应用PCR和单克隆抗体方法从人粪便及肿瘤组织中检测大肠癌基因突变的研究

目的 :检测大肠癌病人粪便中脱落细胞与肿瘤组织细胞的DNA ,对比两者K ras基因序列和突变位点的变化 ,为临床非介入性的、简便的大肠癌诊断提供理论和实验依据。方法 :分离和提纯大肠癌组织及粪便中脱落细胞的DNA ,用PCR (Polymerasechainreaction)法扩增K ras基因 ,克隆K ras基因PCR产物并进行DNA序列的测定。免疫组化检测大肠癌相应抗原的表达 :采用ELISA法 ,用大肠癌单克隆抗体对大便样品进行检测。结果 :同一病人的大肠癌组织细胞与粪便中的脱落细胞的K ras基因的序列完全一致 ,并检测到 1例K ras基因点突变。K ras基因突变与否与大肠癌病理类型和大肠癌单克隆抗体检测大便样品中脱落细胞的癌抗原表达水平有一定的相关性。结论 :以大肠癌分子发病机理为基础的非介入性检测粪便中K ras突变是可行的 ,有望成为正常人群大肠癌筛查以及诊断的新方法之一 ,可以为大肠癌的早期发现及监测大肠癌的发生。

转录因子NF-κB p50基因的克隆、表达及抗p50抗体的制备

利用ＤＮＡ重组技术，将转录因子ＮＦ－κＢｐ５０基因片段插入ｐＧＥＸ－２Ｔ质粒载体，经ＤＮＡ序列分析证明克隆的正确性．将重组的ｐＧＥＸ－２Ｔ／ｐ５０转化入大肠杆菌ＪＭ１０９，表达出ｐＧＥＸ－２Ｔ／ｐ５０融合蛋白．经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测证实表达产物对抗ｐ５０ｃ的抗体呈特异性反应，表明克隆的正确性，并成功地应用纯化的ｐ５０蛋白制备了免疫血清．

铅染毒大鼠血液中铅与其他元素含量的相关性研究

研究了铅染毒大鼠血液中铅与其他元素之间的关系。选取75只健康的4周龄雄性Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠),随机分为25组,各组染毒剂量均不相同。在实验开始的第40、80、120天,分别从各组中随机选取1只大鼠,乙醚麻醉后取股动脉血。用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定血中的24种元素含量,并对铅与其他元素做相关分析。研究发现:在不同染毒周期,染毒剂量与血铅浓度的关系各有不同。血铅浓度随染毒时间的延长而升高,但染毒剂量在5～70mg·kg-1时,80天染毒组的血铅浓度反而高于120天染毒组;血铅与其他元素含量的相关性随染毒周期的变化而变化。

单克隆抗体检测大便样品诊断大肠癌的研究

目的 应用抗人大肠癌单克隆抗体对正常人群进行筛选和大肠癌诊断的研究。方法 采用ELISA法对正常人群和病理切片确诊为大肠癌的患者以及大肠癌患者手术前后的大便样品进行对比研究。结果 应用本抗人大肠癌单克隆抗体 (Anti colorectalcancerantibody ,Anti Cca)可以通过检测大便进行正常人群的筛查 ;对大肠癌患者手术前后的大便进行对比性研究发现 ,手术前大便的检测结果呈强阳性 ,手术后为阴性。对临床病理检查已经确诊为大肠癌的患者 ,再采用抗人大肠癌单克隆抗体检测大便诊断大肠癌 ,两者的吻合率为 10 0 %。结论 本实验所使用的大肠癌单克隆抗体可用于从大便中检测大肠癌的脱落细胞 ,可用于正常人群的筛查和进行大肠癌的诊断研究。

肾脏和股骨铅蓄积多元素综合指标探讨

目的:通过对血液中多元素与肾铅、股骨铅关系的分析,探讨能够准确反映肾脏、股骨铅蓄积的综合指标。方法:选取健康的4周龄雄性SD大鼠75只,随机分成25组,采取大剂量范围,小浓度间隔的染毒方法。实验开始后,于第40、80、120天分别从各组随机选取1只大鼠,经乙醚麻醉后股动脉取血,并收集肾脏、股骨,用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定元素含量。结果:血铅、肾铅、股骨铅浓度随染毒剂量的增加而发生变化,但变化趋势各不相同;血铅浓度与肾铅、股骨铅浓度之间的相关性随染毒周期而变化;血液中其他元素的浓度或浓度比值与肾铅、股骨铅之间的相关有统计学意义,且相关系数均高于单一元素与肾铅、股骨铅间的相关系数。结论:单一血铅指标在反映脏器铅蓄积水平有一定的局限性;多元素综合指标则有可能成为估算脏器铅蓄积水平的有力工具。

半固相生化反应试剂板的研制

目的:研制适合野外环境下进行生化项目检测的试剂板。方法:采用半固相化学反应技术,将所需试剂固定于载体板上,微量样品可通过低速离心准确与试剂发生反应并产生颜色,通过分光比色计算出检测项目的含量。结果:项目包括钾、钠、血糖、尿素、肌酐、转氨酶。收集50份标本,在大型生化自动仪上进行相同项目检测,相关性良好,r>0.95。结论:此方法性能可达到常规化学法水平,且快捷灵活,尤其适用于评估基层单位军民的健康情况及灾难和战伤时的救治需要。

