实验室内部技术人员检测能力的科学评估方法

利用实验室能力验证中测量审核和能力比对两种方式,并结合稳健统计分析方法,建立一套科学有效的人员能力评定统计评价模式,同时以实例演示人员能力的评定过程。研究表明,当已知人员评定标准(参考值)时,则以评定标准为准则进行人员能力比对;当未知评定标准时,需要评定员根据已有数据结合统计分析制定出指定值。因指定值可能与真实结果之间有较大偏倚,从而导致人员能力被误判,有评定标准(参考值)的比无评定标准的更为可靠。该模式可用于实验室内部技术人员检测能力的科学评价,进而提升实验室的质量管理水平。

顶空气相色谱法测定6B型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮残留量

目的建立顶空气相色谱法测定6B型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮的残留量。方法采用顶空气相色谱法,以水为溶剂,测定北京民海生物科技有限公司生产的6B型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮的残留量。色谱条件为:采用DB-624毛细管柱(30 m×0.25 mm,膜厚1.80μm);载气色谱柱流量为3.00 ml/min,分流比为10∶1。起始柱温为40℃,保持2 min;以5℃/min升温至80℃,保持4 min;以20℃/min升温至200℃,保持2 min。检测器温度为240℃。恒温炉温度为80℃、平衡时间30 min。对该方法进行系统适用性、专属性、检测限、定量限、线性范围、准确度、重复性、重现性验证。结果乙醇、丙酮理论板数≥5000,分离度≥1.5。苯酚对乙醇、丙酮残留量无干扰。乙醇的检测限为0.199μg/ml,定量限为0.596μg/ml;丙酮的检测限为0.051μg/ml,定量限为0.152μg/ml。乙醇的线性方程式为Y=2276.47186X-265.40507,r=0.99999,线性范围为0.090~30.000μg/ml;丙酮的线性方程式为Y=7790.89842X+4216.80623,r=0.99813,线性范围为0.120~40.000μg/ml。6B型肺炎球菌精制多糖准确度回收率乙醇为86.20%~100.66%,丙酮为82.89%~91.42%。重复性RSD乙醇为2.3%,丙酮为5.5%。重现性RSD乙醇为7.2%,丙酮为4.2%。9批样品乙醇残留量为未检出~6.184μg/ml,丙酮残留量为未检出~10.475μg/ml。结论顶空气相色谱法测定6B型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮的残留量系统适用性、准确度、精密度、线性良好,且方法快捷、操作简单,结果可靠,可用于6B型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮残留量检测。

Vero细胞生长过程中葡萄糖消耗量与细胞数量关系的研究

目的:建立一种应用于片状载体培养的Vero细胞计数方法。方法:Vero细胞于细胞瓶内培养,分别于24 h、48 h、72 h、96 h和120 h取样检测上清液中葡萄糖含量,同时消化细胞并计数。以葡萄糖累计消耗量为X轴,以细胞收获数量为Y轴,获得葡萄糖累计消耗量和细胞数量的关系方程,从而建立一种细胞计数的方法。通过计算反应器中细胞生长消耗的葡萄糖量来计算细胞数量,从而优化控制细胞生长。结果:得到葡萄糖消耗量与细胞数量线性方程为Y=4.107×10~8X;Vero细胞在反应器内培养6 d,累计消耗葡萄糖71.28 g,所获得细胞数量为2.93×10^(10)个。结论:建立了葡萄糖消耗量与细胞数量的线性关系,即每消耗1 g葡萄糖对应的细胞数量为4.107×10~8个,可作为片状载体细胞培养过程中细胞计数的参考。

不同胰蛋白酶在制备腮腺炎减毒活疫苗中的效果比较

目的比较基因重组胰蛋白酶和猪源胰蛋白酶在腮腺炎减毒活疫苗中的使用效果。方法使用浓度为10%、15%、20%基因重组胰蛋白酶制备鸡胚成纤维细胞,通过细胞密度、细胞活性、24 h以及48 h细胞贴壁状态等指标确定基因重组胰蛋白酶使用浓度;与猪源胰蛋白酶进行比较,通过细胞密度、细胞活性、48 h细胞贴壁状态以及病毒滴度等指标比较两种胰蛋白酶的使用效果;使用基因重组胰蛋白酶制备3批腮腺炎减毒活疫苗,检定疫苗的稳定性;规模化放大验证该工艺的稳定性。结果通过研究发现基因重组胰蛋白酶的使用浓度为15%;与猪源胰蛋白酶进行比较,两种胰酶制备的细胞密度水平一致,无显著性差异(P>0.05),48 h后细胞均生长至单层,细胞状态良好,按照同一MOI进行接毒,病毒滴度无显著性差异(P>0.05);使用CF-10进行试验,病毒滴度也无差异(P>0.05);连续3批使用基因重组胰蛋白酶制备的疫苗热稳定性良好,且该工艺可以规模化放大。结论在制备腮腺炎减毒活疫苗中可以使用浓度15%的基因重组胰蛋白酶替代猪源胰蛋白酶,作为鸡胚成纤维细胞消化液使用。

