解脲脲原体与慢性前列腺炎的相关性研究

本文对６０例非细菌性的慢性前列腺炎患者的前列腺液用ＰＣＲ和培养法同时进行解脲脲原体的检测，结果显示：ＰＣＲ技术的阳性率为１５．０％，培养法的阳性率仅为６．７％；２０例正常人对照组均为阴性。两组差异显著（Ｐ＜０．０１）。该结果还表明，ＰＣＲ技术检测前列腺液中解脲脲原体的方法简单、特异，可替代培养技术，并可作为解脲脲原体病原学检查和疗效考核的监测手段。

PCR快速检测腹泻患者粪中痢疾杆菌致病基因ipaH和ial

目的:建立一种快速、特异、敏感的分子生物学诊断方法对腹泻患者粪中痢疾杆菌致病基因ipaH及ial进行检测.方法:分别应用常规培养生化血清学鉴定方法、普通PCR、巢氏PCR(nested-PCR)方法,对71例腹泻患者粪标本进行检测.痢疾杆菌致病基因ipaH及ial的扩增产物经电泳分离.结果:在71例腹泻患者粪标本中,常规培养生化血清学鉴定方法分离出福氏痢疾杆菌24例,宋内痢疾杆菌23例,志贺痢疾杆菌1例,沙门菌23例.采用普通PCR法检测痢疾杆菌粪标本48例,ipaH基因均阳性(100%);ial基因阳性34例(70.8%),余14例为阴性.对该14例粪标本进而采用巢氏PCR法进行ial基因扩增,其中12份标本阳性.48例痢疾杆菌粪标本中46例ipaH和ial基因为双阳性(46/48).沙门菌粪标本23例中ipaH及ial基因表达均为阴性.以上两种方法的诊断一致性检验Kappa=0.937,差异有统计学意义(P<0.05).71例腹泻患者粪标本采用PCR和巢氏PCR法扩增得到的ipaH和ial基因特异片段与基因库中发表的标准菌株序列比较,一致性为100%.结论:建立了快速诊断腹泻患者粪中痢疾杆菌致病基因ipaH和ial的PCR检测方法,具有简便、快速、特异和敏感的特点.

脑囊尾蚴病脑脊液差异凝胶电泳方法的建立

目的建立脑脊液差异凝胶电泳方法,以获得高分辨率的荧光差异双向电泳图谱。方法取确诊的4例脑囊尾蚴病患者脑脊液和4位健康人脑脊液,分别用冰丙酮沉淀法除盐提取蛋白,均等量混合后为脑囊尾蚴病组与健康人对照组,两组总蛋白等量混合为内标组。将各组蛋白分别经花青染料2(Cy2)、Cy3和Cy5标记,再进行单向十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向差异凝胶电泳(2-DDIGE),分别在波长488nm、532nm和633nm激发光下扫描,所呈图像分别用ImageQuant和DeCyder 5.0图像分析软件进行蛋白表达差异分析。用DeCyder中的胶内差异分析(DIA)模块对2-DDIGE扫描图像进行蛋白质点检测和含量分析。用DeCyder中的生物学差异分析(BVA)模块分析两组蛋白表达的生物学差异。结果ImageQuant分析结果表明,所有脑脊液全蛋白样品均能被Cy2、Cy3和Cy5标记,荧光强度随蛋白含量的上升而增强。DIA分析显示,胶1和胶2分别检测到896和894个蛋白质点。胶2与胶1进行匹配,蛋白质点匹配率达90%。BVA分析发现,在脑囊尾蚴病组与健康人组脑脊液蛋白共有表达量变化超过两倍的差异蛋白质点55个,其中在脑囊尾蚴病组中表达上调2倍的有47个蛋白质点,下调2倍以上的有8个蛋白质点。结论以脑囊尾蚴病患者脑脊液建立的差异凝胶电泳方法,获得的2-DDIGE图谱,图像清晰,分辨率高,为脑囊尾蚴病蛋白质组学研究奠定了基础。

聚合酶链反应检测慢性前列腺炎患者前列腺液中沙眼衣原体

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１３４例慢性前列腺炎病人的前列腺液进行沙眼衣原体ＤＮＡ重复序列检测，结果阳性率为２９．１％（３９／１３４）。非慢性前列腺炎其他泌尿生殖道疾病患者的前列腺液１５例作为对照，均未出现阳性反应。用ＰＣＲ检测沙眼衣原体敏感性高（检测３．８５ｐｇＤＮＡ，在引物扩增片段５１７ｂｐ仍有可见的扩增信号），特异性强（与数种细菌、病毒、支原体、弓形虫均未出现沙眼衣原体待异性沉淀带），提示本法可用于临床诊断，在一定程度上替代培养技术，成为监测沙眼衣原体感染的实验室手段。