

分析植物组织中海藻糖的气质联用及毛细管气相色谱法

介绍一种用1-甲基咪唑为溶剂和催化剂、盐酸羟胺和乙酸酐为肟化和乙酰化试剂,对植物样品中海藻糖等糖类物质进行乙酰化衍生化后的气相色谱分离、质谱鉴定的分析方法。以核糖醇为内标,通过校准曲线对植物组织中的海藻糖进行定量分析。此法测定海藻糖的最低量可达8.17?0-11 g,适于植物样品中微量海藻糖的分析测定。

毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测

为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性，构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1．经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白，SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60kD，与预测值一致．对毛白杨4CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化，确定IPTG的最佳浓度为0．4mmol／L，诱导时的菌液密度OD600为0．3-0．5，最佳表达时间为2h．37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在，没有生物学活性．当表达温度从37℃降低为28℃时，可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功，表达量达11％．以耦联有Ni^2＋-NTA的琼脂糖为亲和层析填料，金属鳌合亲和柱层析一步纯化获得了电泳纯4CL1蛋白，4CL1蛋白对5种底物的比活性分别为：4-香豆酸3949．0pkat／mg，咖啡酸2214．0pkat／mg，阿魏酸715．0pkat／mg，肉桂酸84．9pkat／mg，而对芥子酸没有生物活性．

拟南芥海藻糖酶基因克隆及其在大肠杆菌中高效表达与功能研究

从拟南芥幼苗中提取RNA,通过RT-PCR克隆得到海藻糖酶基因后,将其构建到原核高效表达载体pET30a(+)上并在大肠杆菌BL21菌株中进行高效诱导表达,继而对纯化得到的海藻糖酶蛋白进行活性检测和酶学特性研究。实验结果表明,植物源的海藻糖酶基因在异体大肠杆菌中能够高效表达,纯化获得的海藻糖酶蛋白在试管条件下具有较高的海藻糖水解活性,其活性最适温度为45℃。通过GC-MS分离检测,可以明显地看到酶反应过程中底物海藻糖和产物葡萄糖的含量随反应时间变化的消长关系,这充分证明克隆基因在大肠杆菌中的表达产物具有海藻糖酶的功能。

茉莉酸在胡杨细胞耐盐性中的作用

以胡杨悬浮培养细胞为材料 ,研究茉莉酸在细胞抗盐性中的作用 .经 10 0mmol LNaCl处理 3d ,部分胡杨细胞发生质壁分离 .NaCl处理的同时加入 10 - 3mg L茉莉酸 (jasmonicacid ,JA)处理 3d ,罕有细胞发生质壁分离 ,说明JA在一定程度上可以缓解NaCl对胡杨细胞造成的渗透胁迫 .经 10 - 3mg LJA和 10 0mmol LNaCl分别处理培养 ,两处理悬浮培养的细胞内的可溶性蛋白发生了明显变化 .JA处理诱导出 6 0 ,4 0 ,30 ,2 6和 2 4kD蛋白 ,NaCl处理诱导出分子量约为88,6 8,6 0 ,5 0和 33kD蛋白表达量增加 .二者均诱导出了 6 0kD蛋白 ,此蛋白的出现可能与胡杨细胞渗透胁迫有关 .

一种快速简便的盐酸浸提植物样品中多种元素的方法

研究了盐酸浸提法浸提植物样品中多种元素的前处理条件。在不同浸提时间、不同温度、振荡和静置条件下,用盐酸浸提法对胡杨[Populus Euphratica(Oliv.)]愈伤组织粉末样品进行处理,用全谱直读ICP发射光谱仪测定了样品中6种元素(K,Na,Ca,Mg,P,Fe)的含量。结果显示,不同温度和是否振荡对结果几乎没有影响,浸提1 h就可以将样品中的K、Ca、Mg、P、Fe元素浸提出来。但Na浸提不完全,原因需进一步探讨。