紫外线对狂犬病毒的灭活效果

为探讨紫外线对狂犬病毒(RV)的灭活效果,为狂犬病疫苗生产车间的生物安全风险防控提供参考,将制备好的狂犬病毒悬液置于∅9 cm玻璃平皿内,在生物安全柜内风干后于辐照强度≥70μw/cm^(2)的紫外线照射下作用15 min,用病毒培养液复溶后,每只小白鼠按照0.03 mL的剂量脑腔注射,饲养14 d,根据小白鼠的死亡率确定紫外线对狂犬病毒的灭活效果。经过连续3次平行试验,阳性对照组死亡率为100%、100%、87.5%,供试品组全部存活,说明紫外线对狂犬病毒具有灭活作用,辐照强度≥70μw/cm^(2)的紫外线照射下作用15 min能彻底杀灭狂犬病毒。

人轮状病毒疫苗的研究进展

轮状病毒(RV)是引起全球5岁以下婴幼儿腹泻最重要的病原之一,普遍流行于发达国家和发展中国家,然而在发展中国家该病的病死率较高。由于目前RV腹泻尚无有效治疗药物,并且改善卫生条件对预防RV感染并无明显的效果。因此,疫苗是目前证实能预防和控制RV腹泻唯一有效的手段。尽管RV疫苗研制已取得很大的进展,由于轮状病毒毒株的多样化和流行分布很广,故而继续研制一种新的适合的安全、有效的RV疫苗显得尤为重要。本文针对人RV疫苗的研究进展、质量控制、保护效力及安全性评价作一综述,以期促进后期相关研究。

无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗的研制

目的研制无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP/Hib)。方法按不同抗原配比配制3组联合疫苗,分别检测疫苗的效价及安全性,从中选择最佳配比配制3批联合疫苗,并用相应批原液,按相同配比配制3批DTaP和3批Hib疫苗作为对照,检测联合疫苗中抗原的相容性。结果3组配比的联合疫苗效价及安全性均达到《中国药典》三部(2005版)要求,联合疫苗中以每毫升含AcP18μgPN、D25Lf、T7Lf和Hib多糖抗原20μg为最佳配比。动物实验证明联合疫苗各抗原间不存在免疫干扰。结论已成功研制4种抗原配比合理的DTaP/Hib联合疫苗。

b型流感嗜血杆菌荚膜多糖纯化方法的优化

对b型流感嗜血杆菌荚膜多糖纯化工艺中冷酚抽提次数、沉淀核酸的乙醇浓度、沉淀糖精的乙醇浓度进行研究。结果表明,最佳纯化工艺为冷酚抽提4次,300 mL/L的乙醇沉淀核酸,650 mL/L的乙醇沉淀糖。所建立的提取纯化工艺提取的荚膜多糖纯度高,各项指标能够达到WHO的规程要求。

吸附无细胞百白破联合疫苗的安全性和免疫原性研究

目的评价某公司研制的吸附无细胞百白破联合疫苗(DTaP)的安全性和免疫原性。方法选择1 200名3~5月龄知情同意、无百白破疫苗接种史、无百日咳白喉破伤风病史、无百白破疫苗接种禁忌症的健康婴幼儿,按1∶1比例随机接种3针次试验疫苗和对照疫苗,每针次间隔1个月。在观察期内对受试者进行安全性观察,采集免前和全程免疫后第28d血清样本,进行免疫原性观察。结果免疫后试验组抗百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、白喉类毒素(DT)、破伤风类毒素(TT)抗体阳转率均>99%,与对照组相比,差异均无统计学意义(P值均>0.05),试验组非劣效于对照组。4种抗体几何平均浓度(GMC)试验组均高于对照组(P值均<0.01);抗体几何平均增长倍数(GMFI)除PT抗体外,其他3种抗体水平试验组均高于对照组(P值均<0.05)。两组全身和局部不良反应均以1级和2级为主,3级不良反应发生率均<2%,仅疲倦乏力、肿、疼痛等发生率试验组(2.17%~6.17%)高于对照组(0.67%~3.50%)(P值均<0.05)。结论该公司研制的吸附无细胞百白破联合疫苗与同类上市疫苗相比,免疫原性较好,不良反应轻微,安全性可以耐受,可进一步进行多联疫苗探索和研究。

