流式细胞术在培养医学研究生科研能力中的探索与实践

流式细胞术在医学研究生的科研过程中应用广泛,学习和应用流式细胞术对培养研究生的科研能力具有重要作用。为了使初步接触流式细胞术的医学研究生对这门技术产生基本了解,并使对流式细胞仪具有潜在使用需求的医学研究生能够合理进行科研实验设计、顺利完成流式检测,文章从流式细胞术的基本理论、仪器操作、和常用实验等方面展开讨论,结合本单位的仪器条件以及研究生的科研方向,具体介绍了采用流式细胞术检测细胞周期的常用荧光染料、基本操作步骤和注意事项;并进一步介绍了分析流式数据文件的一般步骤,对通过应用流式细胞术来培养医学研究生的科研能力进行了探索分析。

我院14287例孕妇的不规则抗体结果分析和临床意义

目的分析孕妇不规则抗体阳性结果 ,了解不规则抗体的临床意义。方法采用戴安娜微柱凝胶抗人球蛋白检测卡,对2015年10月~2016年9月于北京市海淀区妇幼保健院建卡就诊的14 287例孕妇血清中不规则抗体进行检测,对阳性结果者进一步鉴定其特性。结果 14 287例孕妇中检出不规则抗体阳性63例,21例为RH阴性孕妇,在产前注射过免疫球蛋白,实际不规则抗体阳性孕妇42例,阳性率为0.294%,14 287例孕妇中9246例为多次妊娠的孕妇。不规则抗体的类型有抗D 2例,抗E 8例,抗C 7例,抗CD 1例,抗Ce 6例,抗c E 6例,抗M 4例,抗S 1例,抗Fyb 4例;抗Lea 3例。结论围生期孕妇产前不规则抗体筛检具有临床应用价值,应将其列入产前血清学检查常规项目。

围产期母婴李斯特菌病13例临床分析

目的探讨围产期孕产妇及新生儿感染李斯特菌病的临床特征、治疗和预后,提高临床对该病的认识和重视,做到早预防、早诊断、早治疗,降低新生儿的发病率和死亡率。方法回顾性分析北京市海淀区妇幼保健院2008年1月1日—2013年12月31日分娩的13例感染李斯特菌孕产妇产前、产后和对应新生儿的发病状况、临床表现、实验室指标、病情严重程度、治疗及预后的情况,结合相关文献对围产期孕产妇和新生儿李斯特菌病的临床特点进行探讨。结果 13例李斯特菌感染孕产妇患者均有临床症状,但症状不典型不特异。53.8%患者有高热症状,84.6%诉腹痛,100%引起胎儿宫内窘迫,白细胞总数（12.1×109～26.9×109/L）、中性粒细胞比率（0.650～0.898）和C反应蛋白（10.00～103.00 mg/L）都有不同程度升高;对应13例感染新生患儿均为早发感染,新生儿血流感染8例、新生儿肺炎4例、新生儿颅内出血4例、化脓性脑膜炎3例、新生儿感染性胃肠炎2例,新生儿死亡2例;感染的新生儿白细胞总数（4.7×109～27.6×109/L）、中性粒细胞比率（0.505～0.819）、血小板（79×109～280×109/L）和C反应蛋白（7.00～120.80 mg/L）,单核细胞比率（0.042～0.116）,白细胞总数大部分正常,少部分降低或升高,C反应蛋白和单核细胞比率多数升高,血小板部分降低。孕产妇患者预后良好,新生患儿多预后不良,有2例新生儿死亡。结论产单核细胞李斯特菌极易感染细胞免疫相对低下的孕产妇,通过母婴垂直传播感染新生儿,对新生儿造成严重的不良后果。早预防、早诊断、早治疗可有效降低新生儿发病率和病死率。最为重要的是在孕早期对孕产妇进行食品安全性宣传教育,减少妊娠期感染,是降低新生儿李斯特菌病的重要预防措施。