浅谈科研用试剂产业链创新体系的构建

从2006年“十一五”到2015年的“十二五”，国家科技支撑计划科研用试剂行业的发展走过了10年。在步入“十三五”时期的同时，与时俱进的国家科技计划正在发生着变化。作为国家科学技术发展的一个重要环节，同时也为了科研用试剂更快的发展和更好的衔接“十三五”科技规划，“科研用试剂产业链创新体系的构建”进入了2015年国家科技支撑计划项目。

我所理解的科研用生化试剂

1＂十一五＂国家科技支撑计划科研用生化试剂的研发科研用试剂通常又被称为实验室试剂（Lab.Reagent）,这一称谓与产品的使用对象主要是科研人员、企业的质控、检验和从事产品开发人员相关。它突出的特点在于数量品种多（超过了10万个品种）、用量少。个别品种用量,每年也只有几个微克或毫克。

^(99m)Tc标记的大肠癌单克隆抗体在小鼠体内分布特点的研究

目的 :研究99m Tc标记的大肠癌单克隆抗体(99mTc ACCmAb)在正常小鼠和荷瘤裸鼠体内的分布及在荷瘤裸鼠体内SPECT成像的研究。方法 :将99m Tc和99mTc ACCmAb分别注射入正常小鼠、荷L0 10 16人结肠癌裸鼠 ,按不同时间点采取小鼠的脏器进行同位素放射性活度的测定 ;并在不同时间测定荷L0 10 16人结肠癌裸鼠注射99mTc ACCmAb的SPECT显像。结果 :注射99mTc后正常小鼠体内 6h 5min血液中的放射性活度与 30min相比下降了 76 .6 % ,是30min的 2 3.4 % ;肝脏中 6h 5min的放射性活度为30min的 2 7.2 % ,下降了 72 .8%。尾静脉注射99mTc ACCmAb的正常小鼠 ,6h 5min在血液中的放射性活度与 30min血液中的放射性活度比较下降了6 8.4 % ,是 30min的 31.6 % ,2 4h为 6h 5min的6 .1% ,下降了 93.9% ;荷瘤裸鼠体内99mTc ACCmAb在 2 4h血液中的放射性活度是 6h 5min的 2 .1% ,下降了 97.9%。SPECT显像结果表明 ,虽然在注射99mTc ACCmAb 2 0h血液与肿瘤的比值为最高 ,但在 2 4h的成像结果仍然好于其他的时间点。结论 :99m Tc标记的大肠癌单克隆抗体可特异性浓聚于荷L0 10 16人结肠癌裸鼠模型中 ,可能成为大肠癌根除手术中使用的手术导向体内诊断用药 。

平台 机遇 挑战——“十一五”国家科技支撑计划“科研用核心试剂产业化示范”课题通过验收

2013年9月，由北京牛牛基因技术有限公司（以下简称“牛牛基因”）承担的“十一五”国家科技支撑计划重点课题——“科研用核心试剂产业化示范”，在北京通过了国家科技部科研条件与财务司组织的验收。

铅染毒大鼠血铅与肝脏中16种元素的相关性研究

目的通过对16种无机元素定量分析,探讨铅染毒大鼠血铅含量与肝脏中多元素变化的关系。方法选取健康的4周龄雄性SD大鼠75只,随机分成25组,采取"大剂量范围,小浓度间隔"的染毒方法。实验开始后,于第40、80和120天分别从各组随机选取1只大鼠,经乙醚麻醉后股动脉取血,并收集肝脏待测。用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定血铅和肝脏中16种元素的含量。结果血铅、肝铅含量和灌胃剂量呈良好的剂量趋势;血铅和肝铅在120天染毒组线性关系较差;血铅与肝内多种元素存在相关性;血铅蓄积,导致肝内非铅元素比的改变。结论短、中期的铅暴露,血铅可反应肝铅的蓄积;血铅的蓄积,扰乱了肝脏的正常代谢,导致非铅元素浓度及比值发生改变(P<0.05)。

29种元素含量及比值与大鼠铅蓄积水平及铅暴露时间相关性研究

目的:通过对29种无机元素定量分析,探讨非铅元素含量及比值与铅染毒大鼠体内铅蓄积水平及铅暴露时间之间的关系。方法:选取健康的4周龄雄性SD大鼠75只,随机分成25组,采取"大剂量范围,小浓度间隔"的短、中、长期染毒方法。在实验开始后,第40、80、120天分别从各组随机选取1只大鼠,经乙醚麻醉后股动脉取血,并留发样待测。用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定血和毛发中的29种元素含量。结果:血铅、发铅含量和灌胃剂量呈良好的剂量趋势;血铅和发铅在不同染毒时间有差异,随着染毒时间的延长,含量增加;血铅和发铅存在相关性,但随着时间相关性变差;铅与多种元素之间存在相关性;某些元素对的比值在40,80和120天有统计学差异。结论:血铅和发铅含量均与灌胃剂量和染毒时间呈现良好相关关系;非铅元素浓度及其比值有可能被用作估算生命体铅蓄积水平的综合指标;铅暴露时间延长会导致某些非铅元素对比值的变化;发铅可能更适合用作铅染毒的生物标志物。