组分百日咳抗原中间产物中氨基酸含量的邻苯二甲醛柱前衍生化RP-HPLC检测

目的建立邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde,OPA)柱前衍生化反相高效液相色谱法(reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)并验证,以检测百日咳抗原中间产物中氨基酸的含量。方法采用OPA柱前衍生化RP-HPLC检测百日咳抗原中间产物百日咳毒素脱毒液中L-天冬氨酸钠盐、丝状血凝素脱毒液中甘氨酸及黏附素脱毒液中L-赖氨酸的含量,并对该方法的专属性、系统适用性、线性、准确度、耐用性、检测限和定量限进行验证。结果OPA柱前衍生化RP-HPLC检测配置溶液,对照品和供试品溶液可见对应的氨基酸色谱峰,供试品溶液的保留时间和峰面积相对标准偏差均小于2.0%。氨基酸浓度在5~100μg/ml时,浓度与峰面积线性关系良好,检测氨基酸样品的加标回收率均在80%~120%之间。用磺基水杨酸和盐酸稀释剂处理供试品后,2种稀释剂检测值之间的相对误差在±5%范围内。定量限为5μg/ml,检测限为2μg/ml。结论成功建立了检测百日咳抗原中间产物中氨基酸含量的OPA柱前衍生化RP-HPLC检测方法,该方法的专属性、系统适用性、线性、准确度、耐用性良好。