浅谈制药企业验证活动中风险评估的应用研究

目的:从实际应用角度出发,为解决制药企业验证管理中存在的问题提供意见和建议。方法:运用文献研究方法,找出我国制药企业验证管理中存在的问题。并结合实例,为企业如何结合实际需求应用风险管理工具制定验证策略提供参考。结果和结论:我国制药企业应结合药品的工艺特点,运用适合的风险管理工具进行评估,制定验证策略,确定验证的范围和深度,达到控制药品风险和完善质量管理的目的。

浅谈药物临床试验数据管理中风险评估的应用研究

目的:通过研究风险评估工具,结合企业临床试验数据管理风险评估实例,从实际应用角度出发,提出完善药物临床试验数据管理过程中应用风险评估的意见建议。方法:运用文献分析方法、案例分析法,分析和借鉴成功的经验。结果与结论:我国的药品研制单位应根据具体临床试验特点和法规要求,利用合适的风险管理工具,对临床试验数据管理过程进行评估,根据评估结果合理制定并实施数据管理策略,达到保证临床试验数据完整、可靠的目的。

浅谈基于风险的疫苗临床试验监查的应用研究

目的:通过研究危害分析和关键控制点(HACCP)方法,结合疫苗临床试验现场步骤或环节风险评估实例,从实际应用角度出发,提出基于风险制定疫苗临床监查策略的意见建议。方法:运用文献分析方法、案例分析法,分析和借鉴成功的经验。结果与结论:我国的疫苗研制单位应根据具体临床试验特点和法规要求,对临床现场各步骤或环节进行风险评估,根据评估结果合理制定并实施监查策略,达到保证临床试验科学规范、真实可靠的目的。此外,也可将此方法应用到所有药品临床试验领域,有效确保临床试验质量。

生物企业信息化建设的策略探究

生物企业作为我国高新技术的重要组成部分,在推动社会经济发展方面具有不可替代的作用。随着互联网的快速发展,信息化程度日益提高,网络信息成为企业生产经营过程中不可或缺的一部分。生物企业信息化建设是当前国内生物企业关注和研究的热点问题之一,也是提高企业核心竞争力、促进企业可持续发展的关键途径。本文以“生物企业信息化建设研究”为题进行深入探究,旨在解决生物企业信息化建设问题,以期为生物企业健康长远地发展提供一些参考依据。

多个相关二分类共同终点临床试验样本量估计方法

对于具有多个主要终点(multiple primary endpoints)的临床试验,当规定任一个终点成功整个研究即为成功时,可称为并交(union-intersection)试验[1],此类研究常常会带来多重性问题。与之相反,针对多个共同终点(multiple co-primary endpoints)的临床研究称为交并(intersection-union)试验[2-3],一般规定多个终点同时具有统计学意义时整个试验才记为成功。这种设计避免了多重检验所带来的Ⅰ类错误膨胀,但需要对Ⅱ类错误进行调整,为临床试验样本量计算带来了新挑战[4-6]。

白喉毒素突变体CRM197原核表达载体构建及其蛋白表达

将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pBAD-DEST49中,转化到大肠杆菌菌株(ATCCMC1061).经阿拉伯糖诱导,CRM197获得高效表达.目的蛋白主要以包涵体形式存在,变性、复性后经DEAE阴离子交换后获得高于95%纯度的CRM197样品.用该样品做Western blotting鉴定后,能得到单一的特异性条带.本实验的表达策略,为CRM197进一步生产及应用奠定基础.

