用多位点序列分析技术鉴定9株产高光学纯度D-乳酸野生菌株

目的对从某发酵食品中分离纯化出的9株产高光学纯度D-乳酸的野生菌株(SZD菌株)进行鉴定。方法先结合表型特征及16SrRNA基因序列分析将SZD菌株鉴定到种的水平,再通过综合分析hsp60、pheS、rpoA及tuf基因的多位点序列分析(MLSA)技术将其鉴定到亚种的水平。结果 SZD菌株的16SrRNA基因序列与棒状乳杆菌扭曲亚种及棒状亚种相应序列的相似率均达99.9%以上。SZD菌株的pheS基因序列与棒状乳杆菌棒状亚种及扭曲亚种的相应序列的相似率分别为100%和97.87%,而rpoA基因序列与棒状乳杆菌棒状亚种及扭曲亚种的相应序列的相似率分别为98.65%和100%;tuf基因序列与棒状乳杆菌两个已知亚种相应序列的相似率均为99.00%以上,而hsp60基因序列与棒状乳杆菌两个已知亚种相应序列的相似率均为99.00%以下。在用应用算术平均数的非加权成组配对法构建的基于16SrRNA、hsp60、tuf和pheS基因的进化树中,SZD菌株独立于棒状乳杆菌的两个已知亚种而自成一支。因此,将SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌的一个新亚种。结论结合表型特征及16SrRNA基因序列分析将SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌,最后通过基于hsp60、pheS、rpoA及tuf基因的MLSA技术将其鉴定为棒状乳杆菌一个新的亚种。

Chelex-100法快速提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA

目的探索一种快速、高效提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA的方法。方法采用Chelex-100法提取14株革兰氏阳性杆菌的基因组DNA,利用PCR技术扩增16SrRNA基因及4个单拷贝管家基因以评价提取核酸的质量。结果 Chelex-100法能够在20min内从革兰氏阳性杆菌中提取出基因组DNA,所提取的DNA可直接用于PCR扩增。所有菌株的16SrRNA基因及棒状乳杆菌的4个单拷贝管家基因均扩增成功,PCR产物经电泳检测目的条带清晰特异,与预期目的片段长度相符。结论 Chelex-100法具有快速、高效、安全、经济的特点,采用这种方法提取的革兰氏阳性杆菌的基因组DNA可直接作为PCR扩增的模板。

小型液体通气仪的研制及应用

介绍一种自行设计制造的、用于小动物的小型液体通气仪（MLVR）。该MLVR采用单片机控制，呼吸频率、潮气量、吸气时间、呼气时间可以根据需要进行调节。将MLVR应用于大鼠进行液体通气后取得良好效果。

急性高原病易感人群筛选研究的一些思考

高原缺氧存在易感人群,目前对高原易感人群的筛查主要从进入高原前后人体功能、组织因子及蛋白的变化等方面进行研究,有学者开始从基因水平筛查高原易感人群,基因研究虽然面临许多困难,但它可能是高原易感人群筛查中最有前景的研究方法,应是今后研究的重要方向。

乳酸杆菌基因鉴定技术研究进展

乳酸杆菌广泛分布于环境，是人体正常菌群，具有改善调节肠道菌群、增强机体免疫功能、降低血清胆固醇水平以及抑制肿瘤细胞形成等生理功能［1］，被广泛地应用于食品、医药及化工等领域。如何对乳酸杆菌进行准确、规范地鉴定分类具有重要的意义。由于乳酸菌形态易受培养条件的影响，而且生理生化特征差异较小，故对于许多乳酸杆菌，仅凭形态、生理生化特征等表型特征并不能准确地鉴定。目前对细菌的鉴定已深入到基因型性状，一些新的分子标记技术相继被用于乳酸杆菌的基因鉴定，如多位点序列分析（M ultilocus sequence analysis ， MLSA）、随机扩增多态性DNA（Randomly amplified polymor-phic DNA ，RAPD）、限制性片段长度多态性（Restriction frag-ment length polymorphism ，RFLP ）、扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism ，AFLP）、变性梯度凝胶电泳（Denaturing gradient gel electrophoresis ，DGGE）及温度梯度凝胶电泳（Temperature gradient gel electrophoresis ， TGGE）等。本文就乳酸杆菌基因鉴定技术的研究进展进行综述。

用API50CH系统鉴定9株产高光学纯度D-乳酸野生菌株

目的对从某发酵食品中分离纯化出的9株产高光学纯度D-乳酸的野生菌株(SZD菌株)进行鉴定。方法用API 50CH碳水化合物鉴定试剂条对9株SZD菌株进行碳水化合物发酵试验,根据碳水化合物发酵试验结果对其进行鉴定。结果利用API 50CH系统将9株SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌。结论 API 50CH系统简单快捷,可将乳酸杆菌鉴定至种的水平。

