基于汉逊酵母 HPV68b L1蛋白的 VLPs免疫学效果研究

目的：对重组表达HPV68 b L1蛋白的汉逊酵母工程菌进行高密度发酵，并对L1蛋白形成的类病毒颗粒（virus-like particles，VLPs）进行纯化、鉴定及免疫学效果评价。方法 HPV68b L1的酵母工程菌经过发酵，系列纯化和颗粒重构后获得VLPs抗原，对该抗原进行蛋白纯度、颗粒形态及免疫原性等检定，与铝佐剂吸附后免疫动物，利用假病毒体外中和试验评价其对HPV68 b型及HPV68a型的保护效果。结果发酵后的工程菌经过纯化和颗粒重构后，获得纯度大于95％的VLPs，电镜结果显示，其颗粒形态均一，大小与天然病毒颗粒接近。假病毒体外中和试验结果显示， HPV68b型VLPs抗原可诱导小鼠体内产生较高滴度的中和抗体，同时对HPV68a型也具有一定的交叉保护作用。结论验证了重组HPV68 b型VLPs蛋白用于疫苗生产的可行性，可作为多价HPV疫苗的组分。

不同形态GⅡ．4型诺如病毒类病毒颗粒的制备及免疫原性研究

目的采用汉逊酵母系统重组表达GⅡ．4型诺如病毒（norovirus，NoV）主要结构蛋白VPl，对纯化后获得的两种不同形态类病毒颗粒（virus-1ikeparticles，VLPs）分别进行理化性质鉴定和免疫效果评价。方法将表达GlI．4型VPl蛋白的重组工程菌高密度发酵．纯化后获得两种不同形态的VLPs；通过Westernblot、SEC．HPLC、动态光散射法和透射电镜等方法检测两种VLPs的理化性质。将两种VLPs分别免疫BALB／c小鼠，比较免疫血清对两种颗粒的抗体结合性和组织血清抗原（histo-blood group antigen，HBGA）．VLPs阻断水平。结果纯化后可获得两种不同直径的VLPs，颗粒均一度良好；动态光散射测定两种颗粒水合粒径分别为53．98nm和45．18nm。两种VLPs与HBGA受体结合类型和程度相似，大颗粒VLPs的免疫血清对两种颗粒的结合性和HBGA-VLPs阻断抗体水平均高于小颗粒VLPs，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论汉逊酵母表达NoVGⅡ．4VPl蛋白，可形成形态不同的两种重组VLPs，两种VLPs具有相似的理化性质和免疫原性，但大粒径VLPs可能更适合作为重组人诺如病毒疫苗的抗原组分。

中国女性宫颈人乳头瘤病毒感染型别分布区域性特征的Meta分析

目的：了解中国女性宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染状况及型别分布特征。方法以PubMed、中国知网、万方数据库为检索源，系统检索2004—2013年公开发表的中英文文献，摘录相关信息。分别将全国以及7个地理区域 HPV 感染研究的统计数据进行数据分析。结果符合纳入标准的数据覆盖全国所有省份和地区，样本量共计661658例，年龄范围16～87岁。共纳入文献245篇，我国女性人群宫颈 HPV 感染率为25.0％，感染率最高的6个高危型别依次为 HPV16、HPV52、HPV58、HPV18、HPV33和 HPV31。我国所有地区以 HPV16为主要感染型别，HPV52和 HPV58的检出率明显高于 HPV18，而 HPV35和 HPV45检出率较低。结论 HPV 感染型别分布有明显地域性，我国的统计数据与世界范围的统计数据有明显差异。我国7个地理区域间感染型别分布也有差异。

