口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗的制备及检定

目的制备口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗,并进行全面检定。方法制备O1、O139群霍乱弧菌灭活菌体原液及重组霍乱毒素B亚单位(recombinant cholera toxin B subunit,r CTB)原液,按比例混合制成口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗,为保护r CTB免受胃酸的破坏,制备了碳酸氢钠抗酸泡腾颗粒,并按照制定的新制品原液及成品的质控标准,对原液及成品进行全面检定。结果制备的口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗工艺稳定,各项指标均达到质控标准。结论口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗安全、有效,且制备工艺可行,符合规模化生产的要求。

不同降解方法对6A型肺炎球菌多糖结构和抗原性影响的研究

目的 研究采用过氧化氢法和高压均质法降解对6A型肺炎球菌多糖（type 6A pneumococcal polysaccharide,PnPS6A）结构和抗原性的影响.方法 分别采用过氧化氢法[将过氧化氢加入多糖（polysaccharide,PS）溶液中,50℃反应3 h]和高压均质法（用高压均质机在5×10^7 Pa压力下处理PS溶液）降解PnPS6A,降解物经超滤浓缩和冻干后,获得降解的PnPS6A.分别用核磁共振氢谱（nuclearmagnetic resonance hydrogen spectrum,^1H-NMR）和双向免疫扩散法检测PnPS6A降解物的结构和抗原性,用抑制ELISA检测降解和未降解的PnPS6A的抗原一致性.结果 2种降解方法均能降低PnPS6A的相对分子质量.2种降解的PnPS6A对PnPS6A抗血清抑制的半数有效浓度与未处理的PnPS6A为同一个数量级,表明降解的PnPS6A的抗原性没有改变.^1H-NMR分析显示,2种降解的PnPS6A的结构与未处理的PnPS6A一致.结论 2种降解方法都能降低PnPS6A的相对分子质量,而且对PnPS6A的结构和抗原性不会产生影响.

8型肺炎球菌荚膜多糖分子大小对结合效果及结合物抗原性的影响

目的评价8型肺炎球菌荚膜多糖(capsular polysaccharide of Streptococcus pneumoniae type 8,CPS8)分子大小对多糖蛋白结合物物理化学(理化)性质的影响,并对结合效果最优的多糖蛋白结合物进行抗原一致性评价。方法采用高压均质法制备不同分子大小的CPS8;采用1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯活化法,制备以白喉类毒素无毒突变体CRM197为载体的CPS8蛋白结合物CPS8-CRM197,并检定其理化性质;采用核磁共振氢谱及核磁共振碳谱分析降解前后多糖糖链结构的变化情况,同时采用抑制ELISA评价CPS8-CRM197结合物的抗原一致性。结果高压均质法制备的CPS8相对分子质量在69000~268000;CPS8相对分子质量>200000时会过度交联,<100000时结合效果较差;CPS8在相对分子质量100000~200000之间的CPS8-CRM197结合物游离多糖含量均<10%,游离蛋白含量均<5%。核磁共振氢谱及核磁共振碳谱结果表明,降解前后多糖糖链结构未发生改变,特异基团得到完整的保留;抑制ELISA表明不同CPS8-CRM197结合物对8型肺炎球菌抗血清抑制的半数效应浓度在同一数量级内,分别为0.005、0.003、0.005μg/ml,抗原性具有一致性。结论多糖结合疫苗制备工艺中,应将CPS8分子大小控制在相对分子质量100000~200000之间,该范围内多糖所制备的多糖蛋白结合物理化性质较优、抗原一致性较好。