太阳黑子活动对麻疹单次病毒收获液生产的周期性影响

目的:根据太阳黑子活动规律找出麻疹单次病毒收获液生产的周期性,按生产的周期性安排生产,提高麻疹单次病毒收获液高滴度的比例。方法:将太阳黑子活动与麻疹单次病毒收获液生产进行研究,找出其对应关系,根据太阳黑子活动的周期性,确定麻疹单次病毒收获液生产的周期。将麻疹单次病毒收获液的生产安排在可以制备出高滴度的时间段进行,提高高滴度麻疹单次病毒收获液的比例。结果:高滴度麻疹单次病毒收获液的比例由2014年的22.0%提高到2016年的83.3%。结论:太阳黑子活动对麻疹单次病毒收获液生产具有周期性影响。根据麻疹单次病毒收获液生产的周期性安排生产,既可以提高麻疹单次病毒收获液高滴度的比例,制备出优质的疫苗,又可以节约原材料,降低成本。

第三代百日咳疫苗毒性国家标准品的制备和标定

目的:制备和标定第三代百日咳疫苗毒性国家标准品,用于百日咳疫苗毒性检测。方法:按照《中国药典》三部(2015版)的相关要求,选用百日咳疫苗生产菌株CS株进行发酵罐培养,将收获的百日咳菌液灭活后分装冻干,作为第三代百日咳疫苗毒性国家标准品的候选品。按照《中国药典》三部要求对候选品进行检定,以第二代百日咳疫苗毒性国家标准品为标准,组织6家单位进行协作标定,并采用热加速试验对候选毒性标准品进行稳定性考察。结果:共制备合格候选毒性标准品7000支,其外观、水分、分装精度均符合《中国药典》的相关要求;协作标定结果经统计学分析,最终确定每支第三代毒性标准品LPU为60,HSU为84;且稳定性良好。结论:候选毒性标准品各项指标均符合《中国药典》的各项要求,且一致性、稳定性良好,可作为第三代百日咳疫苗毒性国家标准品使用。

乙肝疫苗新型佐剂CpG-BW006对小鼠脾NK细胞表面分子CD69的表达及γ干扰素分泌的影响

目的:研究重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)佐剂BW006对小鼠脾自然杀伤(NK)细胞表面分子CD69的表达和γ干扰素(IFN-γ)分泌水平的影响。方法:BW006、HBsAg单用或联用体外刺激小鼠脾NK细胞,流式细胞仪检测NK细胞膜表面分子CD69的表达水平,ELISA检测IFN-γ的分泌水平。结果:5μg BW006体外刺激小鼠脾NK细胞24 h后,NK细胞表面分子CD69的表达达峰值(阳性率45.18%),显著高于40μg HBsAg组(21.44%)(P<0.05),与5μg BW006和40μg HBsAg联用组(58.49%)相比无显著差异;24 h时,5μg BW006组的IFN-γ分泌水平达56.95ng/mL,显著高于40μg HBsAg组(8.74 ng/mL)(P<0.05),与联用组(57.70 ng/mL)相比无显著差异。结论:BW006具有上调NK细胞表面分子CD69表达和诱导IFN-γ分泌的早期活化NK细胞的功能,作为疫苗的新型佐剂前景较好。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法检测冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的游离多糖含量

目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培(HPAEC-PAD)法检测冻干b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗中游离多糖含量的方法,并对其进行验证,为Hib结合疫苗的质量监控提供依据。方法 优化水解供试品的实验条件,利用HPAEC-PAD法检测供试品中多聚磷酸核糖基核糖醇(PRP)含量。色谱条件采用CarboPacPA10分析柱(2mm×250mm)与CarboPac PA10保护柱(2 mm×50 mm),氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,流速为0.25ml/min,脉冲安培检测器,进样体积为20μl。用乙醇分步沉淀法、C4固相萃取法和超速离心法分离Hib游离多糖,并对三种方法得到的结果进行比较。同时验证方法的系统适用性、特异性、线性、精密度及准确性。结果 确定水解条件为终浓度0.4mol/L的NaOH,于37℃振荡1.5 h。本公司生产的冻干Hib结合疫苗不可用C4固相萃取柱分离游离多糖,确定了超速离心联合HPAEC-PAD法为冻干Hib结合疫苗游离多糖检测的最适方法。该方法专属性、分离度良好;PRP浓度在0.1962~19.616μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,R2>0.99。3批供试品分别测定6次,RSD分别为4.1%、2.3%、3.3%,不同时间测得的中间精密度RSD分别为8.3%、3.6%和9.1%。游离多糖的加标回收率分别为102.9%、94.3%、92.0%,RSD分别为3.9%、8.7%、5.3%。结论 初步建立了冻干Hib结合疫苗游离多糖含量测定的超速离心联合HPAEC-PAD法。该方法具有良好的准确性、精密度及稳定性,可用于冻干Hib结合疫苗中游离多糖含量的检测。