猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养

目的本研究系统比较了体外受精胚(IVFEs)、孤雌激活胚(PAEs)以及体细胞核移植胚(NTEs)的发育率和囊胚质量,同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。方法利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术分别生产猪的NTEs、IVFEs和PAEs,开展体外培养。结果(1)IVFEs、PAEs和NTEs的卵裂率分别为72.0%,66.0%和63.5%,各组间没有显著差异(P>0.05);囊胚形成率分别为11.0%,22.6%和16.9%,也不存在明显不同(P>0.05);然而,在囊胚质量,即ICM细胞数/总细胞数的比例上,IVFEs和NTEs均优于PAEs(0.448%,0.356%vs 0.122%,P<0.05)。(2)对PAEs来讲,以PZM-3为基础培养基时囊胚率明显高于以NCSU-23为基础培养基时的处理组(35.4%vs.22.6%,P<0.05);而对NTEs而言,两种培养基在支持胚胎形成囊胚方面的效果相当(26.6%vs.21.1%,P>0.05),虽然PZM-3培养时胚胎卵裂率显著低于NCSU-23培养组(47.5%vs.63.5%,P<0.05)。结论(1)PAEs的囊胚质量在3种来源的胚胎中最差;(2)对PAEs理想的培养基,当用于NTEs培养时却不一定是最佳的选择。

季节对猪体外成熟卵母细胞的发育能力的影响

猪的卵母细胞对外界环境非常敏感,这造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一.文章的研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响.研究中比较了不同季节每对卵巢获得A/B级卵的数量以及卵母细胞核成熟的比例(实验1),另外统计分析了不同季节孤雌(实验2)和核移植(实验3)胚胎发育能力的差异,最后在冬春两季分别进行了克隆胚胎的移植以观测其体内发育情况(实验4).结果显示实验1,春季(3月到5月)COCs/卵巢的比例最高(7.6±3.5),夏,秋,冬季的比例依次是(6.4±3.3),(6.7±2.9),(6.7±3.4),p<0.05.然而,没有发现卵母细胞的MⅡ比例有显著性差异((75.3±3.3)%,(73.5±2.3)%,(73.0±4.2)%,(76.5±6.7)%,依次是春,夏,秋,冬季的MⅡ比例,p<0.05).实验2,观察到夏季孤雌胚胎的囊胚率显著性降低(10.1±2.6)%,春,秋,冬季的孤雌胚胎囊胚率依次是(27.2±3.4)%,(22.4±3.5)%,(22.4±3.4)%,p<0.05.实验3,猪体细胞克隆胚胎在春季囊胚率获得提高((12.2±1.3)%,秋,冬季的克隆胚胎囊胚率依次是(10.2±1.2)%,(8.1±1.4)%,p<0.05).实验4,发现冬季胚胎移植无论是妊娠率还是出生率都明显低于春季.以上结果表明季节变化影响体外成熟卵母细胞的发育能力.

季节对体外成熟卵母细胞的发育能力的影响

猪的卵母细胞对外界环境非常敏感，造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一。猪卵脆弱的主要原因是其胞质中含有大量的脂肪滴，但目前其具体生物学功能还不清楚。众所周知，猪的繁殖表现和环境密切相关，例如，温度、湿度、光照等。本研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响。连续两年从当地屠宰场获取初情期前猪卵巢，抽取猪卯丘卵母细胞复合体，并在不含BSA的NCSU-23（添加10ng／mL： EGF，10ng／mL leptin，0．57mmol／Lcysteine，10IU／mLPMSG和101U／mLhCG）中培养44h，然后用透明质酸酶脱去卵丘。部分卵母细胞经过电击进行孤雌激活，部分卵母细胞用来进行体细胞核移植。对于猪体细胞核移植，使用长白猪胎儿成纤维细胞做为核供体，上述脱去卵丘的卵母细胞作为胞质供体。克隆胚和孤雌胚在添加4mg／mL的BSA液滴中培养，第2天和第6天分别计算卵裂和囊胚率（D0：融合或激活的当天）。其中每个实验至少重复3次，所有实验都经过SPSS（13．0）统计分析。比较了不同季节每对卵巢获得A级卵（外包3层以上致密的卵丘细胞并且卵胞质均匀的卵母细胞为A级卵）和B级卵（外包2～3层卵丘细胞并且胞质均匀的卵母细胞为B级卵）的数量以及卵母细胞核成熟的比例（实验1），统计分析了不同季节孤雌（实验2）和核移植（实验3）胚胎发育能力的差异。实验1中发现春季（3～5月）COCs／ovarypairs的比例最高[7．6±3．5（春）vs6．4±3．3（夏），6．7±2．9（秋），6．7±3．4（冬），P〈0．05]。然而，没有发现卵母细胞的MⅡ百分比有显著性差异[75．3％±3．3％（春），73．59／5±2．3％（夏），73．0％±4．2％（秋），76．5％±6．79／5（冬），P〈0．05]。实验2中观察到夏季孤雌胚胎的囊胚率显著性降低[10．2％±2．7％（春）vs27．29／5±3．5％（夏），24．2％±3．29／5（秋），22．3％±3．4％（冬），P〈0．05]。实验3，猪体细胞克隆胚胎在春季囊胚率获得提高[1e．2％±1．3％（春）VS10．3±1．1％（秋），8．1±1．4％（冬），P〈0．05]。以上结果表明，季节变化影响体外成熟卵母细胞的发育能力。