瘦素、脂联素、抵抗素、内肥素与妊娠糖尿病胰岛素抵抗的相关性研究

目的:探讨脂肪因子瘦素、脂联素、抵抗素、内肥素与妊娠糖尿病(GDM)胰岛素抵抗的相关性。方法:实验分为正常育龄妇女组(44例)、正常妊娠妇女组(62例)和妊娠糖尿病患者组(63例),用ELISA方法分别检测3组瘦素(Leptin),脂联素(Adiponectin),抵抗素(Resistin),内肥素(Visfatin)的水平,用葡萄糖氧化酶法检测血糖水平,免疫发光法检测胰岛素水平,用HOMA-IR(稳态模型胰岛素抵抗指数)表示胰岛素抵抗状态,HOMA-IR=空腹血糖×空腹血胰岛素÷22.5,用SPSS11.5统计软件进行统计分析。结果:妊娠糖尿病患者组的瘦素水平明显高于正常妊娠妇女组[(13.50±7.14)ng/ml、(7.78±3.82)ng/ml,P<0.001],正常妊娠妇女组明显高于正常育龄妇女组[(7.78±3.82)ng/ml、(1.73±0.70)ng/ml,P<0.001]差异具有统计学意义;GDM组的内肥素水平明显低于正常妊娠妇女组[(15.67±5.78)ng/ml、(22.43±5.68)ng/ml,P<0.001],正常妊娠妇女组明显低于正常育龄妇女组[(22.43±5.68)ng/ml、(36.46±13.34)ng/ml,P<0.001],差异具有统计学意义;GDM组的脂联素水平低于正常妊娠妇女组[(5491.71±2986.00)ng/ml、(6692.34±2583.51)ng/ml,P=0.029],差异有统计学意义,正常妊娠妇女组明显低于正常育龄妇女组[(6692.34±2583.51)ng/ml、(11076.82±3694.75)ng/ml,P<0.001],差异具有统计学意义;GDM组抵抗素水平与正常妊娠妇女组比较差异没有统计学意义。在妊娠糖尿病患者组,HOMA-IR与瘦素(r=0.352,P=0.005)正相关,与内肥素(r=-0.255,P=0.046)呈负相关。结论:妊娠糖尿病患者瘦素水平升高,内肥素和脂联素水平降低,瘦素和内肥素与胰岛素抵抗有关,瘦素和内肥素参与了妊娠糖尿病胰岛素抵抗的发生发展;脂联素和抵抗素与胰岛素抵抗不具有相关性,脂联素和抵抗素可能与妊娠糖尿病胰岛素抵抗的发生无关。

妊娠糖尿病患者血浆视黄醇结合蛋白4水平与胰岛素抵抗的相关性分析

目的检测妊娠糖尿病患者血浆视黄醇结合蛋白4(RBP4)的水平,探讨其与胰岛素抵抗的关系。方法用酶联免疫分析法测定37例正常妊娠妇女及40例妊娠糖尿病患者血浆RBP4水平,同时测定空腹血糖、血脂及胰岛素水平,并计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果妊娠糖尿病患者血浆RBP4水平[(28.52±12.45)μg/mL]虽低于正常妊娠妇女组[(31.47±14.28)μg/mL],但差异无统计学意义(P>0.05)。RBP4与HOMA-IR、空腹血糖呈正相关[相关系数(r)分别为0.34、0.37,P<0.05]。结论妊娠糖尿病患者空腹RBP4水平有下降的趋势但没有显著变化。RBP4水平与空腹血糖、HOMA-IR有关。

男性泌尿生殖道支原体感染698例的调查及耐药性分析

目的了解男性泌尿生殖道支原体感染的分布状况,对抗菌药物的耐药性进行分析,指导临床合理使用抗菌药物。方法用珠海益民生物工程制品公司生产的支原体试剂盒进行支原体培养鉴定、计数及药敏试验。结果2 287份男性泌尿生殖道标本中共分离出698株支原体,阳性率为30．5%。其中解脲脲原体563株,占80．7%,人型支原体26株,占3．7%,解脲脲原体合并人型支原体感染109株,占15．6%。分离出的解脲脲原体对交沙霉素最敏感,人型支原体对多西环素、米诺环素的敏感率为100%,对红霉素、罗红霉素、克拉霉素耐药率为100%。结论治疗支原体感染的首选药为交沙霉素、多西环素、米诺环素。进行支原体培养、鉴定和药敏试验,可以根据药敏结果指导临床合理使用抗菌药物。