应用16 S rRNA基因序列分析快速鉴定临床标本中的革兰氏阳性杆菌

目的探索一种快速鉴定临床标本中革兰氏阳性杆菌的方法。方法利用PCR技术扩增待检菌株的16 S rRNA基因序列,通过分析待检菌株的16 S rRNA基因序列对其进行鉴定。结果 5株待检菌株的16 S rRNA基因序列均成功扩增,其中4株的16 S rRNA基因序列与基因库中已注册的核酸序列相似率达99.9%以上,将其鉴定到种的水平,1株的16 S rRNA基因序列与基因库中雷弗森菌属的核酸序列相似率为97.09%,将其鉴定为雷弗森菌属。结论应用16 S rRNA基因序列分析可快速、准确地鉴定临床标本中的革兰氏阳性杆菌。

棒状乳杆菌4个管家基因PCR引物的设计与验证

目的探索一种为棒状乳杆菌管家基因设计PCR引物的方法,并验证所设计引物的PCR扩增效率和特异性。方法先用在线引物设计工具Primer-BLAST为棒状乳杆4个菌管家基因设计PCR引物。然后用软件oligo 6.44评价引物的各项参数,综合考虑PCR引物设计的各项原则,人工筛选出最佳引物,最后通过PCR扩增验证引物的效率和特异性。结果每个管家基因用Primer-BLAST程序设计得到10对引物,最后各选出1对引物。经PCR扩增验证,这些引物不仅效率高,而且特异性好。结论本研究所用的引物设计方法简单实用,用于设计棒状乳杆菌管家基因PCR引物效果理想。

hs-CRP在老年人社区获得性肺炎中的临床价值

目的探讨超敏C-反应蛋白(hs-CRP)在老年人社区获得性肺炎(CAP)中的临床价值。方法观察82例老年人CAP患者治疗前和治疗后血清hs-CRP浓度、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(N)、红细胞沉降率(ESR)、体温及痰培养变化情况,进行统计学分析。结果 82例CAP患者入院时hs-CRP水平显著高于正常水平,给予抗感染治疗7d后hs-CRP水平明显降低,与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.01)。入院时hs-CRP阳性率为95.12%,明显高于WBC、N、ESR、体温和痰培养阳性率,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 hs-CRP可作为老年人CAP诊断和疗效评估的敏感指标。

产高光学纯度D-乳酸野生菌株的分离筛选

目的从某发酵食品中分离筛选出产高光学纯度D-乳酸的野生菌株。方法用平板划线法对某发酵食品中的野生菌株进行分离纯化,用高压液相色谱法测定所分离野生菌株发酵液中D-乳酸的光学纯度,筛选出产高光学纯度D-乳酸的菌株。结果从某发酵食品中共分离筛选出9株野生菌株,产D-乳酸的光学纯度达100%,将其命名为SZD菌株。结论某发酵食品中存在产光学纯度为100%D-乳酸的野生菌株。

苦杏仁甙对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化血清蛋白标志物的影响

目的 观察苦杏仁甙对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠血清生物标志物的影响.方法 将72只Wistar大鼠随机分为对照组、博莱霉素组和苦杏仁甙组,每组24只.分别观察7、14、28 d.博莱霉素组和苦杏仁甙组气管内一次性注入博莱霉素5 mg/kg,对照组气管内注入等体积生理盐水,同时苦杏仁甙组大鼠每天腹腔注射苦杏仁苷15 mg/kg.取肺组织制作石蜡切片,天狼猩红染色法结合偏振光显微镜观察肺组织I、Ⅲ型胶原的表达.表面增强激光解吸附离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF MS）结合弱阳离子蛋白芯片检测各组大鼠混合血清差异蛋白的表达.结果 肺组织石蜡切片天狼猩红染色显示肺纤维化动物模犁肺组织存在持续纤维化反应.模型建立7、14、28 d后,3组均检测到4种差异表达的蛋白,其质荷比分别为3530.7,7043.5,8332.6和9068.0.与对照组比较,博莱霉素模型组7和28 d时质荷比为3530.7的血清蛋白标志物峰强度比值在〉2,在7、14、28 d时质荷比为7043.5,8332.6和9068.0的血清蛋白标志物峰强度比值均〉2,有明显差异.与博莱霉素组比较,苦杏仁甙组质荷比为7043.5（7 d）,质荷比为8332.6（28 d）和9068.0（14 d）的血清蛋白标志物峰强度比值均〉2,有明显差异.结论 苦杏仁甙可抑制博莱霉素诱导的大鼠血清蛋白标志物峰强度的增加.