重组诺如病毒GⅠ．1和GⅡ．4型类病毒颗粒免疫效果初步评价

目的初步评价基于汉逊酵母表达系统的重组诺如病毒（norovirus，NoV）GⅠ.1和GⅡ.4型VP1蛋白类病毒颗粒（virus-like particles，VLPs）的免疫效果。方法将纯化后VLPs经SDS-PAGE和Western blot分析及鉴定，透射电镜观察颗粒形态，动态光散射仪分析颗粒粒径大小及分布情况。将GⅠ.1和GⅡ.4型VLPs按照不同的免疫方案免疫BALB/c小鼠，组织血清抗原（histo-blood group antigen，HBGA）-VLPs阻断试验检测50%阻断滴度（50% of blocking titer，BT50）。结果纯化后重组GⅠ.1和GⅡ.4型VP1蛋白纯度大于90%，Western blot分析可见特异性条带。VLPs直径为30～50 nm，界限清晰，颗粒直径与天然病毒颗粒接近，颗粒大小分布均一。免疫小鼠血清中佐剂组BT50明显高于无佐剂组。结论应用含铝佐剂的GⅠ.1和GⅡ.4型VP1 VLPs免疫小鼠，诱生了较好的HBGA阻断抗体，可作为诺如病毒疫苗的组分抗原。

cGAMP可显著增强针对诺如病毒（GⅡ.4）病毒样颗粒抗原的体液免疫应答

目的 评价环二核苷酸（cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate, cGAMP）在诺如病毒（GⅡ.4） 病毒样颗粒（virus like particles,VLPs）疫苗研发中作为佐剂的免疫增强效应.方法 将cGAMP和铝盐佐剂（氢氧化铝）分别与不同剂量诺如病毒（GⅡ.4）VLPs抗原配伍,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过测定免疫血清中抗VLPs特异性IgG抗体及其亚型,检测阳性血清中模拟中和抗体水平,比较两种佐剂对VLPs抗原免疫效果的促进作用.结果 以cGAMP为佐剂,VLPs可诱导较高的血清特异性IgG抗体应答;用相同剂量VLPs抗原免疫,配伍cGAMP佐剂诱导的IgG抗体应答水平明显高于铝佐剂,cGAMP配伍低剂量VLPs加强免疫后诱导的IgG抗体水平与铝佐剂配伍高剂量VLPs相当,模拟中和抗体水平与血清IgG水平相对应.结论 cGAMP可显著增强针对诺如病毒（GⅡ.4）VLPs的特异性体液免疫应答,其佐剂活性高于传统铝佐剂,是一种有望应用于疫苗研发的新型佐剂.

重组诺如病毒GⅡ．17型类病毒颗粒免疫学效果初步评价

目的 评价重组诺如病毒（Norovirus,NoV）GⅡ.17基因型VP1蛋白类病毒颗粒（virus like particle,VLP）的免疫学效果.方法 对纯化后的GⅡ.17型VP1 VLP进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,利用透射电镜和动态光散射对VLP大小、形态及粒径分布情况等进行检测,将GⅡ.17型VP1 VLP与含铝佐剂吸附后免疫BALB/c小鼠,利用酶联免疫吸附试验（enzyme linked im-munosorbent assay,ELISA）和组织血型抗原（histo-blood group antigen,HBGA）-VLP阻断试验检测小鼠血清特异性抗体水平和阻断抗体活性,并分析GⅡ.17型VP1 VLP蛋白免疫后血清与GⅠ.1和GⅡ.4 VP1 VLP蛋白的交叉反应和交叉阻断情况.结果 纯化后的重组NoV GⅡ.17型VP1 VLP蛋白纯度大于90％,Western blot检测到特异性条带.VLP直径在30-50 nm之间,形态良好,分布均匀,颗粒形态与天然病毒类似.免疫小鼠血清可检测到高滴度特异性抗体,且对GⅠ.1和GⅡ.4型VP1 VLP具有一定程度的交叉反应,但是无交叉阻断作用.结论 应用含铝佐剂的GⅡ.17型VP1 VLP免疫小鼠,可诱发较高滴度的HBGA阻断抗体,可作为诺如病毒疫苗的候选靶抗原.