孕中期唐氏综合征血清学不同筛查方案的前瞻性对照研究及卫生经济学分析

目的比较孕中期唐氏综合征血清学二联与三联的筛查效率与经济学分析。方法收集2008年9～12月在北京市海淀区妇幼保健院产前筛查中心进行孕中期唐氏综合征筛查的孕妇,应用时间分辨荧光免疫法(TR-FIA)进行血清学筛查二联[甲胎蛋白(AFP)+游离β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)]及三联[AFP+游离β-hCG+游离雌三醇(E_3)]检测,并随访其妊娠结局。结果 (1)本研究共收集孕中期孕妇血清样本4,707例,随访到妊娠结局的4,245例,失访462例,妊娠结局随访率90.2%。其中唐氏综合征(21-三体)3例,其他染色体异常4例,神经管畸形1例。未出现因侵入性产前诊断流产患者。(2)三联筛查唐氏综合征检出率66.7%、假阳性率5.26%,所有染色体异常检出率75%;二联筛查检出率33.3%、假阳性率4.01%,所有染色体异常检出率37.5%;神经管畸形(NTD)检出率100%、假阳性率0.4%;18-三体假阳性率0.24%。三联筛查检出率高于二联筛查。(3)三联筛查每筛查出1例唐氏儿,所花血清学筛查及产前诊断费用约为499,375元,二联筛查为781,200元,二联筛查费用明显高于三联。结论中孕期血清学筛查效率三联筛查优于二联筛查,用于产前筛查与产前诊断费用三联筛查也低于二联筛查。

围产期李斯特菌感染6例的临床及分子特征

目的分析围产期李斯特菌感染6例的临床及其分子流行特征,为围产期李斯特菌感染的治疗、预防和控制提供参考依据。方法回顾性分析李斯特菌母婴感染病例的临床信息,对分离的病原菌进行血清学分型、脉冲场凝胶电泳分析、多位点序列分型及毒力基因检测。结果 6例孕妇出现发热、腹痛、胎动异常等症状;2例胎死宫内,4例新生儿出现胃肠炎、血流感染和脑膜炎等感染症状,其中1例新生儿出生2 d后死亡。6株产单核细胞李斯特菌有3种血清型(4b、1/2b和1/2a)、4种ST型(ST1、ST2、ST5和ST91)和5种PT型(pulsotype)。毒力基因(plcB、actA、hly、iap、prfA、inlA)检测均为阳性。结论 6例围产期李斯特菌感染病例症状较为严重,胎儿/新生儿预后差。分离的产单核细胞李斯特菌以血清型4b型和ST2型为主,携带6个毒力基因,致病力强。

抗病毒治疗对69例HIV合并HBV感染者肝功能和HBV病毒特征的影响

目的分析单独抗HIV治疗对HIV合并HBV感染者HBV病毒特征、病毒载量水平以及肝脏功能的影响。方法纳入北京地区2010。2014年首都医科大学附属北京佑安医院收治的69例HIV感染且HBsAg阳性的患者，其中59例使用拉米夫定（3TC）中替诺福韦（TDF），10例使用3TC加齐多夫定（AZT）进行抗HIV治疗。收集患者的血浆和血清样本，检测其肝功能、HBV病毒载量，并分析了HBV逆转录酶区（RT）的耐药及突变。结果33％的患者血清谷丙转氨酶（ALT）〉40U／L，15％的患者血清谷草转氨酶（AST）〉40U／L，并且传统的3TC＋AZT与新的3TC＋TDF相比，肝功异常的患者比例更多（P〈0．05）；5例HBV病毒PCR扩增阳性的RT区测序结果显示，3TC＋TDF和3TC＋AZT都会导致大量的RT区和s抗原区突变，但是只有1例存在3TC耐药．2例存在s抗原逃逸。结论HIV抗病毒治疗存在一定的肝脏损伤，可引起肝功ALT、AST水平增高，并可引起大量的RT区和S抗原区突变。是否会增强HBV耐药和病毒准种突变，有待对抗病毒治疗患者的动态检测分析。

