rAAV8-1.3HBV构建小鼠病毒性肝损伤模型研究

目的:用高嗜肝性的重组8型腺相关病毒载体携带C基因型(adr亚型) 1.3拷贝乙型肝炎病毒,建立HBV持续复制的小鼠病毒性肝损伤模型。方法:将rAAV8-1.3HBV经尾静脉注射到78只C57BL/6小鼠体内,通过定量检测血清中HBV DNA、HBeAg、HBsAg含量,同时检测血清学AST、ALT活力值以及病毒注射后8周、12周、16周、20周、24周时取实验组动物肝脏做HE染色分析,最终建立HBV持续复制的小鼠病毒性肝损伤模型。结果:C57BL/6小鼠注射rAAV8-1.3HBV后,8周至24周小鼠血清中可检测出稳定表达的HBV,且20周和24周HE染色病理结果显示肝组织内可见肝小叶内点状、灶状以淋巴、单核细胞为主的炎细胞浸润,肝小叶内的炎性浸润灶数量较多,分布范围较广,与对照组相比,病变程度及累计范围明显加重。结论:利用rAAV8体内转导C57BL/6小鼠,成功地建立了HBV病毒性肝损伤小鼠模型,此模型在病毒注射20周后逐渐出现病毒性肝损伤特征,可用于病毒性肝损伤的研究。

抗乙型肝炎病毒中药复方ZYD对人肝癌SMMC-7721细胞生物学行为及机制的探讨

目的阐明抗乙型肝炎病毒中药复方ZYD对人肝癌SMMC-7721细胞生物学行为产生的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的增殖能力,细胞黏附试验检测细胞的黏附能力,划痕试验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的周期和凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)、Snail、波形蛋白(Vimentin)、过氧化物酶1(Prx-1)m RNA的表达。结果 (1)复方ZYD可明显抑制SMMC-7721细胞增殖,且抑制作用优于组方中各单味药;(2)复方ZYD可明显抑制SMMC-7721细胞黏附能力,且具有剂量依赖关系;(3)复方ZYD可明显抑制SMMC-7721细胞迁移能力,且呈明显的量-效关系和时-效关系;(4)ZYD可促进SMMC-7721细胞凋亡,且在S期产生细胞周期阻滞;(5)各剂量复方ZYD均能显著下调SMMC-7721细胞MMP-2、Snail m RNA的表达,高剂量(1 000μg/ml)复方ZYD能明显下调MMP-9 m RNA的表达。结论复方ZYD可通过促进细胞凋亡、S期细胞周期阻滞而产生抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用,并通过下调Snail、MMP-2和MMP-9 m RNA的表达抑制肝癌细胞的转移。

紫叶丹胶囊对二乙基亚硝胺致肝损伤保护作用研究

目的探讨抗乙肝中药复方紫叶丹胶囊对二乙基亚硝胺(DEN)致肝损伤的保护作用。方法 120只雄性Wistar大鼠按体重随机分为紫叶丹组(0. 781 g/kg·bw)、模型组(纯水)和正常组(纯水),每组40只。紫叶丹组和模型组,按50 mg/kg·bw剂量腹腔注射DEN,2次/周,连续4周后,改为按50 mg/kg·bw剂量腹腔注射DEN,1次/周,正常组等体积腹腔注射生理盐水至14周。造模的同时给予紫叶丹进行干预,连续灌胃给药16周。观察第16周血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性,同时观察4、8、12和16周肝组织病变和肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原和生长转化因子-β1(TGF-β1) mRNA的表达。结果紫叶丹胶囊可延缓DEN致肝损伤的病变进程,明显降低血清中ALT和ALP含量差异有统计学意义(P<0. 05),并有降低血清中AST含量的趋势,差异有统计学意义(P>0. 05),可降低肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0. 05或P<0. 01)。结论紫叶丹胶囊可能通过下调TGF-β1 mRNA的表达,使ECM合成减少并促进ECM降解,降低了Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,从而达到延缓DEN致大鼠肝损伤病变进程的作用。

紫叶丹胶囊治疗二乙基亚硝胺诱导肝硬化模型大鼠的研究

目的探讨紫叶丹胶囊对二乙基亚硝胺诱导的肝硬化模型大鼠的干预作用。方法 Wistar大鼠随机分为治疗组、模型组和正常组,每组各40只。治疗组和模型组腹腔注射二乙基亚硝胺诱导大鼠肝硬化模型,治疗组给予紫叶丹胶囊(0.781 g/kg)灌胃,连续给药16周,模型组和正常组以等体积的纯水灌胃。观察各组第4、8、12、16周体质量变化、肝脏病变及肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原和生长转化因子-β1(TGF-β_1)信使RNA(mRNA)的表达。结果 (1)模型组与治疗组各时间点体质量均低于正常组(P<0.01);(2)第12周时治疗组的纤维化程度评分较模型组降低(P<0.05);(3)与模型组比较,治疗组第4、8、12、16周时Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达均明显降低(P<0.01),第12、16周时TGF-β1 mRNA的表达明显降低(P<0.01)。结论紫叶丹胶囊具有抑制二乙基亚硝胺诱导大鼠肝硬化形成的作用,其机制可能与下调Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1 m RNA的表达有关。