肺炎球菌表面黏附素A和表面膜蛋白A的研究进展

肺炎球菌表面黏附素A(Pneumococcal surface adhesin A,PsaA)为脂蛋白,属于ABC型转运蛋白复合物(ATPbinding cassette transporter),存在于各型肺炎球菌中,是其重要的毒力因子和黏附因子,编码基因高度保守,具有转运Mn2+及黏附功能。肺炎球菌表面膜蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA)是与其毒力相关的一种重要的表面抗原,在目前发现的所有临床分离的肺炎球菌中几乎均存在,其编码基因变异性较大。PsaA和PspA均为肺炎球菌的保护性抗原和新型肺炎球菌疫苗的研发热点之一。本文就这两种蛋白的结构、功能、免疫学特性及应用的研究进展作一综述。

肺炎球菌表面蛋白A的原核表达及其作为多糖结合疫苗载体的可行性

目的原核表达肺炎球菌表面蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA),并探讨其作为多糖结合疫苗候选载体的可行性。方法合成PspA基因,定向克隆至pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pET-30a-rPspA,转化E.coli Sta(rDE3)菌株,IPTG诱导表达。表达产物经Ni离子亲和层析纯化后,经Western blot鉴定。取破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)及纯化的rPspA,分别与A群脑膜炎球菌多糖(Group A meningococcal capsular polysaccharide,GAMP)通过溴化氰活化法进行偶联,获得rPspA-GAMP与TT-GAMP多糖蛋白结合物,对其进行纯化及检定。多糖结合物分别以滴鼻和肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,评价其诱发的体液免疫和黏膜免疫水平。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定构建正确;表达产物主要以可溶形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%,经纯化后纯度可达90%,可与His单抗特异性结合;肌肉注射途径显示,两种蛋白载体的结合物均能诱发较高水平的体液免疫,不同载体间差异无统计学意义(P>0.05);滴鼻途径显示,载体蛋白rPspA的结合物刺激产生sIgA的能力优于传统载体TT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论原核表达并纯化了rPspA,其具有新型多糖蛋白载体的潜力,也可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选载体。

拟多形假丝酵母的双营养缺陷型工程化改造及鉴定

目的以拟多形假丝酵母菌（ATCC26012）为材料，构建遗传稳定性良好的尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型工程化菌株。方法利用物化及基因工程等方法对拟多形假丝酵母菌株的染色体进行改造，将ura3基因和leu2基因进行定向诱变，以获得尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型突变菌株，并对其进行生物学鉴定，包括菌株的遗传稳定性、基因序列及生理生化特征分析等。结果筛选得到尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型突变菌株，鉴定结果显示该菌株遗传稳定性良好，标志基因均发生定向改变，生理生化结果显示该菌株能利用多种碳源和氮源，且生长状况良好。结论拟多形假丝酵母的双营养缺陷型工程化改造为进一步研究该菌株的遗传学奠定了基础，为多价蛋白组成类病毒颗粒的外源表达提供了工程化宿主。进而，为复杂疫苗抗原的重组表达和功能研究提供了技术手段。