急性乳腺炎患者病原菌分布及耐药性分析

目的:了解急性乳腺炎患者病原菌分布特点及耐药状况,指导临床合理使用抗菌药物。方法:收集脓性标本236份进行分离鉴定和药敏试验,用法国梅里埃公司生产的API鉴定系统进行细菌菌种鉴定,用K-B纸片扩散法做药敏试验。结果:236份标本中共分离出108株病原菌,分离率为45.8%,其中金黄色葡萄球菌86株,占79.6%,表皮葡萄球菌16株,占14.8%,溶血葡萄球菌3株,占2.8%,A族链球菌2株,占1.8%,阴沟肠杆菌1株,占1.0%。金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率为91.9%,对苯唑西林的敏感率为90.7%。对万古霉素、左氧氟沙星、呋喃妥因、复方磺胺甲恶唑、四环素、庆大霉素、克林霉素、红霉素的敏感率分别为100%、94.2%、94.2%、86.1%、82.6%、67.5%、45.7%、40.7%。结论:急性乳腺炎患者感染的主要病原菌为金黄色葡萄球菌,对青霉素的耐药率较高,青霉素不能作为治疗乳腺炎患者的首选药,对苯唑西林敏感率较高,因此苯唑西林可以治疗大部分由葡萄球菌引起的乳腺炎,但不能治疗MRSA引起的急性乳腺炎,由于MRSA具有多重耐药性,治疗MRSA引起的急性乳腺炎,应根据药敏结果选用敏感药物。

一种新型CK19片段的检测在肺癌诊断中的应用

探讨血清CK19片段的新型检测方法及对肺癌的诊断价值,并与CYFRA21-1、CEA进行比较。分别以CK19-2G和CK19-5H作为固相抗体和标记抗体,并将这两种抗体捕获的CK19片段命名为CK19-2G2,应用化学发光免疫分析方法检测84例肺癌患者,19例肺部良性疾病患者和59名健康体检者血清CK19-2G2浓度。结果表明:肺癌组血清CK19-2G2浓度(12.4±23.8mU/mL)高于肺部良性疾病组(4.8±11.1mU/mL,P<0.05)和对照组(0.1±0.2mU/mL,P<0.01),其灵敏度和特异性优于CYFRA21-1和CEA;在不同病理类型的肺癌中,肺鳞癌组CK19-2G2的水平显著高于其他各组,有显著性差异(P<0.05)。CK19-2G2是一种有效的非小细胞肺癌的肿瘤标志物,尤其适用于肺鳞癌的诊断。

三种方法筛查孕妇B族链球菌的效果评价

目的比较三种不同的方法检测B族链球菌的结果,对三种B族链球菌筛查方法进行效果评价。方法收集我院2014年1月至2015年12月产科门诊孕35~37周孕妇1374例,采集孕妇的阴道拭子和肛周拭子标本,分别用血琼脂培养法,LIM肉汤增菌培养法和PCR方法检测B族链球菌。结果 1374例孕妇标本中,血琼脂培养法阳性60例,阳性检出率为4.4%,PCR方法检测阳性66例,阳性检出率为4.8%,LIM肉汤增菌培养法阳性128例,阳性检出率9.3%。三种筛查方法比较,LIM肉汤增菌培养法阳性率与PCR法,血琼脂培养法比较差异具有统计学意义。血琼脂培养法和PCR法筛查阳性率差异不具有统计学意义。以LIM肉汤增菌法为金标准,血琼脂培养法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为46.9%,100%,100%,94.8%,PCR法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为50%,99.6%,96.9%,95.1%。结论LIM肉汤增菌培养法筛查B族链球菌的阳性率最高,血琼脂培养法和PCR法检测灵敏度较低,只能筛查出50%左右的GBS定植孕妇。建议临床筛查B族链球菌使用LIM肉汤增菌培养法筛查GBS,灵敏度高,特异性好。

孕产妇不规则抗体筛查的临床价值和意义

目的探讨开展孕产妇不规则抗体筛查对降低或避免溶血性输血反应的价值和意义。方法采用抗人球蛋白试剂对2356例孕产妇的血液标本进行不规则抗体检测。结果不规则抗体筛查阳性10例,阳性率0.424%。分别为抗D 2例,抗E 4例,抗C 1例,抗M 2例,抗P 1例。结论孕产妇输血前进行不规则抗体筛查能有效降低或避免溶血性输血反应的发生,有利于保障输血安全。

梅毒螺旋体感染阳性患者C反应蛋白变化的研究

梅毒是由苍白密螺旋体引起的全身性疾病，在我国近年来随着性传播疾病的流行，其发病率又有增加的趋势，部分患者无明显症状成为隐性梅毒螺旋体感染。本文通过检测梅毒螺旋体阳性患者血清炎症因子C反应蛋白的含量探讨其与梅毒螺旋体感染的关系。

温度对BV Blue法诊断细菌性阴道病的影响

目的探讨不同温育温度对BV Blue检测法诊断细菌性阴道病的影响。方法用无菌棉拭子采集460例妇科病人阴道分泌物,用BV Blue法检测分泌物中的唾液酸酶活性,比较三种不同温育温度(25,30,37℃)对细菌性阴道病阳性率的影响,所得数据进行统计学分析。结果460例标本37℃温育条件下,BV阳性率为15.4%,30℃温育时,BV阳性率为3.3%,25℃温育时,BV阳性率为2.6%,三种不同温育温度比较,BV阳性率有统计学差异。结论温育温度对BV Blue试剂盒检测细菌性阴道病有较大的影响,应该引起实验室的高度重视,随时监测温箱的温度,防止由于温度的差异,引起细菌性阴道病的阳性率降低。

C-反应蛋白测定在妊娠糖尿病中的临床意义

目的:探讨C-反应蛋白在妊娠糖尿病诊断中的临床意义。方法:对正常妊娠组60例,妊娠糖尿病组51例进行C-反应蛋白测定。结果:C-反应蛋白的浓度在正常妊娠组和妊娠糖尿病组相比有显著差异(P<0.05)。结论:C-反应蛋白在妊娠糖尿病的诊断和监测中具有重要意义。

226例泌尿生殖道感染支原体药敏分析

目的：检测226例泌尿生殖道感染支原体的类型，并对7种抗生素药物敏感试验结果进行分析。方法：598例标本来自泌尿生殖道感染的患者，用支原体培养鉴定及药敏试剂盒检测。结果：598例标本中有226例阳性，阳性率为37．8％，其中解脲支原体(Uu)阳性126例，阳性率为21．1％，人型支原体(Mh)阳性23例，阳性率为3．8％(Uu+Mh)混合感染77例，阳性率为12．9％，226例阳性支原体对强力霉素耐药率最高为47．3％，司帕沙星敏感率最高为63．7％，另外又对不同类型支原体进行了药敏分析，发现对7种抗生素耐药率Uu+Mh最高，其次Mh，耐药率最低的是Uu。结论：Uu、Mh引起的泌尿生殖道感染逐渐增多，支原体对不同的抗生素的耐药性不同，支原体的不同类型对同一抗生素的耐药性也不同，由于临床上滥用抗生素，导致Uu、Mh耐药率升高。因此对支原体进行分型鉴定及药敏试验非常重要。

妊娠糖尿病患者血浆生长素释放肽水平与血糖、血脂的关系

生长素释放肽（ghrelin）是Kojima等发现的第一个生长激素促分泌素（GHSs）受体的内源性配体。生长素释放肽是由28个氨基酸组成的小分子多肽，具调节能量代谢作用。本研究主要探讨妊娠糖尿病患者血浆生长素释放肽水平的变化及其与血糖、血脂代谢的关系.

抗子宫内膜抗体IgG的效价与习惯性流产关系的探讨

目的:探讨抗子宫内膜抗体(EMAB)IgG的效价与习惯性流产的关系。方法:用胶体金法检测受检者血清抗子宫内膜抗体IgG并分析其效价与习惯性流产的关系。结果:习惯性流产组的抗子宫内膜抗体IgG阳性率(38.6%)明显高于对照组(6.0%)(P<0.05)。在抗子宫内膜抗体IgG阳性中,早期流产(孕龄<12周)患者的血清抗子宫内膜抗体IgG的效价≥1:32的阳性率(76.9%)明显高于晚期流产(孕龄≥12周)患者(23.1%)(P<0.05)。结论:抗子宫内膜抗体IgG可与子宫内膜发生抗原抗体反应,干扰受精卵的着床和发育,可导致反复流产,而且其影响受精卵的着床和发育的程度与血清中的抗子宫内膜抗体IgG的效价有关。